高考生物查漏补缺复习精品微生物的实验室培养人教版选修省公共课一等奖全国赛课获奖课件.pptx

专题专题2:2:微生物培养与应用微生物培养与应用第1页微生物包含微生物包含原核生物界原核生物界原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界一、基础知识：一、基础知识：(一一)微生物微生物是一切肉眼看不见或看不清楚微小是一切肉眼看不见或看不清楚微小生物总称生物总称第2页病毒：动物病毒、植物病毒、细菌病毒病毒：动物病毒、植物病毒、细菌病毒第3页病毒病毒第4页SARS冠状病毒、冠状病毒、禽流感病毒禽流感病毒第5页朊病毒（蛋白质病毒）朊病毒（蛋白质病毒）第6页病毒增殖：病毒增殖：第7页常见三种细菌经典形态常见三种细菌经典形态球菌、杆菌、弧菌球菌、杆菌、弧菌原核生物：一藻二菌三体原核生物：一藻二菌三体第8页细菌营养类型细菌营养类型n依据细菌所利用依据细菌所利用能源和碳源能源和碳源不一样，将不一样，将细菌分为两大营养类型。细菌分为两大营养类型。n自养菌自养菌:n异养菌异养菌:腐生菌、寄生菌腐生菌、寄生菌光能自养型光能自养型:光合细菌光合细菌化能自养型化能自养型:硝化细菌硝化细菌,铁细菌铁细菌,硫细菌硫细菌一、细菌一、细菌第9页基本结构：基本结构：特殊结构：特殊结构：细胞壁、细胞膜、细胞质、拟核细胞壁、细胞膜、细胞质、拟核荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等第10页细胞壁：肽聚糖；与细菌致病能力相关；溶菌酶作用对象。荚膜荚膜：细胞壁外多糖类物质：细胞壁外多糖类物质或或称为称为粘液层粘液层；荚膜与致病菌致病力相荚膜与致病菌致病力相关。（如关。（如S型肺炎双球菌）型肺炎双球菌）鞭毛鞭毛：主要用于运动，数目多少不一。：主要用于运动，数目多少不一。1.细菌结构细菌结构第11页纤毛纤毛：比鞭毛短、直、细，主要用于：比鞭毛短、直、细，主要用于细菌之间粘附或附着于宿主细胞。细菌之间粘附或附着于宿主细胞。菌毛菌毛：数量少，数量少，参加细菌接合，也是噬菌体入参加细菌接合，也是噬菌体入侵受体。侵受体。质粒质粒：环状：环状DNA小分子，经过接合作小分子，经过接合作用，质粒能够在不一样细胞之间迁移，用，质粒能够在不一样细胞之间迁移，使质粒上耐药性基因能够在细菌之间传使质粒上耐药性基因能够在细菌之间传输，质粒可用作基因工程载体。输，质粒可用作基因工程载体。第12页细胞膜、细胞膜、拟核、拟核、核糖体核糖体3.细菌生殖方式：细菌生殖方式：2.细菌形态：细菌形态：4.细菌休眠体细菌休眠体芽孢芽孢杆菌、球菌、弧菌、杆菌、球菌、弧菌、螺旋菌螺旋菌分裂生殖分裂生殖第13页 有些细菌在一定条件下，细胞里面形成一个有些细菌在一定条件下，细胞里面形成一个椭圆形休眠体，叫做椭圆形休眠体，叫做芽孢芽孢。芽孢壁很厚，。芽孢壁很厚，对干对干旱、低温、高温等恶劣环境有很强抵抗力旱、低温、高温等恶劣环境有很强抵抗力。芽。芽孢又小又轻，能够随风飘散。当环境适宜（如孢又小又轻，能够随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）时候，芽孢又能够萌发，形温度、水分适宜）时候，芽孢又能够萌发，形成一个细菌成一个细菌.第14页芽孢芽孢休眠体，不是繁殖体休眠体，不是繁殖体第15页孢子孢子生殖细胞生殖细胞第16页5.细菌群体特征细菌群体特征n由由单个微生物单个微生物在适宜固体培养基表面或在适宜固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度后，形成肉内部生长、繁殖到一定程度后，形成肉眼可见、有一定形态结构眼可见、有一定形态结构子细胞生长群子细胞生长群体体叫叫菌落菌落。n菌落是判定菌种重菌落是判定菌种重要依据要依据。菌落菌落第17页第18页菌菌落落大大小小、形形状状、边边缘缘情情况况、质质地地、光光泽泽、颜颜色色及及透透明明度度等等是是微微生生物物分分类类、判判定定主要依据。主要依据。菌菌苔苔：固固体体培培养养基基表表面面众众多多菌菌落落连连成成一片，呈片状一片，呈片状，这就是，这就是菌苔。菌苔。平平板板：即即培培养养平平板板，指指盛盛有有固固体体培培养养基平皿基平皿第19页各种类各种类型细菌型细菌菌落菌落第20页二、放线菌二、放线菌1 1、结构：、结构：单细胞原核单细胞原核分支状菌丝（基内菌丝、气生菌丝）分支状菌丝（基内菌丝、气生菌丝）第21页如：链霉素、土霉素、四环素、如：链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、红霉素、庆大霉素氯霉素、红霉素、庆大霉素 微生物中发觉了几千种抗生素，微生物中发觉了几千种抗生素，其中其中2/32/3是由放线菌产生。是由放线菌产生。应用应用:第22页三、真菌（真核细胞）三、真菌（真核细胞）1.单细胞真菌单细胞真菌酵母菌：酵母菌：酵母菌、霉菌、大型真菌（蘑菇、木耳等）酵母菌、霉菌、大型真菌（蘑菇、木耳等）第23页三、真菌（真核细胞）三、真菌（真核细胞）2.丝状真菌丝状真菌霉菌霉菌第24页直立菌丝直立菌丝 营养菌丝营养菌丝腐生生活腐生生活第25页各种类型霉各种类型霉菌菌落菌菌落第26页酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌青霉青霉第27页3.大型真菌大型真菌第28页各种类型放各种类型放线菌菌落线菌菌落各种类型酵各种类型酵母菌菌落母菌菌落 第29页n n四大类微生物区分关键点四大类微生物区分关键点n n菌落形态：菌落形态：1.1.若菌落表面湿润若菌落表面湿润薄而小薄而小细菌细菌厚而大厚而大酵母菌酵母菌2.2.若菌落表面干燥若菌落表面干燥密而小密而小放线菌放线菌松而大松而大霉菌霉菌 第30页细菌：湿润，粘稠，易挑起细菌：湿润，粘稠，易挑起放线菌：干燥，多皱，难挑起，菌落较小，多放线菌：干燥，多皱，难挑起，菌落较小，多有色素有色素酵母菌：湿润，粘稠，易挑起，表面光华，酵母菌：湿润，粘稠，易挑起，表面光华，比细菌菌落大而厚比细菌菌落大而厚.霉菌：菌丝细长，菌落疏松，成绒毛状、蜘蛛霉菌：菌丝细长，菌落疏松，成绒毛状、蜘蛛网状、棉絮状，无固定大小，多有光泽，网状、棉絮状，无固定大小，多有光泽，不易挑起。不易挑起。不一样微生物菌落特点不一样微生物菌落特点同类微生物同类微生物不一样物种，不一样物种，菌落特点也菌落特点也不相同。不相同。第31页原生生物界：原生生物界：藻类、原生动物类、原生菌类藻类、原生动物类、原生菌类草履虫第32页微微生生物物种种类类有细胞结构没有细胞结构原核生物原核生物（原核细胞组成）真核微生物真核微生物（真核细胞组成）真菌真菌原生生物原生生物病毒病毒第33页微生物共同特点微生物共同特点（小、多、快、强、广小、多、快、强、广）n（1 1）体积小，面积大）体积小，面积大 （细胞以微米、（细胞以微米、纳米来计算）纳米来计算）n（2 2）吸收多，转化快）吸收多，转化快n（3 3）生长旺，繁殖快）生长旺，繁殖快 如大肠杆菌如大肠杆菌n（4 4）适应强，易变异）适应强，易变异 如感冒病毒如感冒病毒n（5 5）分布广，种类多）分布广，种类多第34页（二）培养基（二）培养基 人们按照微生物对营养物质不人们按照微生物对营养物质不一样需求，一样需求，配制出供其生长繁殖营配制出供其生长繁殖营养养基质。基质。第35页按成份分按成份分按功效分按功效分按物理状态分按物理状态分 培养基类型培养基类型合成培养基合成培养基天然培养基天然培养基基本培养基基本培养基选择培养基选择培养基判别培养基判别培养基固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基半固体培养基半固体培养基分类：分类：第36页 依据细胞生存所需物质种类和数量，用人工依据细胞生存所需物质种类和数量，用人工方法模拟合成。方法模拟合成。合成培养基主要成份是氨基酸、维生素、碳合成培养基主要成份是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。优点：优点：标准化生产，组分和含量相对固定标准化生产，组分和含量相对固定;成成本低本低 缺点：缺点：缺乏一些成份，不能完全满足体外细缺乏一些成份，不能完全满足体外细胞生长需要。胞生长需要。A A.合成培养基合成培养基:天然培养基与合成培养基天然培养基与合成培养基第37页血清中含有：血清中含有：各种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）各种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）各种金属离子；各种金属离子；激素；激素；促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原蛋白等。原蛋白等。各种生长因子各种生长因子转移蛋白转移蛋白不明成份不明成份 人工合成培养基只能维持细胞生存，要想人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量天然培使细胞生长和繁殖，还需补充一定量天然培养基养基（如血清）。（如血清）。半合成培养基半合成培养基第38页 天然培养基天然培养基:有血清、血浆、和组织有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。优点：优点：营养成份丰富，培养效果好营养成份丰富，培养效果好缺点：缺点：起源受限起源受限;成份复杂，成份复杂，影响对一影响对一些试验产物提取和试验结果分析些试验产物提取和试验结果分析;易发易发生支原体污染生支原体污染。B B.天然培养基天然培养基：第39页A.判别培养基判别培养基利用细菌分解糖类和蛋白质能力及其代谢利用细菌分解糖类和蛋白质能力及其代谢产物不一样，在培养基中产物不一样，在培养基中加入特定作用底物和加入特定作用底物和指示剂指示剂，观察细菌生长过程中分解底物所释放，观察细菌生长过程中分解底物所释放不一样产物，经过指示剂反应不一样来判别细不一样产物，经过指示剂反应不一样来判别细菌。比如菌。比如伊红伊红-美蓝培养基美蓝培养基判别水中判别水中大肠杆菌大肠杆菌(带金属光泽深紫色菌落带金属光泽深紫色菌落）；又如：；又如：淀粉培养基淀粉培养基可经过培养基上产生淀粉水解圈，判别可经过培养基上产生淀粉水解圈，判别产淀粉产淀粉酶菌株酶菌株 判别培养基与选择培养基判别培养基与选择培养基第40页B.选择培养基选择培养基在培养基中加入在培养基中加入抑制剂抑制剂，去抑制标本中，去抑制标本中杂菌生长，有利于对所选择细菌种类生长。杂菌生长，有利于对所选择细菌种类生长。如：利用以如：利用以纤维素或石蜡油纤维素或石蜡油为唯一碳源选择为唯一碳源选择培养基，可分离出培养基，可分离出分解纤维素或石蜡油微生分解纤维素或石蜡油微生物。物。又如：加入又如：加入青霉素、四环素或链霉素青霉素、四环素或链霉素选选择培养基，能够择培养基，能够抑制细菌和放线菌抑制细菌和放线菌生长，而生长，而将将酵母菌和霉菌分离酵母菌和霉菌分离出来。出来。判别培养基与选择培养基判别培养基与选择培养基第41页 选择培养基加入青霉素培养基加入青霉素培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐培养基加入高浓度食盐培养基:分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源无氮培养基不加氮源无氮培养基:分离固氮菌分离固氮菌不加有机物培养基不加有机物培养基:分离自养型微生物分离自养型微生物第42页A A.液体培养基：液体培养基：表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长固体培养基与液体培养基固体培养基与液体培养基第43页B固体培养基固体培养基：菌落，菌苔：菌落，菌苔第44页B.半固体培养基半固体培养基：无动力无动力 有动力有动力(弥散弥散)(是否运动是否运动)第45页培养基用途培养基用途液体培养基：液体培养基：固体培养基：固体培养基：半固体培养基：半固体培养基：天然培养基：天然培养基：合成培养基：合成培养基：选择培养基：选择培养基：判别培养基：判别培养基：增菌增菌、工业生产、工业生产分离、判定、计数、保藏分离、判定、计数、保藏观察运动、分类、计数观察运动、分类、计数工业生产工业生产分类、判定分类、判定分离出特定微生物分离出特定微生物判别不一样种类微生物判别不一样种类微生物第46页培养基成份培养基成份各种培养基共有成份各种培养基共有成份水水、碳源碳源、氮源氮源、无机盐无机盐等等营养物质。营养物质。不一样微生物所需要特殊成份不一样微生物所需要特殊成份微生物生长对微生物生长对pH、特殊营养物质特殊营养物质,以及以及氧氧气气、二氧化碳二氧化碳、渗透压渗透压等要求。等要求。比如比如:生长因子生长因子(即细菌生长必需，而本身不即细菌生长必需，而本身不能合成化合物能合成化合物,如维生素、一些氨基酸、嘌呤、如维生素、一些氨基酸、嘌呤、嘧啶嘧啶)第47页（三）无菌技术（三）无菌技术1.1.无菌技术概念无菌技术概念 无菌技术泛指在培养微生物操作无菌技术泛指在培养微生物操作中，全部预防杂菌污染方法。中，全部预防杂菌污染方法。成功地培养微生物关键。成功地培养微生物关键。第48页（）（）消毒定义：消毒定义：利用较为利用较为温和化学或物理方法温和化学或物理方法，杀死，杀死大部份致病微生物大部份致病微生物过程。过程。分为分为高程度消毒高程度消毒 、中程度消毒中程度消毒、低程低程度消毒度消毒三种方式。三种方式。2.2.消毒与灭菌概念及二者区分消毒与灭菌概念及二者区分 第49页（2 2）灭菌定义：）灭菌定义：以以强烈化学剂强烈化学剂或或物理方法物理方法毁灭毁灭全部全部微生物微生物，包含全部细菌繁殖体、芽孢、，包含全部细菌繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而到达完全无菌之过程。霉菌及病毒，而到达完全无菌之过程。灭菌与消毒技术是微生物相关工作灭菌与消毒技术是微生物相关工作中最普通也是最主要技术。中最普通也是最主要技术。第50页1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min 或或80 80 下煮下煮15min15min3 3、化学药剂消毒法、化学药剂消毒法:用用70%70%酒精、新酒精、新 洁尔灭等进行皮肤消毒洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水氯气消毒水源源4 4、紫外线消毒、紫外线消毒(1)消毒方法：消毒方法：3.3.惯用消毒与灭菌方法惯用消毒与灭菌方法第51页1 1、灼烧灭菌、灼烧灭菌(2)灭菌方法：灭菌方法：第52页2 2、干热灭菌：、干热灭菌：160-170 160-170 下加热下加热1-2h1-2h。3 3、高压蒸汽灭菌：、高压蒸汽灭菌：100kPa100kPa、121 121 下下维持维持15-30min.15-30min.第53页 最惯用灭菌方法是最惯用灭菌方法是高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌，它能它能够杀灭全部生物，包含最耐热一些微生物够杀灭全部生物，包含最耐热一些微生物休眠体，同时能够基本保持培养基营养成休眠体，同时能够基本保持培养基营养成份不被破坏。份不被破坏。有些玻璃器皿也可采取有些玻璃器皿也可采取高温干热灭菌高温干热灭菌。为了预防杂菌，尤其是空气中杂菌污染，为了预防杂菌，尤其是空气中杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采取适宜塞子塞口，试管及玻璃烧瓶都需采取适宜塞子塞口，通常采取通常采取棉花塞棉花塞，也可采取各种金属、塑，也可采取各种金属、塑料及硅胶帽，它们料及硅胶帽，它们只可只可让空气经过，而空让空气经过，而空气中其它微生物不能通过。气中其它微生物不能通过。培养基分装完成以后，在管口上培养基分装完成以后，在管口上加一个棉塞。棉塞能预防杂菌污加一个棉塞。棉塞能预防杂菌污染，确保通气良好，加棉塞时，染，确保通气良好，加棉塞时，应使棉塞长度应使棉塞长度23在试管口内，在试管口内，如上图所表示。如上图所表示。加棉塞加棉塞第54页分类分类定义定义方法方法灭菌法灭菌法杀灭一切微生杀灭一切微生物物物理法：热力、辐射、物理法：热力、辐射、微波、等离子体微波、等离子体化学法：醛类、烷化剂化学法：醛类、烷化剂高程度高程度消毒法消毒法杀灭一切致病杀灭一切致病微生物微生物紫外线、微波、热力、紫外线、微波、热力、含氯剂、臭氧等含氯剂、臭氧等中程度中程度消毒法消毒法n杀灭除芽孢外致病微生物超声波、碘类、醇类、超声波、碘类、醇类、酚类酚类低程度低程度消毒法消毒法杀灭细菌繁殖杀灭细菌繁殖体、亲脂病毒体、亲脂病毒单链季胺盐、双胍类、单链季胺盐、双胍类、中草药、金属离子中草药、金属离子无菌技术无菌技术第55页 定义定义n惯用方法n 微生物培养和组培中应用消消毒毒n使用较为温和物理或化学方法杀死物体表面或内部部分微生物煮沸煮沸玻璃仪器玻璃仪器紫外线紫外线n试验室、操作台、衣物等酒精溶液酒精溶液手、外植体等手、外植体等次氯酸钠溶液次氯酸钠溶液等等外植体外植体灭灭菌菌n使用强烈理化原因杀死物体内外全部微生物，包含芽孢和孢子高压蒸汽高压蒸汽培养基、玻璃仪器、培养基、玻璃仪器、棉塞、牛皮纸等棉塞、牛皮纸等灼烧灼烧接种环、涂布器接种环、涂布器干热干热玻璃仪器玻璃仪器第56页微生物试验室培养基本操作程序微生物试验室培养基本操作程序1 1、培养基配制、培养基配制2 2、器具、培养基灭菌、器具、培养基灭菌3 3、倒平板、倒平板4 4、微生物接种、微生物接种5 5、恒温箱中培养、恒温箱中培养6 6、菌种保留、菌种保留第57页1.1.无菌技术除了用来预防试验室培养无菌技术除了用来预防试验室培养物被其它外来微生物污染外，还有什么物被其它外来微生物污染外，还有什么目标？目标？答：无菌技术还能有效防止操作者答：无菌技术还能有效防止操作者本身被微生物感染。本身被微生物感染。第58页2.2.请你判断以下材料或用具是否需要请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。假如需要，请选择适当消毒或灭菌。假如需要，请选择适当方法。方法。（1 1）培养细菌用培养基与培养皿培养细菌用培养基与培养皿（2 2）玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（3 3）试验操作者双手试验操作者双手答：（答：（1）、（）、（2）需要灭菌；（）需要灭菌；（3）需）需要消毒。要消毒。第59页三、试验操作三、试验操作 （一）制备牛肉膏蛋白胨培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于用于培养细菌培养细菌）第60页1 1计算计算、称量称量2 2溶化溶化3 3调调pHpH：pH7.6pH7.64 4过滤：这一步能够省去。过滤：这一步能够省去。5 5分装：分装过程中注意不要使培分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引发污染。分装锥形瓶量以棉塞而引发污染。分装锥形瓶量以不超出不超出锥形锥形瓶容积二分之一为宜。瓶容积二分之一为宜。6 6加塞加塞7 7包扎包扎操作操作步骤步骤第61页 8 8灭菌灭菌:将将100ml100ml培养基用玻棒转移至三培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100100kPakPa、温度为温度为121121，灭菌，灭菌15153030minmin。将培养皿用旧报纸包裹，放将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在入干热灭菌箱内，在160160170 170 下下灭菌灭菌2 2h h。第62页 9 9倒平板倒平板:待培养基冷却到待培养基冷却到50 50 左右时，左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见书本）见书本）2 2d d后观察平板，无杂菌污染后观察平板，无杂菌污染才可用来接种才可用来接种.10 10无菌检验：无菌检验：将灭菌培养基放入将灭菌培养基放入3737温室中培温室中培养养24482448小时，以检验灭菌是否彻小时，以检验灭菌是否彻底。底。第63页1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，才能用来倒平板。你用什么左右时，才能用来倒平板。你用什么方法来预计培养基温度？方法来预计培养基温度？答：答：能够用手触摸盛有培养基锥能够用手触摸盛有培养基锥形瓶，感觉锥形瓶温度下降到刚才不形瓶，感觉锥形瓶温度下降到刚才不烫手时，就能够进行倒平板了。烫手时，就能够进行倒平板了。2.2.为何需要使锥形瓶瓶口经过火焰为何需要使锥形瓶瓶口经过火焰？答：经过灼烧灭菌，预防瓶口微答：经过灼烧灭菌，预防瓶口微生物污染培养基。生物污染培养基。第64页3.3.平板冷凝后，为何要将平板倒置？平板冷凝后，为何要将平板倒置？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后培养基表面湿度也比较高，珠，凝固后培养基表面湿度也比较高，将平板倒置，将平板倒置，既能够使培养基表面水分既能够使培养基表面水分更加好地挥发，又能够预防皿盖上水珠更加好地挥发，又能够预防皿盖上水珠落入培养基，造成污染。落入培养基，造成污染。也能够防止空气中杂菌对培养基污染也能够防止空气中杂菌对培养基污染.第65页4.4.在倒平板过程中，假如不小心将在倒平板过程中，假如不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间部位，培养基溅在皿盖与皿底之间部位，这个平板还能用来培养微生物吗？这个平板还能用来培养微生物吗？为何？为何？答：空气中微生物可能在皿盖与皿答：空气中微生物可能在皿盖与皿底之间培养基上滋生，所以最好不底之间培养基上滋生，所以最好不要用这个平板培养微生物。要用这个平板培养微生物。第66页（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌接种方法有：接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法和稀释涂布平板法微生物接种技术：微生物接种技术：第67页 平板划线操作方法平板划线操作方法交叉划线法交叉划线法连续划线法连续划线法 第68页51234第69页平板划线操作平板划线操作第70页第71页一旦划破，会造成划线不均匀，难以到一旦划破，会造成划线不均匀，难以到达分离单菌落目标；达分离单菌落目标；二是存留在划破处单个细胞无法形成规二是存留在划破处单个细胞无法形成规矩菌落，菌落会沿着划破处生长，会形矩菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状菌落。成一个条状菌落。第72页第73页 1.1.为何在操作第一步以及每次划线之前都要为何在操作第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，依然需要灼灼烧接种环？在划线操作结束时，依然需要灼烧接种环吗？为何？烧接种环吗？为何？答：操作答：操作第一步灼烧接种环是为了防止接种第一步灼烧接种环是为了防止接种环上可能存在微生物污染培养物；环上可能存在微生物污染培养物；每次划线前灼每次划线前灼烧接种环是为了烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上杀死上次划线结束后，接种环上残留菌种，残留菌种，使下一次划线时，接种环上菌种直接使下一次划线时，接种环上菌种直接起源于上次划线末端，从而经过划线次数增加，起源于上次划线末端，从而经过划线次数增加，使每次划线时菌种数目逐步降低，方便得到菌落。使每次划线时菌种数目逐步降低，方便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留菌种，防止细菌污染环境和感染操作者。留菌种，防止细菌污染环境和感染操作者。第74页 2.2.在灼烧接种环之后，为何要等其在灼烧接种环之后，为何要等其冷却后再进行划线？冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.3.在作第二次以及其后划线操作时，在作第二次以及其后划线操作时，为何总是从上一次划线末端开始划线为何总是从上一次划线末端开始划线？答：答：划线后，线条末端细菌数目比线条划线后，线条末端细菌数目比线条起始处要少，每次从上一次划线末端开起始处要少，每次从上一次划线末端开始，始，能使细菌数目伴随划线次数增加而能使细菌数目伴随划线次数增加而逐步降低，最终能得到由单个细菌繁殖逐步降低，最终能得到由单个细菌繁殖而来菌落。而来菌落。第75页稀释涂布平板法稀释涂布平板法把菌液进行一系列梯度稀释把菌液进行一系列梯度稀释,然后将不一样稀释度然后将不一样稀释度菌液分别涂布到固体培养基上进行培养。在菌液分别涂布到固体培养基上进行培养。在稀释度大菌液里稀释度大菌液里,就会出现单个菌体形成就会出现单个菌体形成菌落菌落第76页第77页第78页 涂布平板全部操作都应在火焰附涂布平板全部操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释近进行。结合平板划线与系列稀释无菌操作要求，想一想，第无菌操作要求，想一想，第2 2步应怎步应怎样进行无菌操作？样进行无菌操作？应从操作各个细节确保应从操作各个细节确保“无菌无菌”。比如，酒精灯与培养皿距离要适当、比如，酒精灯与培养皿距离要适当、吸管头不要接触任何其它物体、吸吸管头不要接触任何其它物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。管要在酒精灯火焰周围等等。第79页微生物恒温培养微生物恒温培养微生物恒温培养微生物恒温培养微生物恒温培养微生物恒温培养第80页微生物恒温培养微生物恒温培养微生物恒温培养微生物恒温培养第81页菌种保留菌种保留 1 1、暂时保藏：、暂时保藏：接种到固体斜面培接种到固体斜面培养基，菌落长成后养基，菌落长成后置于置于44冰箱保留。冰箱保留。2 2、长久保留：、长久保留：甘油冷冻管藏法甘油冷冻管藏法当培养基冷却至当培养基冷却至50左左右时，将试管带棉塞一端右时，将试管带棉塞一端搁在一根木棒上。搁置长搁在一根木棒上。搁置长度要适当，使培养基形成度要适当，使培养基形成斜面长度不超出试管总长斜面长度不超出试管总长二分之一。二分之一。第82页四、课题结果评价四、课题结果评价（一）培养基制作是否合格（一）培养基制作是否合格 假如未接种培养基在恒温箱中保温假如未接种培养基在恒温箱中保温1 12 d2 d后无菌落生长，说明培养基制后无菌落生长，说明培养基制备是成功，不然需要重新制备。备是成功，不然需要重新制备。（二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求 假如培养基上生长菌落颜色、形状、假如培养基上生长菌落颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落特点，则说明接种操特点，则说明接种操作是符作是符第83页合要求；假如培养基上出现了其它菌落，合要求；假如培养基上出现了其它菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未到达要则说明接种过程中，无菌操作还未到达要求，需要分析原因，再次练习。求，需要分析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致观察与统计（三）是否进行了及时细致观察与统计 培养培养12h12h与与24h24h后大肠杆菌菌落大小后大肠杆菌菌落大小会有显著不一样，及时观察统计同学会发会有显著不一样，及时观察统计同学会发觉这一点，并能观察到其它一些细微改变。觉这一点，并能观察到其它一些细微改变。这一步要求主要是培养学生良好科学态度这一步要求主要是培养学生良好科学态度与习惯。与习惯。第84页【典例解析典例解析】例例1 1关微生物营养物质叙述中，正确关微生物营养物质叙述中，正确A.A.是碳源物质不可能同时是氮源是碳源物质不可能同时是氮源 B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量C.C.除水以外无机物只提供无机盐除水以外无机物只提供无机盐 D.D.无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量答案：答案：D 解析：解析：不一样微生物，所需营养物质有不一样微生物，所需营养物质有较大差异，要针对微生物详细情况分析。对较大差异，要针对微生物详细情况分析。对于于A A、B B选项，它表示是不完整。有碳源只能选项，它表示是不完整。有碳源只能是碳源，如二氧化碳；有碳源可同时是氮源，是碳源，如二氧化碳；有碳源可同时是氮源，如如NHNH4 4HCOHCO3 3；有碳源同时是能源，如葡萄；有碳源同时是能源，如葡萄糖；有碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白糖；有碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于胨。对于C C选项，除水以外无机物种类繁多，选项，除水以外无机物种类繁多，功效也多样。如二氧化碳，可作为自养型微功效也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物碳源；生物碳源；NaHCONaHCO3 3，可作为自养型微生物，可作为自养型微生物碳源和无机盐；而碳源和无机盐；而NaClNaCl则只能提供无机盐。则只能提供无机盐。对于对于D D选项，无机氮源提供能量情况还是存选项，无机氮源提供能量情况还是存在，如在，如NHNH3 3可为硝化细菌提供能量和氮源。可为硝化细菌提供能量和氮源。第85页例例2 2下面对发酵工程中灭菌了解下面对发酵工程中灭菌了解不不正确正确是是A.A.预防杂菌污染预防杂菌污染 B.B.毁灭杂菌毁灭杂菌C.C.培养基和发酵设备都必须灭菌培养基和发酵设备都必须灭菌 D.D.灭菌必须在接种前灭菌必须在接种前答案：答案：B 解析：灭菌是微生物发酵过程一个主要步解析：灭菌是微生物发酵过程一个主要步骤。骤。A A说是灭菌目标，因为发酵所用菌种大多说是灭菌目标，因为发酵所用菌种大多是单一纯种，整个发酵过程不能混入其它微生是单一纯种，整个发酵过程不能混入其它微生物（杂菌），所以是正确；物（杂菌），所以是正确；B B是错误，因为灭是错误，因为灭菌目标是预防杂菌污染，但实际操作中不可能菌目标是预防杂菌污染，但实际操作中不可能只毁灭杂菌，而是毁灭全部微生物。只毁灭杂菌，而是毁灭全部微生物。C C是正确，是正确，因为与发酵相关全部设备和物质都要灭菌；发因为与发酵相关全部设备和物质都要灭菌；发酵所用微生物是灭菌后专门接种，灭菌必须在酵所用微生物是灭菌后专门接种，灭菌必须在接种前，假如接种后再灭菌就会把所接菌种也接种前，假如接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。杀死。第86页编号编号n成份含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4)2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.259.25g gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gH H2 2O O100100mlml例例3 3右表是某微生右表是某微生物培养基成份，请据此物培养基成份，请据此回答：回答：（1 1）右表培养基可）右表培养基可培养微生物类型是培养微生物类型是 。（2 2）若不慎将过量）若不慎将过量NaClNaCl加入培养基中。加入培养基中。如不想浪费此培养基，如不想浪费此培养基，可再加入可再加入 。自养型微生物自养型微生物 含碳有机物含碳有机物 第87页（3 3）若除去成份）若除去成份，加入（，加入（CHCH2 2O O），），该培养基可用于培养该培养基可用于培养 。（4 4）表中营养成份共有）表中营养成份共有 类。类。（5 5）不论何种培养基，在各种成份都）不论何种培养基，在各种成份都溶化后分装前，要进行是溶化后分装前，要进行是 。（6 6）右表中各成份重量确定标准是）右表中各成份重量确定标准是 。（7 7）若右表培养基用于菌种判定，应）若右表培养基用于菌种判定，应该增加成份该增加成份 。固氮微生物固氮微生物 3 调整调整pHpH 依微生物生长需要确定依微生物生长需要确定 琼脂（或凝固剂）琼脂（或凝固剂）第88页