核酸扩增检测实验室设计及工作流程课件.pptx

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1、核酸扩增检测实验室的设计核酸扩增检测实验室的设计l依据：卫生部颁发的临床基因扩增检验实验室管理暂行办法（卫医发200210号）血液标本的接收血液标本的接收 l通常的工作流程：标本采集 血清分离 编号 保存或检测l应在四个测定区域之外的地方或区域内接收 l接收的标本应收集在原始容器中l在核酸提取时带入至标本制备区标本的接收区的仪器设备要求标本的接收区的仪器设备要求l如果在标本接收区分离血清（浆）标本，有1台分离血清（浆）用离心机、1台生物安全柜、1台冰箱、加样器及相应一次性经高压处理的消耗品如带滤芯吸头、标本接收编号记录本以及记号笔等即可。l如果不在标本接收区分离血清（浆）标本，只是简单的接收，

2、则就不需要分离血清（浆）用离心机、生物安全柜、加样器及其消耗品。理想的核酸扩增实验室设计理想的核酸扩增实验室设计A产物分析区产物分析区空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间专用走廊专用走廊工作流向工作流向扩增区扩增区标本制备区标本制备区试剂准备区试剂准备区产物分析区产物分析区空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间专用走廊专用走廊工作流向工作流向扩增区扩增区标本制备区标本制备区试剂准备区试剂准备区理想的核酸扩增实验室设计理想的核酸扩增实验室设计B核酸扩增检测实验室设计的一般

3、原则核酸扩增检测实验室设计的一般原则l各区独立l注意风向l因地制宜l方便工作“十六字口诀十六字口诀”门门试剂准备区试剂准备区标本制备区标本制备区扩增区扩增区产物分析区产物分析区外走廊外走廊门门门门门门门门试剂准备区试剂准备区标本制备区标本制备区扩 增 及 产 物扩 增 及 产 物分析区分析区外走廊外走廊门门门门门门门门AB试剂准备区试剂准备区标本制备区标本制备区扩 增 及 产扩 增 及 产物分析区物分析区门门门门门门门门空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向走廊走廊走廊走廊试剂准备区试剂准备区标本制备区标本制备区扩增和产扩增和产物分析区物分析区空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向

4、空气流向其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室门试剂准备区试剂准备区标本制备区标本制备区扩 增 及 产扩 增 及 产物分析区物分析区门门门空气流向空气流向空气流向空气流向+空气流向空气流向+走廊走廊试 剂 准 备试 剂 准 备区区标 本 制 备标 本 制 备区区扩增和产扩增和产物分析区物分析区空气流向空气流向+空气流向+其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室空气流向产物分析区产物分析区空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向缓冲间缓冲间缓

5、冲间缓冲间缓冲间缓冲间专用走廊专用走廊工作流向工作流向扩增区扩增区标本制备区标本制备区试剂准备区试剂准备区传递窗传递窗传递窗关于关于“区域区域”合并合并l如使用扩增和产物分析同时完成的实时荧光PCR仪进行核酸扩增检测，扩增区和产物分析区可以合并。l如使用核酸提取、扩增及产物分析等均在一台仪器上完成的全自动核酸检测分析仪，标本制备区、扩增区和产物分析区可合并。无无“基因基因”或或“核酸核酸”概念的重要性概念的重要性符合基本要求的核酸扩增检测实验室的条件符合基本要求的核酸扩增检测实验室的条件l（1）试剂准备区、标本制备区和扩增及产物分析区等三个或四个区域在物理空间上，必须是完全相互独立的，各区域无

6、论是在空间还是在使用中，应始终处于完全的分隔状态，不能有空气的直接相通。l（2）各区的可移动的仪器设备及各种物品包括实验记录本、记号笔、试管架及清洁用具等必须专用。l（3）应在标本制备区、扩增及产物分析区等相对有可能出现“污染物”的区域安装排风扇或其它排风和有效的装置，以使空气按试剂准备区标本制备区扩增（及产物分析）区方向流动。核酸扩增实验室的工作流程核酸扩增实验室的工作流程试剂准备区试剂准备区标本制备区标本制备区扩增区及扩增产物分析区扩增区及扩增产物分析区试剂准备区试剂准备区l核酸扩增实验室中最为“洁净”的区域，不应有任何核酸的存在，包括试剂中所带的标准品和阳性对照。l所有实验用洁净物品如离

7、心管、吸头等的存放和准备处。l商品试剂盒： 75%乙醇、焦碳酸二乙酯（DEPC）处理水、有机溶剂等可能需要自配l自制试剂：一次较大量配制，然后分装成小瓶保存，每次检测时，取出一小瓶使用，未用完的即弃掉，不再使用。l仪器设备主要有加样器、天平、离心机和冰箱等，最好配备超净工作台。标本制备区标本制备区l仪器设备主要有混样设备、核酸提取仪、生物安全柜、加样器、高速台式（冷冻）离心机、加热模块或水浴箱、冰箱等。生物安全柜不应放在实验室门口等易受人员走动影响的地方，也不应直对分体式空调。l主要是用于血液样本的混样、核酸样本的提取。l加样器吸头必须带滤芯。l使用加热模块时，如在模块孔中填入二氧化硅细砂，然

8、后将标本管置于细砂中温育，可得到较为一致的温育温度。扩增及产物分析区扩增及产物分析区l扩增反应体系的配制和提取核酸的加入，可在标本制备区也可在本区内进行，关键是要防止产物的污染。如果空间允许的话，也可在一个独立的区域内进行。l加样时，先加提取的核酸模板样本，每加完一个即盖好盖子，然后加阳性质控核酸模板，再就是标本制备阴性质控和仅含按样本一样稀释的主反应混合液的扩增阴性质控，这样做的目的是，最大可能地测出以前扩增产物的交叉污染。扩增及产物分析区扩增及产物分析区l热循环仪的电源应专用，并配备一个不间断电源（UPS）或稳压电源。l每次扩增后，可使用可移动紫外灯对扩增热循环仪进行照射。l扩增仪应定期进行校准。核酸扩增实验室最有效的防核酸扩增实验室最有效的防“污染污染”措施措施l实验室的“通风”l次氯酸钠溶液的使用l1mol/L HCl溶液的使用l紫外照射l无水乙醇溶液？ 谢谢谢谢！