微生物实验室定量质控样品的制备与均匀性研究.docx

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1、微生物实验室定量质控样品的制备与均匀性研究 摘要： 目的：制备微生物定量质控样品，并对样本的稳定与匀称性进行检测分析，推断是否符合日常工作室内质控的要求。方法：将肯定浓度的甘油-养分肉汤菌悬液快速冻存于液氮中。对短期内冻存样品连续随机抽取10个样，进行菌落总数的检测。应用单因素方差分析法对检测结果进行统计分析。结果：以=0.05为检验水准，该质控样样品间无显著性差异。结论： 样品短期内具匀称性和肯定稳定性。该质控样品，可对微生物试验室定量检测的短期质控供应肯定的帮助 关键词： 匀称性；质量限制；微生物 【中图分类号】R155【文献标识码】A【文章编号】1673-860202-0017-02 在

2、微生物学定量检验领域，由于其检验对象的特性，日常工作的过程质控，因缺乏高可信度、价格优廉的标准物质，往往只能通过培育基、培育温度、培育时间等的检查来确定检验过程的可控性，但有时人员或其它因素改变可给检测结果带来肯定的随意性和不确定性。同时或因不能刚好发觉过程失控而忽视，或因对检测过程怀疑而使结果的可信度降低，从而无法保证检测质量。因此，制备达到肯定匀称性与稳定性的微生物定量质控样品，可促进日常工作的检测过程质量限制。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1样品：试验室自备样品，为含肯定量菌落数的甘油-脑心浸出液。冻干菌株：金黄色葡萄球菌CMCC26003。 1.1.2 主要仪器与试剂：主要仪器：

3、BLON-08型均质器，立式高压灭菌锅，DHP-9160恒温培育箱，BHC-1300IIA2生物平安柜、YDS-30-125液氮罐。主要试剂：甘油、氯化钠，养分肉汤、平板计数琼脂培育基、脑心浸出液；全部试剂按其相应要求制备与灭菌，均在有效期内运用。 2.2方法 2.2.1样品制备： 取冻干菌株，按要求加入肯定量养分肉汤在小时复苏。分别取复苏液1ml加入60ml养分肉汤中，小时。分别取该培育液按GB4789.2-20l0菌落总数1检验其所含菌落数，同时该培育液置于4冰箱中。之后将该培育液用4的甘油-养分肉汤稀释至含菌落为600010100CFU/ml的菌悬液，将该菌悬液分装于冻存管中，2.2ml

4、/管，作为冻存样品。快速依次置于液氮气层、液氮中冻存。 2.2.2操作步骤：菌落总数：对冻存的样品每日随机抽取1个样品进行检测、共10个2。样品取用时，将冻存管快速置于37温水中，1分钟内快速解冻。无菌条件下将样品开启、取样，每份样品进行平行试验。全部测试均应在可重复条件下进行。对所取样品，分成2份，并进行3个系列的10倍倍比稀释，混合匀称，按4789.2-2022操作，分别吸取各稀释液1mL到2个平皿中，倾入保温为45的平板计数琼脂，混匀，待培育基凝固后倒置放于36恒温培育箱中48h培育，取出平板进行菌落计数。同时分别以稀释液和培育基做空白比照。 2.2.3匀称性检验：可以通过检验各样本均值

5、是否具有统计学意义上的差异来推断制备样品的匀称性，常采纳单因素方差分析法、t检验法、极差检验法等统计学方法3-4。对生物类样品可采纳单因素方差分析 来进行样品匀称性的统计分析推断4。单因素方差分析又称为一维方差分析，探讨单个因素对观测变量的影响，对由单一因素影响的一个因变量由因素各水平分组的均值之间的差异进行检验，推断是否具有统计意义。因此，若各分组间存在统计学差异，说明该因素对因变量存在显著影响。 计算公式见表1。 3结果 单因素方差分析结果见表2。检测结果见表3， 4探讨 为适应随着人民生活水平的提高及技术水平的发展，相关产品细菌学指标检测标准或方法不断得到提高与完善，由此对微生物试验室的

6、检测质量限制提出的要求也越来越严谨与细致5。目前，为确保试验室检测实力与质量限制，主要途径是除了定期参与相关项目的试验室实力验证外，在细菌学指标检测的日常工作中，须要对培育基进行适应性与比照菌株的生长实力检查，试验过程带入阳性比照、空白比照或阴性比照，对试验环境的干净程度进行定期监测与限制，对其它试验条件如温度、时间等进行限制，同时不断加强技术人员的专业技能培训5-9。若是能在日常工作中的定量检测试验过程带入定量质控样品，则可以从另一个方面反映试验室的检测质量，尤其在试验条件发生变更而又未能刚好发觉时可以发出警示，同时对不同检测技术人员的检测过程起到一个平行比照的作用，也有助于评定试验室的不确

7、定度。其不随检测人员、日常检测样品等的变更而受到影响。目前已出现商品化的定量质控样品，也有获得国家批准成为标准物质的，但作为日常工作的质控样品，须要考虑到成本因素。因此，制备试验室日常工作质控样品，具有重要的意义。 通过随机抽样，采纳单因素方差分析法对短期保存的10个样本进行统计分析，样品内和样品间均无显著性差异，由此可初步说明该样本是匀称的。要留意的是在检测前对所用培育基进行适应性检查，所用菌株具有良好的活性；检测过程中取样量需精确、取样方式、测定方法具备肯定的平行性，防止各稀释度交叉污染等。此次样本为单一菌株是日常工作定量质控的初步探究。作为菌落总数检验的过程质控，混合菌株的质控样更具代表

8、性。但由于不同细菌的特性不同，在相同培育基与培育条件下的生长状况体现差异，在混合生长时可能存在肯定的相互作用或影响及其程度的大小10、在保存及定量检测时是否能够表现出肯定规律尚不能完全确定，对样本的匀称性产生肯定的影响，而混合多少种菌株作为质控品，对菌落总数指标才具代表意义，尚须要不断摸索、改进与完善。 参考文献 1GB 4789.2-2022菌落总数检验S. 2ISO/TS 22117：2022 Microbiology of food and animal feeding stuffs-Specific requirements and guidance for proficiency t

9、esting by interlaboratory comparisonS. 3CNAS-GL03：2022实力验证样品匀称性和稳定性评价指南S. 4金献忠，郑曙昭，丘寅.实力验证样品匀称性和稳定性检验的统计方法J.现代测量与试验室管理，2003，04：35-36. 5GB 4789.1-2022食品微生物学检验 总则S. 6GB 4789.28-2022食品微生物学检验培育基和试剂的质量要求S. 7国家药典委员会.中国药典M.北京：中国医药科技出版社，2022. 8刘锐萍，王峰，刘珊珊，等.食品、药品微生物检测试验室质量限制方法分析J.中国微生态学杂志，2022，25：847-850. 9王宏明.微生物检验技术操作规程与质量限制及检测数据分析处理好用手册M.北京： 卫生科技出版社，2022. 10吉彦莉，郭勇峰，王敬辉，等. CNCA-12-A01食品微生物学实力验证结果分析J.公共卫生与预防医学，2022，24：101-101. 第6页 共6页第 6 页 共 6 页第 6 页 共 6 页第 6 页 共 6 页第 6 页 共 6 页第 6 页 共 6 页第 6 页 共 6 页第 6 页 共 6 页第 6 页 共 6 页第 6 页 共 6 页第 6 页 共 6 页