MS培养基配制方法-new(共2页).doc

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1、精选优质文档-倾情为你奉上MS 培养基一、大量元素母液1：大量A500 ml母液称取：50NH4NO3KNO3MgSO47H2OKH2PO441.25 g47.5 g9.25 g4.25 g母液2：大量B500 ml 母液称取：100CaCl22H2O或CaCl222 g16.6 g母液3：Fe盐1000 ml母液称取：100FeSO47H2ONa2-EDTA或EDTA-Fe(10mM-100M)2.78 g3.73 g4.211 g注：配制顺序如下1.称取3.73 g Na2-EDTA2H2O溶解于200 ml去离子水中，并置于70 预热 (A)；2.称取2.78 g FeSO47H2O溶解

2、于200 ml去离子水中 (B)；3.将B缓慢倒入A中混合，边倒边搅动，置于70 水浴锅中螯合2 h；4.冷却后定容至1 L。二、微量元素母液4：微量1000 ml母液称取：1000MnSO44H2OZnSO47 H2OH3BO3KI22.3 g8.60 g6.20 g0.83 gNa2MoO42 H2OCuSO45 H2OCoCl26 H2O0.25 g0.025 g0.025 g三、有机物质母液5：有机（不含肌醇）1000 ml母液称取：100盐酸硫胺素 VB1盐酸吡哆醇 VB6烟酸 VB3 VPP甘氨酸（氨基乙酸）0.01g0.05 g0.05 g0.2 g1 L工作液的配制:母液1：大

3、量A母液2：大量B母液3：Fe盐母液4：微量母液5：有机肌醇蔗糖20 ml10 ml10 ml1 ml10 ml0.1 g30 g定容至1 L，用1 M NaOH调pH至5.8，于121 ，高压灭菌20 min。注：配固体培养基可在调pH后加适量Agar或Phytagel；肌醇也可加入有机母液。四、抗生素和激素母液试剂名称配制方法母液浓度Amp（氨苄青霉素）双蒸水溶解，定容，过滤灭菌50 mg/ mlKm（卡那霉素）双蒸水溶解，定容，过滤灭菌50 mg/ mlStr（链霉素）双蒸水溶解，定容，过滤灭菌50 mg/ mlCb（羧苄青霉素）双蒸水溶解，定容，过滤灭菌250 mg/ ml6-BA (

4、6-苄基嘌呤)1M NaOH或盐酸溶解，双蒸水定容，高压灭菌1 mg/ mlNAA（萘乙酸）1M NaOH溶解，双蒸水定容，高压灭菌1 mg/ mlIAA95% 乙醇溶解，双蒸水定容，过滤灭菌1 mg/ ml五、乙酰丁香酮 (Acetone-syringone, AS)称取196.2 mg AS用10 ml DMSO溶解，母液浓度100 mM，-20避光保存，工作浓度100 200 M六、MS溶液的混合配制MS培养基时，每1L培养基取： 母液1：大量A母液2：大量B母液3：Fe盐母液4：微量母液5：有机肌醇蔗糖6-BANAAMS0 无菌苗(1/2 MSAmp)10 ml5 ml5 ml0.5

5、ml5 ml0.0515gMS1 共培养(AS6-BA, NAA)20 ml10 ml10 ml1 ml10 ml0.1g30g500 L100LMS2 分化(Km Cb6-BA, NAA)20 ml10 ml10 ml1 ml10 ml0.1g30g500 L100LMS3 生根(Km CbIAA)10 ml5 ml5 ml0.5 ml5 ml0.05g15g5种母液分别依次加入到800 ml蒸馏水中，混匀后加入肌醇、蔗糖和能高压灭菌的激素（6-BA和NAA），定溶至1000 ml，用1M NaOH调pH至5.8。最后加Phytagel （Sigma）4.4g或Agar 10g。灭菌完后，在培养基凝固前加入AS或 抗生素及不能高压灭菌的激素（IAA）。专心-专注-专业