2022细胞生物学实验报告.docx

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1、2022细胞生物学实验报告 细胞生物学试验报告细胞生物学试验报告细胞生物学试验报告小鼠脾细胞原代培育姓名：杜旭学号：201*00230155系年级：201*级临七一班同组者：赵伟日期：201*/4/25学习并驾驭动物细胞培育的无菌操作技术。了解原代细胞培育的基本方法及操作过程。学习细胞计数及养分液的配制。细胞原代培育原代细胞培育是指干脆从动物体内获得的细胞、组织和器官，经体外培育后，直到第一次传代为止。这种培育，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官），经消化，分解成单个游离细胞，在人工培育下，使其不断的生长及繁殖。细胞培育是一种操作繁琐而又要求非常严谨的试验技术。要使细胞能在

2、体外长期生长，必需满意两个基本要求：一是供应细胞存活所必需的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、相宜的温度，留意外环境酸碱度与渗透压的调整。二是严格限制无菌条件。细胞死活鉴定死活细胞的鉴定方法有许多种，常用的有染色法和仪器分析法。染色法是常用的细胞死活鉴定方法，简便，易于操作。不同的死活细胞鉴定方法有各自不同详细的反应机理，但无论采纳何种方法，都是利用了死活细胞在生理机能和性质上的差异。染色法分化学染色法和荧光染色法，依据染色机理的不同，染料或使死细胞着色，或使活细胞着色。死活细胞在生理机能和性质上的差异主要包括：死活细胞细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜

3、是一种选择性膜，对细胞起爱护和屏障作用，只允许物质选择性的通过；而细胞死亡之后，细胞膜受损，通透性增加。常用的以台盼蓝鉴别细胞死活的方法就是利用了这一性质。台盼蓝，又称锥蓝，是一种阴离子型染料，不能透过完整的细胞膜。所以经台盼蓝染色后只能使死细胞着色，而活细胞不被着色。甲基蓝有类似的染色机理。植物细胞的质壁分别也可鉴定死活。死活细胞在代谢上的差异：是采纳美蓝染料鉴定酵母细胞死活的依据。美蓝是一种无毒染料，氧化型为蓝色，还原型为无色。由于活细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原实力，能使美蓝从蓝色的氧化性变为无色的还原型，因此美蓝染色后活的酵母细胞无色；而死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们

4、的无还原实力或还原实力极弱，使美蓝处于氧化态，从而被染成蓝色或淡蓝色。除此之外，还有一些细胞器的专有染料。如液泡系的专有染料中性红。中性红是一种低毒性染料，可以使活细胞液泡着红色，而细胞质和细胞核不被着色；死细胞的液泡不被着色或浅染，染料弥散于整个细胞中，细胞核和细胞质被染成红色。有时侯为了增加染色效果可以将两种染料结合运用，如甲基蓝-中性红混合染色法。材料小白鼠试剂台盼蓝、伊红、PBS缓冲液、细胞培育液（含生长因子）器材剪子、棉球、75%酒精、移液枪、无菌操作台、正置光学显微镜、倒置光学显微镜、解剖盘、滴管、离第1页细胞生物学试验报告心管、离心机、注射器、Eppendorf管、培育皿、酒精灯

5、、塑料培育皿、载玻片、盖玻片、血细胞计数板取材取小鼠一只，采纳断头法处死。清水洗小鼠浸入75%酒精中消毒3min，取出转入超净工作台内的解剖盘中，无菌操作打开腹腔，取出其脾脏，除去其四周的脂肪组织，并用PBS液自上而下淋洗1-2次，转入无菌培育皿中待用。分别脾细胞用滴管向培育皿中注入30滴PBS缓冲液，再用“L”型针头注射器在皿中吸取0.2毫升PBS液注入脾脏，注射时沿长轴注射。然后再用针头在脾脏上扎眼，并用“L”型针头轻轻刮出脾细胞。在匀称吹匀脾脏细胞。吸取上述分别的单个脾细胞悬液，放入Eppendorf管中，使量至1mL，以1000r/min离心5min。培育脾细胞取塑料培育皿一套，用移液

6、枪吸取培育液2mL加入塑料皿中，并将皿标记待用。取离心后的Eppendorf管，弃去上清液，用移液枪（200ul）吸取塑料皿中的培育液400ul加入弃去上清的Eppendorf管中，用枪头吹匀管底的脾细胞，吸取200ul脾细胞悬液接种于上述塑料皿中，混匀后放入37C，5%CO2的培育箱中培育。配制染液用生理盐水配成5%台盼蓝染液，备用。染色取0.5mL细胞悬浊液放入试管中，加入1-2滴染液。混合。2-5min后将细胞放在血细胞计数板上视察死活状况，留意不要有气泡产生，放大倍数为10x10。染色后活细胞不着色，死细胞显示蓝色。留意染色时间不能超过15min，否则染液将细胞毒杀。计数在10x10倍

7、的显微镜下视察，计算血细胞计数板的4个4小方格的细胞数量。包括细胞总数与死细胞数量。压线者计上不计下，计左不计右。计算细胞活力依据公式：细胞活力=(总细胞数-死细胞数)/总细胞数100%第2页细胞生物学试验报告台盼蓝染色后的细胞（10x10）伊红染色后的细胞（10x10）总细胞数和活细胞数统计表（1010）项目自己培育细胞老师培育细胞总细胞数个/ml活细胞数个/ml细胞活力1.41067.51053.01055.510521.4%73.3%结果分析本次试验中我们小组自己培育细胞所测细胞活力为21.4%，并不算高，分析得应有以下缘由可能影响试验结果（包括误差）：若在无菌操作的过程中操作不规范，导

8、致染菌，会极大的影响视察，导致试验失败。若在离心分别呈单细胞的过程中离心机转速过快或时间过长很可能会导致细胞裂开，导致小鼠脾细胞大量死亡。染色时间过长，或视察时间过长都会导致染色试剂将细胞杀死，使细胞活力骤降，这是导致细胞活力比较低的重要缘由。试验中的一些操作不正确或不规范的状况、计算带来的误差等也会干脆导致试验误差。留意事项严格进行动物消毒，需用75%酒精消毒。严格进行无菌操作，防止细菌、霉菌、支原体污染，避开化学物质污染。吸取液体前，瓶口和吸管硬行火焰消毒；吸取液体时，避开碰撞。离心管入台前，管口、管壁应消毒。试验者离开超净台时，要随时用肘部关闭工作窗。器材运用时既要留意用火焰消毒，又要防

9、止烫伤、烫死细胞。第3页扩展阅读：细胞生物学试验报告试验六细胞膜的渗透性一、试验目的了解细胞膜1的渗透性及各类物质进入细胞的速度2二、试验原理1、在等渗溶液中，细胞对各种溶质的透过性不同。有的溶质可以进入，有的溶质不能渗入。2、渗入的溶质能提高细胞的渗透压，促进水分子进入细胞，引起溶血现象3。3、不同的溶质渗入到细胞内的速度不同，因此溶血时间也不同。三、试验材料簇新血液（鸡血、猪血、牛血等）四、试验器材试管（1.5cmX18cm）、试管架、10ml移液管、1ml移液管、200ml烧杯（2个）、250ml容量瓶、移液枪、胶头滴管、菜刀、吸球、电子天平、显微镜、盖玻片、载玻片、秒表五、试验药品及试

10、剂0.17MNaCl、0.17MNH4Cl、0.17MNH4Ac、0.17MNaNO3、0.12MNa2SO4、0.12M草酸铵、0.32M葡萄糖、0.32M甘油、0.32M乙醇、0.32M丙酮、肝素抗凝剂4六、试验步骤1、制备血液稀释液（1）抗凝剂的制备：首先称取1克肝素钠粉末，然后加入0.17MNaCl溶液10ml（110的比例），混合匀称，制成肝素抗凝剂。（2）血液稀释液的制备：取簇新血液，按比例（肝素抗凝剂:血液=110）混合匀称，配制成经肝素抗凝的血液56。（3）按比例（经肝素抗凝的血液0.17MNaCl溶液=110）混合匀称，形成一种不透亮的红色液体7。2、低渗溶液（空白比照）的视

11、察取试管一只，加入10ml蒸馏水，然后再加入1ml稀释的血液。留意视察溶液颜色的改变。结果是溶液由不透亮的红色变为澄清。记录下这个过程所要的时间。3、红血球的渗透性按表一的配制，分别在下列十种等渗溶液中进行试验。轻轻摇动，留意有无颜色改变，是否有溶血现象发生，登记时间（自加入稀释血液到溶液渐渐由红色变为透亮澄清，红血球全部溶血所需时间），填入表一的空格中。4、显微视察1何为细胞膜？5留意：这一步，动作要特别快速，否则鸡血会凝固。或者先把抗凝剂加入到烧杯中，再加入簇新的2鸡血，边加边震荡即可。为何不同物质进入细胞的速度不同？6为什么簇新的鸡血会凝固？3何为溶血现象？7为什么这一步要运用0.17M

12、的NaCl溶液？4你知道有哪些血液抗凝剂？（1）血液红细胞的视察滴一滴稀释的血液于载玻片上，盖上盖玻片。用光学显微镜视察细胞的种类、形态和颜色。（2）细胞破裂的视察在上一步的载玻片的一端滴加清水，在另一端吸水，并在显微镜下视察细胞的裂开。七、试验结果与分析1、比较和分析你所视察到的试验结果，并说明缘由。结果：（1）在所供应的试剂中不溶血的有：（2）在所供应的试剂中不完全溶血的有：（3）在所供应的试剂中完全溶血的有：结果分析与比较：结论：2、绘制你所视察到的血液细胞图。3、探讨溶血试验在探讨中应用的可能性。附1：试剂配制表1、0.17MNaCl须要克NaCl，定容至100ml。2、0.17MNH

13、4Cl须要克NH4Cl，定容至100ml。3、0.17MNH4Ac须要克NH4Ac，定容至100ml。4、0.17MNaNO3须要克NaNO3，定容至100ml。5、0.12MNa2SO4须要克Na2SO4，定容至100ml。6、0.12M草酸铵须要克草酸铵，定容至100ml。7、0.32M葡萄糖须要克葡萄糖，定容至100ml。8、0.32M甘油须要克甘油（100%），定容至250ml。9、0.32M乙醇须要克无水乙醇，定容至250ml。10、0.32M丙酮须要克丙酮，定容至250ml。附2：表一在不同低渗溶液下溶血现象的调查编号12345678910试剂10ml0.17MNaCl+1ml稀释

14、的鸡血10ml0.17MNH4Cl+1ml稀释的鸡血10ml0.17MNH4Ac+1ml稀释的鸡血10ml0.17MNaNO3+1ml稀释的鸡血10ml0.12MNa2SO4+1ml稀释的鸡血10ml0.12M草酸铵+1ml稀释的鸡血10ml0.32M葡萄糖+1ml稀释的鸡血10ml0.32M甘油+1ml稀释的鸡血10ml0.32M乙醇+1ml稀释的鸡血10ml0.32M丙酮+1ml稀释的鸡血是否溶血时间附3：溶血结果的推断（1）不溶血：液体分2层，上层浅黄色透亮，下层红色不透亮，镜检红细胞完好。（2）不完全溶血：溶液混浊，上层变红色，镜检有部分红细胞裂开。（3）完全溶血：液体变红而且透亮，镜

15、检发觉细胞全成碎片。附4：细胞膜内外物质交换示意图原始生命向细胞进化所获得的重要形态特征之一，是生命物质外面出现了一层膜性结构，即细胞膜。细胞膜和细胞内膜系统总称为生物膜(biomembrane)。细胞膜(cellmembrane)，又称原生质膜，是细胞结构中分隔细胞内、外不同介质和组成成分的界面。其厚度通常为78nm，由脂类和蛋白质组成。一般蛋白质占60%-80%，类脂占20%-40%，碳水化合物约占5%。关于细胞膜的结构模型，流体镶嵌模型是目前被最广泛接受和认可的观点。该模型由美国加州高校的辛格(S.J.Singer)和尼克森(G.L.Nicolson)于1972年提出。该模型突出了膜的流

16、淌性和不对称性，其结构特征是：生物膜的骨架是磷脂双分子层，其中磷脂分子的疏水性尾部相对，极性头部朝向水相。蛋白质或嵌在脂双层表面，或嵌在其内部，或横跨整个脂双层，表现出分布的不对称性。依据在膜上的位置不同，膜蛋白可分为两类：通过强疏水或亲水作用同膜脂坚固结合不易分开的，称为整合蛋白(integralprotein)或内在蛋白；附着在膜表层，与膜结合比较疏松简单分别的，称为外周蛋白(peripheralprotein)。细胞膜的表面还有糖类分子，形成糖脂、糖蛋白。因脂双层具有流淌性，故蛋白质分子也可以在脂双层中横向移动；又因膜的内外表面上脂类和蛋白质的分布不匀称，反映了膜两侧的功能不同。细胞膜是

17、细胞与四周环境和细胞与细胞间进行物质交换和信息传递的重要通道。其最重要的特性是半透性，或称选择透过性，对进出入细胞的物质有很强的选择透过性。这是细胞膜最基本的一种功能，假如丢失了这种功能，细胞就会死亡。细胞膜的功能有：1)分隔形成细胞和细胞器，为细胞的生命活动供应相对稳定的内环境，膜的面积大大增加，提高了发生在膜上的生物功能；2)屏障作用，膜两侧的水溶性物质不能自由通过；3)选择性物质运输，伴随着能量的传递；4)生物功能：激素作用、酶促反应、细胞识别、电子传递等；5)物质转运功能：细胞与四周环境之间的物质交换，是通过细胞膜的转运功能实现的，其主要转运方式有四种，即单纯扩散、易化扩散、主动转运、

18、入胞和出胞作用。6)细胞膜的受体功能：受体是细胞识别和结合化学信息的特别结构，其本质是蛋白质。试验八细胞融合试验目的驾驭细胞融合原理、应用PEG融合细胞的方法以及细胞融合率的计算。试验用品1.材料鸡红细胞2.器材和仪器一般光学显微镜、一般低速离心机、恒温水浴箱、刻度离心管、试管、载玻片、盖玻片3.试剂50PEG(MW4,000)、Hanks液(pH7.4)、生理盐水试验内容一、原理细胞融合(Cellfusion)，即在自然条件下或用人工方法(生物的、物理的、化学的)使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。人工诱导的细胞融合，在六十年头作为一门新兴技术而发展起来。由于它不仅能产生同种细胞融

19、合，也能产生种间细胞的融合，因此细胞融合技术目前被广泛应用于细胞生物学和医学探讨的各个领域。细胞融合的诱导物种类许多常用的主要有灭活的仙台病毒(Sendaivirus)，聚乙二醇(Polyethyleneglycol，PEG)和电脉冲。目前应用最广泛的是聚乙二醇，因为它易得、简便，且融合效果稳定。PEG的促融机制尚不完全清晰，它可能引起细胞膜中磷脂的酰键及极性基团发生结构重排。二、方法1.取簇新鸡血以0.85生理盐水制成10的悬液。2.称取0.5克PEG(MW=4,000)放入试管内，在酒精灯上溶化之，快速加入0.5ml预热的37Hanks液混匀制成50的PEG溶液。放入37水浴中备用。3.取

20、上述10的鸡红细胞悬液1ml放入离心管中，沿离心管壁滴加50PEG溶液，边加边晃动试管使之混匀，37水浴20min。4.取出离心管，缓慢滴加9mlHanks液以终止PEG的作用，800g离心3min，弃上清。5.用贴壁的液体重悬细胞，取一滴制成滴片，加盖片镜检。结果：在高倍镜下可以看到有两个或两个以上的鸡红细胞膜融合在一起，形成一个异核体细胞。要留意辨别融合细胞与重叠的鸡红细胞。三、融合率的计算在高倍镜下随机计数200个细胞(包括融合的与未融合的细胞)，以融合细胞(含两个或两个以上的细胞核的细胞)的细胞核数除以总细胞核数(包括融合与未融合的细胞核)即得出融合率。公式如下：友情提示：本文中关于细胞生物学试验报告给出的范例仅供您参考拓展思维运用，细胞生物学试验报告：该篇文章建议您自主创作。本文来源：网络收集与整理，如有侵权，请联系作者删除，谢谢！第12页 共12页第 12 页 共 12 页第 12 页 共 12 页第 12 页 共 12 页第 12 页 共 12 页第 12 页 共 12 页第 12 页 共 12 页第 12 页 共 12 页第 12 页 共 12 页第 12 页 共 12 页第 12 页 共 12 页