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2022年医学检验论文3000字 医学论文网医学论文网-乏氧对人舌鳞癌Tca8113细胞HIF1表达影响的研究【摘要】 目的 初步研究乏氧对人舌鳞癌Tca8113细胞HIF1表达水平的影响。方法 将处于对数生长期的Tca8113细胞置于1%O2、5%CO2、94%N2混合气体的乏氧培养箱内培养，分别在乏氧培养1/2、1、3、6、12和24 h时取出。每个时间段均设常氧培养对照组（5%CO2、95%O2）。采用RTPCR技术检测不同培养条件下细胞HIF1 mRNA的表达情况。结果 HIF1的表达在乏氧12 h明显升高并达最高峰，24 h时又下降至常氧水平。每个时间段乏氧组HIF1的表达均高于其相应的常氧对照组。结论 乏氧影响了人舌鳞癌Tca8113细胞HIF1基因的表达水平，肿瘤细胞通过上调HIF1基因的表达适应肿瘤乏氧的微环境，有利于肿瘤的发生与发展。 【关键词】 乏氧；缺氧诱导因子1；Tca8113 【Abstract】 Objective To investigate the effect of hypoxia on HIF1 expression in tongue squamous cancer cell line Tca8113 cells.Methods Tca8113 cells in logarithmic grow phase were cultured in hypoxia(1%O2、5%CO2、94%N2) conditions for 1/2 h，1 h，3 h，6 h，12 h and 24 h,respectively. Expression of HIF1 mRNA were assessed by RT-PCR technique.Results The expression of HIF1 mRNA increased significantly and reached the peack after 12 h of hypoxia,and then decreased to the level of normoxic conditions at 24 h. The expression of HIF1 mRNA in hypoxia was higher than that in normoxic control groups.Conclusion Hypoxia upregulates the expression of HIF1 mRNA,which makes cancer cells to adopt hypoxia in solid tumor,and to promote tumor development. 【Key words】 hypoxia,HIF1,Tca8113 乏氧是实质性肿瘤微环境的基本特征之一，同时也是肿瘤发生恶性转化甚至转移的始动因素。乏氧条件下肿瘤细胞发生适应性变化，导致一系列病理生理过程，其中乏氧诱导因子(hypoxia inducible factor 1,HIF1)在其过程中起着重要作用。HIF1是由HIF1、HIF1两个亚单位组成的异二聚体，其中HIF1对氧的依赖性较强，在调节微环境的氧平衡中起重要作用。已有研究表明HIF1在肺癌、脑肿瘤、乳腺癌等多种肿瘤组织中表达，并调节其生物学行为，但HIF1在舌癌中的研究鲜见报道。本研究采用RTPCR技术半定量检测人舌鳞癌Tca8113细胞在乏氧培养条件下HIF1mRNA水平的表达变化，观测乏氧对该基因的影响，为肿瘤的治疗寻找新的治疗靶点。 1 材料与方法 1.1 主要试剂、仪器与细胞 RPMI 1640(GIBCO)；胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）；Tca8113人舌鳞癌细胞系（中科院上海细胞库）；乏氧培养箱(HERA cell 150,GERMAN) ；RNA提取试剂盒（Trizol，上海生工）；RTPCR试剂盒（Takara产品）；DL2000 DNA Marker（Takara产品）；PCR仪(Eppendorf，德国)。 1.2 细胞培养 人舌鳞癌细胞株Tca8113单层贴壁生长，细胞培养液由RPMI 1640、10%胎牛血清、100 U/ ml 青霉素和100 U/ ml 的链霉素构成。置于5%CO2的37培养箱内培养，待细胞进入对数生长期后，更换培养液为无血清培养基，而后进行乏氧培养，即把细胞置于1%O2、5%CO2、94%N2混合气体的乏氧培养箱内培养。分别在乏氧培养1/2、1、3、6、12和24 h时取出。每个时间段均设常氧培养对照组（5%CO2、95%O2）。 1.3 细胞总RNA的抽提（Trizol试剂盒） 将在不同含氧状态下培养的细胞，去除培养液后加PBS温柔洗涤3次，加Trizol 500 l，充分混匀，-20过夜。加入200 l氯仿，剧烈震荡混匀30 s；12 000 r/min室温离心15 min；小心转移上清至RNasefree 1.5 ml离心管里，加入等体积的异丙醇，室温离心；弃上清，加入无水乙醇洗涤两次，室温下使酒精完全挥发；沉淀用30100 l DEPCH2O溶解。测定样品在260 nm和280 nm的吸收值进行RNA的纯度和浓度分析。 1.4 RTPCR检测 按照Takara逆转录试剂盒的说明，以总RNA为模板，以Oligo（dT）为引物合成cDNA第一条链，反应温度为45 25 min，99 5 min，5 5 min。HIF1的引物序列：sense：5GTCTCGAGATGCAGCCAGAT3,antisense：5TCACCAGCATCCA GAAGTTTC3，片段长度为169 bp（山东大学实验中心提供）。在同一试管中加入5×PCR Buffer 10 l，Takara Ex TaqTM HS 0.25 l，Primer 各0.5 l，灭菌三蒸水加至50 l，PCR扩增条件为94 20 s，58 20 s，72 1 min，共34个循环，最后延伸72 7 min。实验中以双蒸水代替cDNA作阴性对照。 1.5 1.2%琼脂糖凝胶电泳分析扩增产物 取RTPCR产物6 l和Takara DL2000 DNA Marker 5 l电泳，紫外照相。捷达专业数码凝胶成像与分析系统3.3测定不同培养条件下HIF1条带的光密度均值（OD）。 第 5 页 共 5 页