活性低聚糖及活性多糖的测定(精)课件.ppt

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1、活性低聚糖及活性多糖的测定活性低聚糖及活性多糖的测定 茶多酚、类黄酮物质的测定茶多酚、类黄酮物质的测定 牛黄酸的测定牛黄酸的测定 活性脂的测定活性脂的测定低聚果糖的测定：低聚果糖的测定：HPLCHPLC法法分光光度法测定枸杞子多糖含量分光光度法测定枸杞子多糖含量 原理：原理： 样品先用样品先用8080乙醇提取以除去单糖、低聚糖、苷类乙醇提取以除去单糖、低聚糖、苷类及生物碱等干扰成分，然后用蒸馏水提取其中所含的及生物碱等干扰成分，然后用蒸馏水提取其中所含的多糖类成分。多糖在硫酸作用下，水解成单糖，并迅多糖类成分。多糖在硫酸作用下，水解成单糖，并迅速脱水生成糠醛衍生物，此衍生物与苯酚缩合形成有速脱

2、水生成糠醛衍生物，此衍生物与苯酚缩合形成有色化合物，用分光光度法测定其吸光度，从而计算枸色化合物，用分光光度法测定其吸光度，从而计算枸杞多糖的含量。本法简便，显色稳定，灵敏度高，重杞多糖的含量。本法简便，显色稳定，灵敏度高，重现性好。现性好。活性低聚糖及活性多糖的测定活性低聚糖及活性多糖的测定气相色谱法测定食品中糖及糖醇的含量气相色谱法测定食品中糖及糖醇的含量加工食品中的糖类主要有葡萄糖、果糖、蔗糖及麦加工食品中的糖类主要有葡萄糖、果糖、蔗糖及麦芽糖；糖醇主要有山梨糖醇、麦芽糖醇、甘露糖醇芽糖；糖醇主要有山梨糖醇、麦芽糖醇、甘露糖醇等是保健食品中的重要功能成分。等是保健食品中的重要功能成分。气

3、相色谱法，条件适合时，可同时进行多种糖及糖气相色谱法，条件适合时，可同时进行多种糖及糖醇的分析。醇的分析。一一 、茶多酚的含量、茶多酚的含量 茶叶中多酚类物质占茶嫩梢干重的茶叶中多酚类物质占茶嫩梢干重的20203535，由约由约3030种以上的酚类物质所组成，通称茶多酚。按其化种以上的酚类物质所组成，通称茶多酚。按其化学结构分为四类：学结构分为四类： （1 1）儿茶素类，属黄烷醇类；）儿茶素类，属黄烷醇类； （2 2）黄酮及黄酮醇类；）黄酮及黄酮醇类； （3 3）花白素及花青素，即羟基）花白素及花青素，即羟基- -4 4- -黄烷醇及其钾盐；黄烷醇及其钾盐； （4 4）醋酸及缩酚酸类。其中以黄

4、烷醇类化合物最重要醋酸及缩酚酸类。其中以黄烷醇类化合物最重要（占多酚的（占多酚的8080左右）。纯儿茶素一般为白色无定形粉左右）。纯儿茶素一般为白色无定形粉末，在空气中极易氧化成棕色物，能溶于水、乙醇、末，在空气中极易氧化成棕色物，能溶于水、乙醇、茶多酚、类黄酮物质的测定茶多酚、类黄酮物质的测定甲醇、丙酮、乙酸乙酯等有机溶剂中。儿茶素分子中甲醇、丙酮、乙酸乙酯等有机溶剂中。儿茶素分子中含有较活泼的羟基氢，具有很强的供氢能力，是一种含有较活泼的羟基氢，具有很强的供氢能力，是一种理想的纯天然抗氧化剂，能与脂肪酸自由基结合，使理想的纯天然抗氧化剂，能与脂肪酸自由基结合，使自由基转化为惰性化合物，中止

5、自由基的连锁反应，自由基转化为惰性化合物，中止自由基的连锁反应，即中止油脂的自动氧化即中止油脂的自动氧化实验表明，茶多酚清除活性氧自由基作用的活性，为实验表明，茶多酚清除活性氧自由基作用的活性，为等量维生素等量维生素C C的的493493倍，对亚硝酸盐的消除率及对倍，对亚硝酸盐的消除率及对N N- -亚亚硝胺合成的阻断率分别为硝胺合成的阻断率分别为96.996.9和和98.698.6。且能有效。且能有效消除脂质过氧化产物丙二醛，具有降血脂的显著功效。消除脂质过氧化产物丙二醛，具有降血脂的显著功效。还有研究表明，茶多酚还具有抑制痢疾、伤寒、还有研究表明，茶多酚还具有抑制痢疾、伤寒、 霍乱、金黄色

6、葡萄球菌等有害菌的作用；具有较强的霍乱、金黄色葡萄球菌等有害菌的作用；具有较强的抗放射性作用，以及在抗衰老，抑制瘤细胞，预防心抗放射性作用，以及在抗衰老，抑制瘤细胞，预防心脑血管疾病等方面都显示出很好的效应，是一种有开脑血管疾病等方面都显示出很好的效应，是一种有开发前景的天然抗氧化剂。发前景的天然抗氧化剂。19881988年年 7 7月我国已批准茶多月我国已批准茶多酚作为食品添加剂。国内已建立了茶多酚工业化生产酚作为食品添加剂。国内已建立了茶多酚工业化生产线，并开发研制出了茶多酚的第二代产品即儿茶素线，并开发研制出了茶多酚的第二代产品即儿茶素（TCTC）。）。 测定方法：测定方法：高锰酸钾直接

7、滴定法和酒石酸铁比色法，高锰酸钾直接滴定法和酒石酸铁比色法，由于高锰酸钾直接滴定法操作比较复杂，且靠肉眼观察由于高锰酸钾直接滴定法操作比较复杂，且靠肉眼观察颜色判断终点，如果样品溶液颜色较深时，可能影响测颜色判断终点，如果样品溶液颜色较深时，可能影响测定结果。本节主要讲解定结果。本节主要讲解酒石酸铁比色法测定茶多酚的含酒石酸铁比色法测定茶多酚的含量。量。 茶多酚的性质茶多酚的性质： 能溶于水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯，微溶能溶于水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯，微溶于油脂。对热、酸较稳定，于油脂。对热、酸较稳定，2%2%的溶液加热至的溶液加热至120 120 并并保持保持3030minmin，

8、无明显变化。在碱性条件下易氧化变质。无明显变化。在碱性条件下易氧化变质。 测定原理测定原理 酒石酸铁能与茶多酚生成紫褐色络合物，络合物溶酒石酸铁能与茶多酚生成紫褐色络合物，络合物溶液颜色的深浅与茶多酚的含量成正比。因此可以用比色液颜色的深浅与茶多酚的含量成正比。因此可以用比色方法测定。该法可避免高锰酸钾滴定法所产生的人为视方法测定。该法可避免高锰酸钾滴定法所产生的人为视觉误差。觉误差。 仪器仪器 分光光度计分光光度计 试剂试剂 （1 1）酒石酸铁溶液：称取）酒石酸铁溶液：称取 FeSO4FeSO47H2O 1.000g7H2O 1.000g，含含 4 4个结晶水的酒石酸钾钠个结晶水的酒石酸钾钠

9、5.0005.000g g，加蒸馏水溶解后，用蒸加蒸馏水溶解后，用蒸馏水稀释至馏水稀释至10001000mLmL（2 2）PH7.5PH7.5的磷酸缓冲液：的磷酸缓冲液：60.260.2g Na2HPO4g Na2HPO412H2O 12H2O ， 5.00gNaH2PO4 5.00gNaH2PO42H2O2H2O，加蒸馏水溶解后用蒸馏水稀释加蒸馏水溶解后用蒸馏水稀释至至10001000mLmL步骤步骤 （l l）样品溶液的制备方法：准确称取茶叶磨碎样品样品溶液的制备方法：准确称取茶叶磨碎样品1 1g g于于200200mLmL三角烧瓶中，加入沸水三角烧瓶中，加入沸水8080mLmL，在沸水浴

10、中浸在沸水浴中浸提提3030minmin，然后过滤、洗涤，滤液倒人然后过滤、洗涤，滤液倒人100100mLmL容量瓶中，容量瓶中，冷至室温，最后用蒸馏水定容至刻度，摇匀，备用。冷至室温，最后用蒸馏水定容至刻度，摇匀，备用。 （2 2）测定：吸取样品溶液）测定：吸取样品溶液 1mL1mL于于 25 25mLmL容量瓶中，容量瓶中，加蒸馏水加蒸馏水4 4mLmL，加酒石酸铁溶液加酒石酸铁溶液5 5mLmL，摇匀，再加入摇匀，再加入PH7.5PH7.5磷酸缓冲液稀释至刻度。以蒸馏水代替样品溶液磷酸缓冲液稀释至刻度。以蒸馏水代替样品溶液加入同样的试剂作空白。选择加入同样的试剂作空白。选择540540n

11、mnm波长和波长和1 1cmcm的比色杯的比色杯测定吸光度。测定吸光度。 计算计算 式中：式中：茶多酚的含量，茶多酚的含量，% % A A样品溶液的吸光度值样品溶液的吸光度值 T T样品溶液的总体积，样品溶液的总体积，mLmL V V测定用样品溶液的量，测定用样品溶液的量，mLmL m m样品质量，样品质量，g g 3.913 3.913用用1 1cmcm比色杯，当吸光度为比色杯，当吸光度为1.01.0时，试液时，试液中茶多酚的浓度为中茶多酚的浓度为3.9133.913mg/mg/mLmL%1001000913. 3mVTA 说明及注意事项说明及注意事项 食品中黄酮类化合物的测定（食品中黄酮类

12、化合物的测定（AlClAlCl3 3比色法）比色法）功能：抗氧化、清除自由基、保护心血管、辅助抑功能：抗氧化、清除自由基、保护心血管、辅助抑制肿瘤作用制肿瘤作用原理：黄酮类化合物原理：黄酮类化合物AlClAlCl3 3黄色络合物黄色络合物 （420420nmnm处测定）处测定）计算：当计算：当A A为为1 1时，相当于含黄酮甙时，相当于含黄酮甙320320 g g。)100/(1000320gmgmVVEx总牛黄酸的测定牛黄酸的测定功能：人体必需氨基酸，特别是与胎儿和婴幼儿的中功能：人体必需氨基酸，特别是与胎儿和婴幼儿的中枢神经系统及视网膜等的发育有密切关系。枢神经系统及视网膜等的发育有密切关

13、系。测定方法：测定方法：HPLCHPLC法或氨基酸分析仪法法或氨基酸分析仪法HPLCHPLC法测定牛黄酸的原理：法测定牛黄酸的原理： 提取试样中的牛磺酸提取试样中的牛磺酸邻苯二甲醛（邻苯二甲醛（OPAOPA）衍生衍生C18C18柱分离柱分离外标法定量外标法定量活性脂的测定活性脂的测定定义：具有生物活性的脂和类脂。定义：具有生物活性的脂和类脂。类别：类别： （1 1）多不饱和酸：亚油酸、）多不饱和酸：亚油酸、亚麻酸、亚麻酸、亚麻酸、亚麻酸、花生四烯酸花生四烯酸 （2 2）磷脂：甘油醇磷脂、神经醇磷脂）磷脂：甘油醇磷脂、神经醇磷脂 （3 3）油脂替代品：蔗糖聚脂、羧酸酯、丙氧基甘油脂）油脂替代品：蔗糖聚脂、羧酸酯、丙氧基甘油脂 三烷氧基丙三羧酸酯、二元酸酯、霍霍巴油、聚硅氧烷三烷氧基丙三羧酸酯、二元酸酯、霍霍巴油、聚硅氧烷 （4 4）油脂模拟品：）油脂模拟品：分光光度法测定磷脂含量分光光度法测定磷脂含量原理：原理：测定步骤：脂质的提取、消化、测定、计算测定步骤：脂质的提取、消化、测定、计算比色定量钼酸铵磷消化磷脂nmHCLO6304GCGC法测定花生四烯酸含量法测定花生四烯酸含量原理、步骤：有机溶剂提取原理、步骤：有机溶剂提取AAKOH-AAKOH-甲醇甲酯化甲醇甲酯化 GC GC分离测定。分离测定。