马钱苷对脂质代谢及ApoC_诱导的NF_B信号通路的影响_李扬(1).docx

《马钱苷对脂质代谢及ApoC_诱导的NF_B信号通路的影响_李扬(1).docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《马钱苷对脂质代谢及ApoC_诱导的NF_B信号通路的影响_李扬(1).docx（66页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、分 类 号 ： S859.7 研宄生学号： 2013852005 单位代码： 10183 密 级：公开 吉林大学 硕士学位论文 马钱苷对脂质代谢及 ApoCIII 诱导的 NF-KB 信号 通路的影响 Influence of Loganin on lipid metabolism and NF-KB signaling induced by apoCIII 作者姓名：李扬 专业：基础兽医学 研宄方向：兽医药理学 指导教师：冯海华教授 培养单位：动物医学学院 2016 年 6 月 马钱苷对脂质代谢及 ApoCIII 诱导的 NF-KB 信号通路的影 响 Influence of Loganin

2、 on lipid metabolism and NF-KB signaling induced by apoCIII 作者姓名：李扬 专业名称：基础兽医学 指导教师：冯海华教授 学位类别：农学硕士 答辩日期： 2016 年 6 月 2 日 未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文 书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文 的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出 租、改编等有碍作者著作权的商业性使用 （ 但纯学术性使 用不在此限 ） 。否则，应承担侵权的法律责任。 吉林大学硕士学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下， 独立进行研宄

3、工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外， 本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。 对本文的研宄做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式 标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名 ： f 4 日期：年 6 月 / 入日 中文摘要 马钱苷对脂质代谢及 ApoCIII 诱导的 NF-KB 信号通路的影响 动脉粥样硬化是一种与高甘油三酯血症、高胆固醇血症和血管内皮细胞功 能障碍相联系的慢性炎症过程，这种心血管病变已成为威胁人类生命健康的重 要因素之一。驻留在超低密度脂蛋白和低密度脂蛋白表面的载脂蛋白 cm (ApoCIII)和革兰氏阴性菌细胞壁

4、的主要成分脂多糖 （ LPS)， 是两种被广泛 认可的促进动脉粥样硬化进程的独立因子。 草药由于其相对较少的副作用已被广泛用于动脉粥样硬化的治疗中。本试 验开始，我们建立了 ApoCIII 诱导的 3T3-L1 细胞和 LPS 诱导的 RAW264.7 细 胞两种炎症模型进行了药物筛选，发现 马钱苷和水杨苷都有抗炎活性，但是由 于水杨苷在较低浓度已呈现出细胞毒性且已有相关抗炎报道，所以接下来的试 验只选择了关于马钱苷的体外模型进行研究。 这一研究是为了评估马钱苷对脂质代谢及 ApoCIII 诱导的 NF-KB 信号通路 的影响。在 ApoCIII 刺激的小鼠脂肪细胞中，包括肿瘤坏死因子 -a

5、(TNF-a)、 单核趋化蛋白 -1 (MCP-1)和白细胞介素 -6 (IL-6)的细胞因子水平通过酶联反 应吸附试验（ ELISA)测定并且它们的基因表达通过实时荧光 PCR 测定。应用 免疫蛋白印迹法（ Western blotting)测定 NF-KB 蛋白的磷酸化作用。结果显示 马钱苷显著降低了肿瘤坏死因子 -0U 单核趋化蛋白 -1 和白细胞介素 -6 的含量以 及它们的基因表达。蛋白免疫印迹分析表明马钱苷抑制了 NF-KB 信号通路的活 化 。 Triton WR-1339 作用的小鼠模型中，马钱苷减少了小鼠血清中总胆固醇 (TC) 和甘油三酯 （ TG)的含量。油红 0染色结果

6、显示马钱苷抑制了脂滴的生成。以 上结果显示 （ 1)马钱苷能通过抑制 NF-KB信号通路活化以及炎症因子 TNF-ou IL-6 和 MCP-1 的过度表达从而抑制炎症反应，从抗炎角度 初步明确了马钱苷抗 动脉粥样硬化的作用机制。 （ 2)马钱苷的干预降低了高脂血症小鼠血清中 TC、 TG 水平并且减少了脂滴的生成，证实马钱苷能通过调节血脂而在一定程度上抑 制动脉粥样硬化的发生。 关键词： 马钱苷，动脉粥样硬化，载脂蛋白 CIII， 细胞因子， NF-KB II Abstract Influence of Loganin on lipid metabolism and NF-KB signal

7、ing induced by apoCIII Atheroscleresis (AS) is a chronic inflammatory process which is associated with hypertriglyceridemia, hypercholesterolemia and vascular cell dysfunction, the cardiovascular disease has become one of the important factors that threaten human life and health. Apolipoprotein CIII

8、 (apoCIII) is a small protein that resides on the surface of very-low-density lipoprotein (VLDL) and low density lipoprotein (LDL). LPS is the main ingredients of gram-negative bacterias cell walls. ApoCIII and LPS are two widely recognized independent factors which can promote atherosclerotic proce

9、sses. Herbal medications have been widely used in the treatment of atherosclerosis due to their relatively fewer side effects. At the beginning of this trial, two kinds of inflammatory models of apoCIII-induced 3T3-L1 cells and LPS-induced RAW264.7 cells were set up for screening drugs, we found tha

10、t both Loganin and D(-)-Salicin have anti-inflammatory activity. However, the low concentration of D(-)-Salicin has presented cytotoxicity and there have been related anti-inflammatory reports about D(-)-Salicin, so in vitro model about Loganin was chosen for the following study. This study intended

11、 to evaluate the potential influence of Loganin on lipid metabolism and NF-KB signaling induced by apoCIII. In the apoCIII-induced mouse adipocytes, the levels of cytokines, including TNF-a, MCP-1 and IL-6 were determined by enzyme-linked immunosorbent assay and their gene expressions were measured

12、through RT-PCR. The phosphorylation of nuclear factor-KB (NF-KB) proteins was analyzed by Western blotting. Our results showed that Loganin markedly decreased the concentrations of TNF-a, MCP-1 and IL-6 as well as their gene expressions. Western blotting analysis indicated that Loganin suppressed th

13、e activation of NF-KB signaling. In the Tyloxapol-treated mouse model, Loganin reduced the contents of TC and TG in mouse serum. The results of Oil Red-0 Staining showed that Loganin suppressed the production of lipid droplets. The above results suggested that (1) Loganin could inhibit the inflammat

14、ory response by HI inhibiting the activation of NF-KB pathway and over-expression of inflammatory factors TNF-a, MCP-1 and IL-6. This result identified the mechanism of Loganin on anti-atherosclerosis from the perspective of the anti-inflammatory preliminary. (2) Intervention of Loganin decreased th

15、e TC and TG levels in hyperlipermia mice serum and reduced the production of lipid droplets, so it was confirmed that Loganin could inhibit the occurrence of AS through regulation on blood lipids. Key words: Loganin, Atherosclerosis, ApoCIII, cytokines, NF-KB IV 弓丨 s . 1 第一篇文献综述 . 3 第 1 章动脉粥样硬化研究进展

16、. 3 1.1 动脉粥样硬化概述 . 3 1.2 动脉粥样硬化与炎症 . 6 1.3 促动脉粥样硬化因子 . 6 1.4 动脉粥样硬化与细胞因子 . 7 1.5 NF-KB 炎症信号通路概述 . 10 1.6 NF-KB 信号通路与炎症反应 . 12 1.7 NF-KB 信号通路与动脉粥样硬化 . 12 1.8 NF-KB 信号通路是抗 AS 治疗的靶点 . 14 1.9 动脉粥样硬化的中药药物治疗 . 14 第 2 章马钱苷的研究进展 . 16 2.1 山茱萸概述 . 16 2.2 马钱苷概述 . 17 第二篇研究内容 . 19 第 1 章 马 钱 苷 对 ApoCIII 诱导的 NF-KB

17、 信号通路的调控作用 .19 1.1 材料和方法 . 19 1.2 实验结果 . 25 1.3 讨论 . 29 1.4 小结 . 30 第 2 章 Triton WR-1339 诱导的高脂血症动物模型的建立及马钱苷 的干预作用 . 31 2.1 材料和方法 . 31 2.2 实验结果 . 32 2.3 讨论 . 34 2.4 小结 . 34 结论 . 35 参考文献 . 36 导师简介 . 53 作者简介 . 54 至夂 i 射 . 55 VI 英文缩写词 英文缩写 英文全称 中文全称 DMSO Dimethyl Sulfoxide 二甲基亚砜 NF-KB Nuclear factor-KB

18、核转录因子 -KB IL Interleukin 白细胞介素 0D Optical Density 吸光度 SDS-PAGE SDS-Polyacrylamide Gel Ectrophoresis SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 LPS Lip opoly saccharide 脂多糖 TNF Tumor necrosis factor 肿瘤坏死因子 AS Atherosclerosis 动脉粥样硬化 MCP-1 Monocyte chemotactic protein-1 单核细胞趋化蛋白 -1 PBS Phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 DMEM Dulbecc

19、os Modified Eagle Medium 高糖培养基 ELISA Enzyme-linked immunosorbent assay 酶联免疫吸附试验 FBS Fetal Bovine Serum 胎牛血清 Apo Apolipoprotein 载脂蛋白 PCR Polymerase Chain Reaction 聚合酶链式反应 TC Total cholesterol 总胆固醇 TG Triglyceride 甘油三酯 VII 动脉粥样硬化是当今医学最具挑战的问题之一，是心血管疾病发生的主要 原因，占发达国家致命疾病的大多数 1。由于近年来社会的快速发展和生活水 平的日益提高，在我国

20、掀起了一股饲养宠物的热潮，宠物与人关系密切，在与 人相处的日常生活中可以增加人们的精祌依赖，对于提高现代人的生活质量， 消除快节奏生活、工作人群的紧张感和缓解精祌压力都具有极其重要的社会意 义。然而我国人均居住空间与欧美国家相比不但较小而且多居中高层建筑，导 致宠物的运动机会和运动量严重不足，再加之多油多脂饮食的过量摄取，从而 引发了宠物一系列的肥胖性疾病，这其中就包括高脂血症和动脉粥样硬化等。 所以，不论是对人类还是对动物的健康而言，动脉粥样硬化等心血管疾病的防 治都是一个重要课题。 动脉粥样硬化的发展是一个复杂的过程，造成它的一些风险因素已经被确 认，包括遗传易感性，代谢紊乱（例如，高血浆

21、胆固醇和糖尿病）和环境因素 (例 如，饮食、二手烟和体育锻炼不足） ra。 动脉粥样硬化的病变发展是由脂 质在动脉管壁积聚引起的，它伴随着动脉管壁明显增厚和局部炎症反应。机能 障碍的发展显然是由局部内皮紊乱和内皮循环脂蛋白颗粒的渗透性增加所激 发。在动脉管壁胆固醇沉积的主要原因是一部分低密度脂蛋白 （ LDL)硬化。 小密度 LDL 微粒被氧化、去涎酸和糖化所修饰，尤其是低密度脂蛋白复合物， 是整个病理过程的主要贡献者，它们在循环中的存在是造成动脉粥样硬化的一 个主要风险因素 W。 动脉粥样硬化机能障碍的发展与局部炎症和循环免疫细胞 的补充相联系。常驻动脉 壁细胞（例如周皮细胞和血管平滑肌细胞

22、 ） 和渗透细 胞（例如巨噬细胞）积极参与病理过程。有关青年的详细研究表明动脉粥样硬 化进程能够开始于生命早期阶段并且在很长一段时间内保持无症状状态在 随后的阶段中，动脉粥样硬化机能障碍转换为所谓的易损斑块，能够开始血栓 形成导致生命威胁，这是许多动脉粥样硬化病人首要的临床表现症状。抗动脉 粥样硬化治疗的发展应该专注于早期诊断和预防性治疗。这一发展对于更好地 了解动脉粥样硬化发病机理的分子和细胞机制是必要的 6。许多研究表明载脂 引 蛋白 cm (Apocm)作为一个独立的促动脉粥样硬化因子，它的过量表达可以 导致高脂血症并且促进动脉粥样硬化的病变发展 7。 TNF-ou MCP-1 和 IL

23、-6 在许多类型的细胞中可以导致炎症。它们在心血管 疾病发展中的病理生理学角色已被阐明 8。临床研究表明血浆中的 IL-6 与甘油 三酯，超低密度脂蛋白和残余脂蛋白胆固醇中的载脂蛋白 CIII 密切关联 9。 MCP-1 在聚集巨噬细胞进入肥胖的脂肪组织中发挥重要作用并且促进肥胖的发 屏 1G。 NF-KB 是一个属于 Rel 家族的转录因子，它是一个重要的细胞内信号 转导系统并参与一些炎症疾病例如动脉粥样硬化。 NF-KB 介导的信号转导的激 活已在动脉粥样硬化的不同阶段被建立起来，从斑块形成到它的不稳定和破裂。 NF-KB 信号通路也参与血管生成、凋亡和肿瘤形成过程。实验研究表明，抑制 这

24、些信号通路可以降低炎症负担。随着自然和医药的发展，可选择的和特异性 的 NF-KB 抑制剂可能超越 IKB 激酶 a 或 P， 最终被证明成为抗动脉粥样硬化，抗 炎，抗血管增生和抗凋亡功能的治疗工具，它可以减少炎症，抑制动脉粥样硬 化形成并阻止其并发症。 马钱苷是 一种存在于山茱萸中的环烯醚萜苷，它已被发现具有免疫调节活 性，抗炎和抗惊厥等作用。本试验旨在 （ 1)构建载脂蛋白 CIII 诱导的小鼠脂肪 细胞 （ 3T3-L1)的体外模型，探讨马钱苷对 NF-KB 信号通路的调控作用； （ 2) 通过 Triton WR-1339刺激的小鼠高脂血症模型，研究马钱苷对血脂紊乱的干预 作用。 2

25、第 一 篇 文 献 综 述 第 1 章 动 脉 粥 样 硬 化 研 究 进 展 第一篇文献综述 第 1 章动脉粥样硬化研究进展 1.1 动脉粥样硬化概述 来源于希腊的术语一一动脉粥样硬化，其主要特征表现为增厚的动脉内膜 层和积聚的脂肪，脂肪物质被纤维帽覆盖着处于斑块的中央核心区。这一术语 由动脉粥样（脂肪的积累通过巨噬细胞来完成 ） 和硬化（平滑肌细胞、白细胞 和结缔组织构成纤维化层） 1U2两部分所构成。动脉粥样硬化是出现在动脉内 层叫做动脉粥样硬化斑的脂肪沉积的一种常见疾病。这些斑块的形成始于在内 膜沉积的小胆固醇晶体且它们潜伏在平滑肌之下，斑块随后伴随着增殖的组织 纤维环绕平滑肌和动脉内

26、凸起而生长，从而抑制血液的流通。成纤维细胞生成 结缔组织，病变过程中 形成的钙沉积造成动脉硬化。病变的最后阶段，血栓由 动脉的粗糙面形成，引起突然的血流阻塞 13。动脉粥样硬化是高脂血症和脂质 氧化的结果。动脉粥样硬化是一种统涉主动脉到冠状动脉所有血管的血管内膜 炎性疾病，内膜斑块是其主要特点 14a5。 动脉粥样硬化病变进程如下： (1) 脂质条纹形成 无论是关于人类还是动物的研究均显示动脉粥样硬化开始发生的迹象是形 成脂质条纹。动脉内层的脂蛋白中的病灶增加引起初始损伤 13。蛋白质、磷脂 和脂质（例如，胆固醇和甘油三酯 ） 构成脂蛋白颗粒，高胆固醇低密度脂蛋白 (LDL)是动脉 粥样硬化中

27、一种重要的脂蛋白，它不仅渗透到内皮细胞在血管 内膜中积累而且会持续补充细胞外基质成分。在动脉粥样化形成的初始阶段， 斑块通常通过血管的相反方向生长，动脉粥样硬化血管喜欢沿直径生长，当一 斑块覆盖超过血管内部弹性层的 40%时，动脉通道被认为已被占领。在斑块生 命周期结束时，发生血流的限制性阻塞。已有研究证实动脉粥样硬化是内膜受 损并且伴随细胞反应的结果，这些细胞包括单核细胞、平滑肌细胞和淋巴细胞 等等。泡沫细胞，细胞外大量脂肪堆积和少量血小板引起初始的软损伤。这一 第 一 篇 文 献 综 述 第 1 章 动 脉 粥 样 硬 化 研 究 进 展 阶段的最后会激化斑块出血 13a6-2G。 脂质条

28、纹的形成有四个步骤： （ 1)低密度脂蛋白 -胆固醇 （ LDL-C)的捕 获：正常情况下，位于动脉壁中的血浆低密度脂蛋白和胞内脂蛋白保持平衡。 随着血浆脂质的增加，许多这些粒子被困在内膜 （ 由于增加的胞外蛋白聚糖具 有高 LDL 亲和力 ）5。由于血清中低密度脂蛋白的含量和病变中脂蛋白捕获的 数量直接关联，其血液水平可被认为是动脉粥样硬化形成的一项指标。低密度 脂蛋白的捕获导致内膜中低密度脂蛋白含量的增加以及延长了它们在病变期的 持续时间。被困粒子的自发氧化和细胞氧化是由这些因素所引起的 15。 （ 2)内 皮细胞的激活：动脉粥样硬化的早期阶段，单核细胞和 T 淋巴细胞渗透到血管 内膜 2

29、1。同时在低密度脂蛋白氧化中的各种分子类型 22中产生很重要的粘附分 子和吸收分子。单核细胞分化为巨噬细胞从而获得氧化脂质，例如氧化性低密 度脂蛋白 （ Ox-LDL)形成泡沫细胞这一过程依赖于受体的表达，为了消除 酶和不同细胞因子的分泌。氧化性低密度脂蛋白促进 T 细胞的活化，作为 T细 胞抗原发挥重要作用。激活巨噬细胞以及改变内皮细胞、平滑肌细胞需要通过 分泌细胞因子这一过程来完成 21。 （ 3)白细胞的激活：单核白细胞、单核细胞 和 T 细胞于动脉粥样硬化的初始阶段经由血管壁进入内皮。这一过程中白细胞 和趋化因子粘附分子的转录是由 NF-aP 因子完成的。当促炎细胞因子与其受体 在内皮

30、表面绑定时，NF-aP 因子被激活。白细胞粘附分子主要来源于内皮细胞， 它们的受体在特定的白细胞，平滑肌细胞或血管内皮细胞中进行表达。已有研 究表明粘附分子在产生和释放引诱剂分子和趋化因子的过程中产生重要效应。 趋化 因子是蛋白质或者是低分子量的引诱剂细胞因子，在白细胞活化和迁移中 扮演重要角色 24。研究证明，在动脉粥样硬化的第一阶段，单核细胞趋化因子 蛋白 （ MCP-1)的抑制被大量的巨噬细胞和少量的内皮细胞和平滑肌细胞表达。 这一过程的增强来源于增加的膳食胆固醇，引起单核细胞移向血管壁且渗透到 病变。 MCP-1 表达于动脉粥样硬化的所有阶段 25。目前已表明氧化性低密度脂 蛋白可以上

31、调粘附分子，它也在内皮细胞和平滑肌细胞通过溶血卵磷脂表达信 使核糖核酸 （ mRNA) MCP， 这是由 LDL 上的 A2 磷脂酶引起的 26。 （ 4)泡 沫细胞的形成：单核吞噬细胞在插入内膜后分化为巨噬细胞。吞噬细胞可能通 过细胞外空隙脂质的吞噬作用预防动脉粥样硬化。一些脂质积累的巨噬细胞可 第 一 篇 文 献 综 述 第 1 章 动 脉 粥 样 硬 化 研 究 进 展 能离开动脉壁并且取出动脉的脂质。如果进入动脉壁的脂质水平超过出来的水 平（通过吞噬细胞或其他方式），它将导致脂质的积累，随后形成动脉粥样硬 化的趋势增加。巨噬细胞通过它们的清除剂受体吸收和积累氧化性低密度脂蛋 白从而转化

32、为泡沫细胞 27。这些受体在巨噬细胞、内皮细胞和平滑肌细胞等表 面的表达已被报道过 28。这些清除剂受体的表达在单核细胞分化为巨噬细胞期 间通过细胞因子和氧化性脂质表达的增加被巨噬细胞集落刺激因子所促进 27。 表面的氧化性低密度脂蛋白配体引起其吸收巨噬细胞的清除剂受体，是氧化性 低密度脂蛋白中的磷脂能够形成醛类攻击ApoB 的赖氨酸残基 29。在动脉壁 这些黄色泡沫细胞的积累导致脂质条纹的形成 3 。在发展的内膜损伤中，一些 泡沫细胞通过细胞凋亡而死亡。单核细胞可以产生例如肿瘤坏死因子 （ TNF)、 生长因子、早期凝固物质（包括组织因子）和自由基这些毒性物质。这些物质 能强烈伤害内皮和氧化

33、 LDL， 从而引起更多的代谢变化 3 。 (2) 粥样斑形成 如果相邻的平滑肌细胞和内皮细胞生成诸如细胞因子、生长因子白介素 1 和肿瘤坏死因子的小分子肽，将会严重破坏血管组织。这些小分子肽使平滑肌 细胞向血管壁腔的一侧迁移，并且通过合成细胞外基质形成纤维帽。富含胶原 蛋白的纤维组织、平滑肌细胞、巨噬细胞和 T 淋巴细胞组成纤维帽，形成成熟 的动脉粥样硬化斑块，肿胀成通道并且减少血管中的血流 27。 T 细胞产生肿瘤 坏死因子 -a 从而 阻止平滑肌中胶原蛋白的合成。这些过程削弱已形成的斑块发 展为纤维帽并且摧毁它。纤维帽的破坏使胶原蛋白和血液脂质被暴露，从而促 使积累和粘附血小板并且形成血

34、凝块，可能会造成突然的血流阻滞 27-3 。 (3) 动脉粥样硬化斑块形成 动脉粥样硬化斑块的成分如下： 血管上皮细胞：血管上皮细胞与大分子和血液成分相反应增加蛋白转移至 血浆。 动脉血管平滑肌：血管修复和血液新陈代谢的维护生成脂质，产生各种细 胞因子，在血管壁紧张性控制中至关重要。 淋巴细胞：泡沫细胞、钙离子、细胞病灶、胆固醇酯以及大量的脂肪物质 形成斑块核心 。脂质核是一个蛋黄块，其颜色由类胡萝卜素色素引起 12。 5 第 一 篇 文 献 综 述 第 1 章 动 脉 粥 样 硬 化 研 究 进 展 1.2 动脉粥样硬化与炎症 大量标记，例如细胞因子 （ TNF-ou IL-6 和 IL-1

35、8)、 CRP、 粘附分子（细 胞间粘附分子 -1)在血浆中增加，接下来就是慢性炎症反应 31。基质金属蛋白 酶 （ MMP-9或者明胶酶 B)由巨噬细胞和其他炎症细胞分泌并且在不同的病理 过程中被识别，这些病理过程包括肿瘤转移、全身性炎症、呼吸道疾病、血管 动脉瘤、心肌损伤或重塑。与独立的 IL-18 不同，基线 MMP-9 水平和心血管死 亡的未来风险之间有很强的联系32_34。 IL-18 和 MMP-9 的存在表明病人存在很 大的风险。促炎细胞因子来自单核细胞、巨噬细胞和肝中脂肪组织的激发者 CRP。 炎症急性期的标记一一 CRP， 可以预测急性冠状动脉综合症病人早期和 晚期死亡率。

36、CRP 能自发促进炎症动脉粥样硬化形成，增加纤溶酶原激 活物抑制剂 （ PAI-1)的活性和含量 32_35，上述过程都要受单核细胞和内皮细胞 所影响 。一 些证据显示炎症标记与冠状动脉疾病也有关联， 例如，CRP 显示的 是预测信息而不是其他已被记录的风险因素（例如，胆固醇 ） 。纤维蛋白原和 CRP 这些急性期反应物水平的增加能够反应血管外炎症并且加强动脉粥样硬化 与其并发症。 CRP 是穿透素蛋白家族的一员，它是一个急性期反应物，在感染、 急性损伤或者其他炎症刺激后被释放出来 36_38。在炎症期间，由于血浆中 IL-6 水平的升高而使 CRP 水平升高，这主要是由巨噬细胞和脂肪细胞产生

37、的 38。 CRP 大部分在肝中生成并且由 IL-6 调控，少量的 CRP 由血液淋巴细胞生 成。在动脉粥样硬化的各步中，炎症机制扮演着重 要角色。 CRP 在上述步骤中 通过补体系统激活、吸收、细胞调控、脂质积累和血栓形成发挥重要作用 39。 血栓形成有效地造成对动脉粥样硬化的伤害并且加速损害了心血管。 CRP 在促 血栓形成阶段发挥强化前期凝固物活性和减少纤维蛋白溶解 41的直接作用。 CRP 尤其在动脉粥样硬化的第一阶段能增强补体系统的活性，可能会导致动脉 粥样硬化伤害的发展和加速 4Z43。 1.3 促动脉粥样硬化因子 1.3.1 载脂蛋白 CIII 6 第 一 篇 文 献 综 述 第

38、 1 章 动 脉 粥 样 硬 化 研 究 进 展 载脂蛋白 CIII (apoCIII)是一种位于超低密度脂蛋白 (VLDL)和低密度脂 蛋白（ LDL)表面的一种小蛋白。 apoCIII 抑制了来自于 VLDL 和 LDL44_48 浆的空隙，引起导致动脉粥样硬化的残粒脂蛋白的集聚和血浆上 LDL 的稠密 46_49。含有低密度脂蛋白的 apoCIII 是高三酸甘油脂血症的突出特征 5G。 VLDL 和 LDL 中的 apoCIII 在一些人群中预测了冠心病 51_53。因此， apoCIII 与心血管 疾病的结合通常会归因于其在脂肪蛋白分解代谢上的抑制效果。但是，最近的 研究表明， apo

39、CIII 能够直接导致血管壁上的促炎和促动脉粥样化效果 。 apoCIII 激活外周血单核细胞和血管内皮细胞并且增强了它们的相互粘合 55。这些研 究结果表明，直接的对于内皮细胞的促炎效果可能是 apoCIII 和心血管风险之间 存在正相关的原因。胰岛素耐受性刺激了肝细胞apoCIII 的产生 56。几项临床 医学研究都显示，代谢综合症患者血浆中 apoCIII 的水平会升高，这与身体质量 指数和胰岛素耐受性的稳态模式评估有关 57_59。近些年有报道称， apoCIII 能够 引起体外血管内皮细胞的胰 岛素耐受性，抑制活体内皮依赖性血管舒张功能 6()。 此外， Salerno 等 人 还

40、称 ， apoCIII 的过度表达会增强小鼠的食源性肥胖。这 些研究结果表明，增加的 apoCIII 不仅仅是代谢紊乱的临床表现，还有可能是代 谢紊乱恶化的病态表现。 1.3.2 脂多糖 LPS LPS 作为革兰氏阴性菌细胞壁的主要组成成分之一，也是革兰氏阴性菌的 致病因子，它能够导致全身性炎症反应，已被广泛用于炎性血管疾病的研究中。 动脉粥样硬化属于一种炎症性疾病，而 LPS 感染可能是造成它发生的重要因素 之一。已有相关研究证实牙龈炎和支气管 炎这些血管外慢性感染可通过产生血 管外炎性因子从而加剧远隔部位 AS 的发展进程，而血管内的感染则直接通过 局邰炎症刺激加重 AS 的发生。 CD1

41、4 脂多糖的受体，它在肾移植患者和心 肌梗塞患者中的表达均居高不下 62，这也说明了 LPS 在 AS 的发生发展进程中 发挥重要作用。此外，有关实验研究显示 LPS 联合高脂饮食建立的动物 AS 模 型中， LPS+高脂饮食复合组的血脂代谢水平与单纯高脂饮食组相比，呈现出显 著性差异 63，说明LPS 在 AS 的形成中发挥了很大作用。 第 一 篇 文 献 综 述 第 1 章 动 脉 粥 样 硬 化 研 究 进 展 1.4 动脉粥样硬化与细胞因子 1.4.1 动脉粥样硬化与 TNF-a 尽管最初大家认为肥胖症的 TNF-a 主要来源于脂肪细胞，但现在为我们所 熟知的是 Ml 巨噬细胞渗透入脂

42、肪组织才是这种细胞因子水平提升的主要因素 64-。尽管如此， TNF-a 是第一个被认为连接肥胖、炎症和糖尿病的脂肪因子 64,66 与脂联素相似， TNF-a 被认为涉及到动脉粥样形成的各方面，尽管它表现 出促炎特性。在内皮细胞中， TNF-a 刺激促炎、促凝血和促增殖基因的激活 67_71。 考虑到内皮紊乱能够被定义为血管收缩剂和血管舒张剂产生中的失衡。促炎和 抗炎成分，抑制因子和刺激因子，促凝剂和抗凝剂 72，肥胖期间 TNF-a 的生成 能被认为是内皮紊乱的一个刺激剂。内皮紊乱是动脉粥样硬化通路中的第一 步 74并且这一过程通过TNF-a 的信号传导与转录激活子的感应，最起码是在肥 胖

43、病人中造成动脉粥样硬化相关事件高发生率的部分原因。内皮紊乱的另一个 标记是失活的乙酰胆碱在体内的血管准备中刺激内皮依赖性舒张 75，这一过程 也被 TNF-a 刺激 76，由于它刺激内皮型一氧化氮合酶 （ eNOS)的表达和活性。 通过来源于外膜周围的脂肪组织 （ PAAT)的 TNF-a的顶浆分泌性通路也是造成 NO 生成下降和内皮紊乱的原因 77 8。 由 TNF-a 刺激产生的动脉粥样硬化相关炎症的另一方面是内皮通透性的改 变。这一脂肪因子能够通过内皮和选择性内皮细胞形态学增加粘附分子 (ICAM-1、VCAM-1 和 E-selectin)的表达，增加免疫细胞和象 LDL 的微小颗 粒

44、的渗透性 79。张和同事表明 TNF-a 能够在动脉粥样硬化发展的第一阶段通过 依赖于 NF-KB 和过氧化物酶体增殖物受体 Y (PPAR-Y)串扰的机制 刺激 LDL 的胞移作用，通过 TNF-a 的内皮细胞的激活和粘附分子表达的增加能够被脂联 素所刺激 81。 首先， TNF-a 作为一个跨膜蛋白被合成，然后通过 ADAM-17 (A 解聚素 A 金属蛋白酶 17)的分裂被转化为可溶形式，其增强的活性与局部缺血、心脏衰 竭、动脉粥样硬化、糖尿病和高血压相关 82_85。只有一种单子叶植物抑制剂 ADAM-1 (A 解聚素 A 金属蛋白酶 1)，被认为是金属蛋白酶 3 (TIMP3)的组 织抑制剂，这一抑制剂的活性在肥胖症、动脉粥样硬化、糖尿病和胰岛素抵抗 中 下 降 这 会 导 致 ADAM1活性的增加和 TNF-a 的扩增。 第 一 篇 文 献 综 述 第 1 章 动 脉 粥 样 硬 化 研 究 进 展 脂肪因子也被认为是治疗动脉粥样硬化重要的临床生物标记和药物学靶 标。在老年人的血中， TNF-a 的浓度与冠心病相关联，