微生物检测技术研究探讨.docx

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1、微生物检测技术研究探讨 摘要：本文探讨探讨了微生物检测的新方法和新技术，包括了快速生化检测方法、免疫学技术、PCR技术，并介绍了这些检测技术的原理和特点。 关键词：微生物； 检测； 免疫学 目前我国微生物检验方法基本上还是采纳传统的微生物的培育方法,通常经过增殖培育、分别纯化、生化试验、血清学试验等，检验步骤繁琐、耗时长，不能应对市场需求快速精确检验方法的要求1。近年来，随着生物技术的快速发展，微生物快速方法融合了微生物学、分子化学、生物化学、生物物理学、免疫学和血清学等方面的学问对微生物进行分别、检测、鉴定和计数, 与传统方法比较, 更快、更便利、更灵敏2。本文就国内外的微生物检测技术应用和

2、探讨状况综述如下。 1快速生化检测方法 1.1快速测试片法快速测试片法3可视为预制型培育基系统，它以纸片、胶片或无纺布等作为培育基载体，将预制的培育基和指示剂附着在载体上面，微生物若有在上面生长，可以便利的判读、测定。 其优点有：操作简洁，便利快捷，省去微生物检验前后大量的工作量，如配培育基，消毒灭菌，清洗培育皿；体积小，便于携带，存放，可以节约试验室空间，放入培育箱时，可以10片或20片堆放，节约培育箱空间；加入了染色剂，显色剂，增加了效果，菌落总数和金黄色葡萄球菌的检测中，跟传统法相比能够更加简单的判读，而且避开传统法中，用热琼脂倾注时，琼脂温度限制不当，对细菌造成的热损伤；与传统检测方法

3、的相关性特别好，两者的差异性很小。在菌落总数的测试时，我试验室对两者进行比对，测试片法跟平板法的计数结果无明显差异。 其缺点有：标准上：虽然通过了AOAC,ISO，我国出入境检验检疫等世界各国权威组织机构的认证认可，进入相关标准，但没有进入我国强制的食品平安国家标准，导致质检、国内企业对相关产品检验时无法采纳，根本上限制了该技术的推广；技术层面上：菌落总数测试片在做到某类产品，含有芽孢杆菌，测试片表面简单液化，影响判读结果。霉菌测试片上面酵母跟霉菌有时不大简单推断；经济上：成本较高，对于平常人工比较富余的试验室来说，全部运用测试片经费上面压力较大。 1.2快速生化检测仪器法微生物生化快速检测是

4、微生物检测发展的方向之一，其具有操作自动化、标准化、精确率高等特点。国内外现在已有许多全自动微生物分析系统问世4，如Vitek 系统、Biolog 系统、BAX 系统和Phoenix 细菌鉴定等。 Vitek 系统5的原理是基于微生物的生化反应。它设计六种VITEK鉴定卡对应不同的菌群，然后在鉴定卡内封装相应的风干底物，将待检菌经传统培育，划线分别得到的纯菌落制成菌悬液后，注入鉴定卡,放入仪器进行检测。仪器则通过光学组件，按不同的波长对鉴定卡进行扫描，依据微生物在对不同风干底物生长反应不同，得出相应的鉴定结果。 其优点有：获得广泛的国际认可，而且也进入了最新食品平安国家标准，在实际检测中可以作

5、为细菌检测的鉴定推断依据；精确，用vitek对已经标准菌株进行验证，结果跟实际菌株完全符合，而且时间上面大大缩短，一般状况常见菌株58h都能鉴定出结果；快捷，削减手工操作时间，无需添加其它试剂；将传统微生物生化鉴定须要的生化药品压缩到一张小卡片里，便利了试验室管理，避开了样品量不大的试验室需打算的繁杂的生化试剂，节约了成本。 2免疫学技术 全自动酶联荧光免疫系统即mini VIDAS。它主要是利用酶联免疫的原理，通过检测酶跟酶荧光底物作用产生荧光强度来计算物质浓度，从而对微生物或毒素等进行筛选检测。该系统含有固相吸附器和条形码标记试剂条，其内侧由抗体包被作为固相吸管功能，通过仪器自动进行地抽吸

6、，而在吸头内表面完成抗原抗体结合反应、洗涤分别和荧光激发过程。 其优点有： 灵敏度高，可以作为大批量样品的筛查，能有效地节约检验时间和工作量；速度快，一般上机后几非常钟可以得到初筛结果；结果精确，与国标法比较无明显差异，假阳性跟假阴性率小。 其缺点有：没有进入到食品平安国家标准，影响它在实际检测中的应用；检测项目少，实际检测中常用到的项目只有沙门氏菌、金黄色葡萄球菌毒素，单核增生李斯特菌；耗材费用高，特殊在样品量少的状况下。即使单做一个样品也须要3根测试条。影响了在中小试验室的应用。 3PCR技术 PCR是多聚酶链式反应的简称，该方法通过对人工难以培育的微生物相应DNA片段的扩增,检测扩增产物

7、含量, 从而快速地对食品中致病菌含量进行检测。实时定量PCR 技术跟传统 PCR 技术其基本原理相同，但定量技术原理不同。实时定量技术应用了荧光染料和探针来保证扩增的特异性，并且荧光信号的强弱同扩增产物的量成正比，从而精确定量7。 其优点有：测定结果快速、灵敏度和特异性高、检测成本低，理论上, 只 要样品中含有一分子待测菌的DNA, 通过PCR技术完全可以在短时间内检测到；已成为检测一些病毒、猪链球菌的国家标准方法( 如禽流感病毒通用荧光RT-PCR 检测方法GB/ T 194381 1-2004; H5 亚型禽流感病毒荧光RT-PCR 检测方法，GB/ T 194381 2-2004 ，GB

8、/T 110115.7-2022 猪链球菌2型荧光PCR检测方法等)。 其缺点有：其存在的最大问题在于PCR 产品的假阳性污染，其缘由主要是由于PCR 方法的灵敏度极高, 可能是扩增已死亡的待检测菌体而造成的；没有进入食品平安国家标准，影响了该技术在国内检测的应用。 4结论 微生物检验技术正朝着简便、高效、快速、自动化方向发展，很多新的检测技术还在不断涌现出来，除了上面介绍的技术，还有代谢学技术、传感器技术、流式细胞术、基因探针技术、生物芯片技术等等。每种检测技术都有其优缺点，探讨检测人员应当依据不同的检测目标，不同的试验环境及条件，选择适当的检测方法，进一步地，还可以将不同的技术结合起来比对

9、、运用，以提高检测的精确性。 参考文献： 1龙夫.食品微生物快速检测技术动向J.中外食品，2004，6：55-56. 2张志洁, 韩剑众.食品微生物快速检测技术及其自动化探讨进展J.食品探讨与开发,2003(2): 101-101. 3吴清平, 孙永, 蔡芷荷, 等. 快速测试片在食品微生物检测中的应用J. 中国卫生检验杂志, 2022,16(5): 635-637. 4杨向莹, 江志毅, 杨娜. 快速方法在食品微生物检测中的应用J. 中国食品工业, 2022(5): 49-50. 5杨毓环,陈伟伟.VITEK全自动微生物检测系统原理及其应用J.海峡预防医学杂志, 2000, 6(3): 38-39. 6卜庆婧VIDAS(R)实现致病菌的全自动检测-访生物梅里埃公司行业科学事务总监Stan BaileyJ食品平安导刊， 2022，6: 45 7刘光明,等.用PCR-ELISA技术检测转基因食品的探讨J.食品科学,2003, 24(1),101-105.编辑/哈涛 第6页 共6页第 6 页 共 6 页第 6 页 共 6 页第 6 页 共 6 页第 6 页 共 6 页第 6 页 共 6 页第 6 页 共 6 页第 6 页 共 6 页第 6 页 共 6 页第 6 页 共 6 页第 6 页 共 6 页