第八章芳香族硝基和氨基化合物课件.ppt

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1、第八章第八章 芳香族硝基和氨基化合物 及其代谢产物的测定 主要内容主要内容 苯胺和联苯胺 硝基苯 三硝基甲苯 ? 理化性质 ? 代谢和生物监测指标 ? 样本采集与保存 ? 测定方法 第一节 苯胺和联苯胺 ?苯胺理化性质 易挥发；微溶于水； 苯胺检测的原因苯胺检测的原因 ?苯胺的广泛应用； ?可经呼吸道、皮肤和消化道进入人体 ?毒害：急性、慢性、皮肤损伤； ?尿中代谢物：对氨基酚 苯胺检测的样品采集苯胺检测的样品采集 ?在体内代谢速度快：班末或班后2小时内采样 ?样品保存； 尿中对氨基苯酚的测定尿中对氨基苯酚的测定 ?（一）盐酸萘乙二胺分光光度法 1 原理 尿液加盐酸水解后，于中性溶液中，用乙酸

2、乙酯萃取对氨基酚，再酸化反萃取至盐酸溶液中，经重氮化，与盐酸萘乙二胺耦合显色，于波长582nm处比色定量 ?（二）高效液相色谱法 1 原理 尿液加盐酸加热水解后，在酸性条件下用乙酸乙酯萃取，除去部分干扰物，然后再中性条件下用乙酸乙酯提取尿样中的对氨基酚，C18柱分离，254nm检测，流动相为30%甲醇水，以保留时间定性，用峰高或峰面积定量。 本法最低检测浓度：0.5mg/L 超高效液相色谱-质谱法测定尿中苯胺和联苯胺 ?超高效液相色谱法的原理与高效液相色谱法基本相同，所改变的地方有以下几点： ?（1）小颗粒、高性能微粒固定相的出现。 ?（2）超高压输液泵的使用。 ?（3）灵敏检测器。 ?（4）

3、使用低扩散、低交叉污染自动进样器。配备了针内进样探头和压力辅助进样技术； ?（5）仪器整体系统优化设计。 第二节 硝基苯（C6H5NO2） ?广泛用于染料、农药、炸药等工业领域，进入环境后难以被生物降解 是致癌物 ?无色或淡黄色 苦杏仁味 油状液体 见光颜色变深 ?易溶于有机溶剂 ?体内代谢产物为对硝基酚：强还原性 酸碱指示剂 代谢和生物监测指标代谢和生物监测指标 ?脂溶性化合物， ?可经呼吸道、皮肤和消化道吸收 ?反复接触引起肝肾损伤及贫血，饮酒增强毒性 样品采集及保存样品采集及保存 ?用具塞聚乙烯塑料瓶采集接触者班后尿，尽快测量比重 ?邻甲酚分光光度法：100ml尿液加入3滴甲醛，4可保存

4、3天 ?高效液相色谱法：100ml加入34滴盐酸， 4可保存2周 尿中对硝基酚的测定尿中对硝基酚的测定 ?（一）邻甲酚分光光度法 1 原理 尿中对硝基酚以游离形式或与葡萄糖醛酸、硫酸等结合存在。尿样经水解后，结合的对硝基酚转化为游离形式，用有机溶剂萃取对硝基酚，再用氨溶液反萃取。用三氯化钛还原对硝基酚，生产对氨基酚与邻甲酚作用，形成靛酚蓝，于620nm比色定量。 尿中对硝基酚的测定尿中对硝基酚的测定 ?（二）高效液相色谱法 1 原理 尿样经水解后，加NaCl旋涡混合溶解，用乙酸乙酯萃取对硝基酚，梯度洗脱，C18柱分离，在318nm波长下测定。以保留时间定性，峰高或峰面积定量。 第三节 三硝基甲

5、苯（TNT） ?三种同分异构体 ?淡黄色针状结晶 无臭 有吸湿性 ?难溶于水 易溶于有机溶剂 ?属爆炸品 ?体内代谢产物： 代谢和生物监测指标代谢和生物监测指标 ?TNT在人体内代谢途径：皮肤吸收 ?TNT与蛋白质加合形成4A-Hb（接触TNT人群的生物标志物） 样品的采集及保存样品的采集及保存 ?血样 采集静脉血1ml，注入经肝素处理的试管中，混匀，采学过程避免污染，冰箱冷藏保存 ?尿样 用聚乙烯塑料瓶收集100ml班后尿 采样避免污染，采样后尽早加酸，-20保存 尿液中TNT代谢产物的测定 ?主要方法有分光光度法、气相色谱法和高效液相色谱法。 ?分光光度法只能测定硝基化合物的总量 ?气相色

6、谱不能测定遇热分解的4-羟氨基-2,6-二硝基甲苯（4-HA） ?HPLC可对异构体进行分离测定 HPLC测定TNT及五种代谢产物 ?原理 尿样加6mol/L 盐酸于40水解10min，碳酸氢钠调pH=7后用苯等体积提取4-HA，或在100水解1h，碳酸氢钠调pH=7后用苯等体积提取尿中TNT其他代谢产物。 气相色谱测定尿中2,6-二硝基-4-氨基甲苯（4-A） ?尿液加盐酸加热水解后，在PH为7-8条件下用甲苯萃取尿样中4-A，采用0V-17柱分离，电子捕获检测器检测，以保留时间定性，峰面积定量 净化液-液萃取法 液液萃取是指两个完全不互溶或部分互溶的液相接触后，一个液相中的溶质溶的液相接触

7、后，一个液相中的溶质 经过物理或化学作用进入另一个液相，或在两相中重新分配的过程。 固相萃取 Solid Phase Extraction , SPE ?固相萃取：是近年发展起来一种样品预处理技术, 由液固萃取和柱液相色谱技术结合发展而来 , 主要用于样品的分离、纯化和浓缩。 ?广泛的应用在医药、食品、环保、商检、农药残留等领域。 固相萃取原理 ?基于液相色谱分离机制的样品前处理方法。基于液相色谱分离机制的样品前处理方法。利用固体吸附剂将样液中目标化合物吸附，利用固体吸附剂将样液中目标化合物吸附，与样品中的基体和干扰化合物分离，后用洗与样品中的基体和干扰化合物分离，后用洗脱液洗脱，达到分离与净

8、化目标化合物的目脱液洗脱，达到分离与净化目标化合物的目的。的。 固相萃取原理 ?分为正相（吸附剂极性大于洗脱液极性），反相（吸附剂极性小于洗脱液极性），离子交换和吸附 。 固相萃取仪 固相萃取仪 ? SPESPE装置由SPESPE小柱和辅件构成。 ? SPESPE小柱：由三部分组成，柱管、烧结垫和填料。 ? SPESPE辅件：一般有真空系统、真空泵、吹干装置、惰性气源、大容量采样器和缓冲瓶。采样器和缓冲瓶。 SPE 操作步骤 I. 柱的预处理 为了获得高的回收率和良好的重现性，固相萃取柱在使用之前必须用适当的溶剂进行预处理，预处理除去填料中可能存在的杂质，另一个目的是使填料溶剂化，提高固相萃取

9、的重现性 。 II. 样品的添加 预处理后，试样溶液被加至并以一定的流速通过柱子。在该步骤分析物被保留在吸附剂上。 SPE 操作步骤 III. 柱的洗涤 在样品通过萃取柱时，不仅分析物被吸附在柱子上，一些杂质也同时被吸附，选择适当的溶剂，将干扰组分洗脱下来，同时保持分析物仍留在柱上。 IV. 分析物的洗脱 用洗脱剂将分析物洗脱在收集管中，为了提高分析物的浓度或为以后分析调整溶剂杂质，可以把收集到的分析物溶液用氮气吹干，再溶于小体积适当的溶剂中。 固相萃取填料 ?常用的正相吸附剂有硅酸镁、硅胶。 ?反相SPE 采用化学键合C18 、C8 等，聚二甲基硅氧烷( PDMS) 、聚丙烯酸盐( PA) 等聚合物。 固相萃取的优点 ?显著减少溶剂用量 ?回收率高, 重现性好 ?简便、快速, 批量提取与富集样品 ?填料种类多, 应用范围广 ?易于实现自动化 小结小结 ?掌握：相关化合物的生物监测指标 ?熟悉：相关化合物及其代谢物的测定方法(其中一种常用的方法)、样品采集注意事项 ?了解：相关化合物及其代谢产物测定的操作步骤