临床免疫学检验技术2022考试复习重点总结.docx

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1、临床免疫学检验技术2022考试复习重点总结临床免疫学检验技术 2022抗原 原 Ag：是指全部能启动、激发和诱导免疫应答的物质，其可被 T、B 类别细胞表面特异性抗原受体(TCR 或 BCR)识别及结合，激活 T/B 细胞产生应答产物(特异性淋巴细胞或抗体)，并与之发生特异性反应。免疫 原性 ：是指抗原被 T、B 细胞表面特异性抗原受体(TCR 或 BCR)识别及结合，诱导机体产生适应性免疫应答(活化的 T/B 细胞或抗体)的实力; 抗体 Ab：是免疫系统在抗原刺激下，由 B 淋巴细胞或记忆 B 细胞增殖分化成的浆细胞产生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。抗原进入机体后诱导 B 细胞

2、活化并产生特异性抗体。抗原初次进入机体所引发的免疫应答称为初次应答。初次应答中所形成的记忆细胞再次接触相应抗原刺激后产生快速、高效、长久的应答称为再次应答。初次应答和再次应答中，抗体的产生具有肯定的规律: 再次应答的潜藏期短，大约为初次应答潜藏期的 1/2再次应答抗体浓度增加快，抗体水平较初次应答高;再次应答抗体维持时间长:再次应答所需抗原剂量小;再次应答主要产生高亲和力的 IgG，而初次应答中主要产生低亲和力的 IgM。免疫应答：是指机体免疫系统接受抗原刺激发生一系列反应，并以排出或分解该抗原为目的的过程。免疫应答的过程包括：抗原的识别处理、信息传递，免疫细胞的激活、增殖、分化以及产生一系列

3、的免疫效应分子，以及免疫效应分子的协同作用执行效应功能，从而达到维持机体内环境的目的。免疫应答是一个困难的连续过程，分 为识别阶段、活化阶段和效应阶段) 。免疫佐剂：是指预先或与抗原同时注入体内，可增加机体对抗原的免疫应答或变更免疫应答类型的非特异性免疫增加性物质。单克隆抗体(McAb)：通常是指由单一克隆杂交瘤细胞产生的只识别某一特定抗原表位的同源抗体。McAb 的特点是理化性状高度均一、纯度高、特异性强、少或无血清交叉反应 的特点，易于试验标准化和大量制备。从理论上讲，一个 B 淋巴细胞克隆分泌的抗体就是单克隆抗体，然而 B 细胞不能在体外无限制繁殖，因此不能长期稳定地制备或生产单克隆抗体

4、。杂交瘤技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体实力的致敏 B 细胞与具有无限繁殖实力的骨髓瘤细胞融合为 B细胞杂交瘤。这种杂交瘤细胞具有两种亲代细胞的特性，既保留了骨髓瘤细胞在体外培育无限增殖的特点，又继承了致敏 B 细胞可合成和分泌特异性抗体的实力。因此，用这种 B 细胞杂交瘤，可制备抗一种抗原表位(确定簇)的特异性单克隆抗体。单克隆抗体制备过程是将致敏 B 细胞和和骨髓瘤细胞融合成杂交瘤，选择能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，克隆化培育，批量生产单克隆抗体等 1.亲本细胞的选择和融合2.选择培育基的应用 3.抗原特异性杂交瘤细胞的筛选 双特异抗体(BsAb)：是指同时能与两种不同特

5、异性的抗原发生结合的抗体。Coombs 试验：抗球蛋白参加的红相胞免疫凝集试验是在间接免疫凝集试验的基础上进行改进的一种试验方法，由 Coombs 于 1945 年建立，故又称为 Coombs 试验 不完全抗体，多数是 7s 的 IgG 类抗体，能与相应抗原坚固地结合，但因其分子量较小，不能起到桥联作用，在一般条件 下不能出现可见反应。接 干脆 Coombs 试验:用于检测结合于红细胞表面的不完全抗体。取患者红细胞制成悬液，干脆加入抗人球蛋白抗体试剂，若红细胞表面结合有不完全抗体，即可出现凝集现象。此试验可用玻片法作定性测定，也可用试管法作半定量检测。临床常用于新生儿溶血症、自身免疫性溶血症、

6、特发性自身免疫性贫血以及医源性溶血性疾病患者红细胞上存在的不完全抗体的检测。接 间接 Coombs 试验:用于检测游离在血清中的不完全抗体。将受检血清与正常人 O 型红细胞混合，如受检血清中有不完全抗体，即可吸附于红细胞上，形成致敏红细胞，再加入抗人球蛋白抗体，与致敏红细胞表面的不完全抗体结合，使红细胞凝集。此试验多用于检测母体 Rh(D)抗体，以便及早发觉和避开新生儿溶血症的发生，也可用该方法对红细胞不相容输血后所产生的血型抗体进行测定。免疫沉淀试验：是指可溶性抗原与相应抗体发生特异性结合，在适当条件下出现的沉淀现象。免疫沉淀试验的基本原理是将可溶性抗原与相应抗体置于温度、酸碱度相宜的定电解

7、质溶液中，两者按适当比例形成沉淀.产生浊度，或在琼脂等凝胶中形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环，并依据所形成的沉淀物计算待测抗原或抗体的含量。免疫浊度测定:原理为可溶性抗原与相应抗体特异性结合，两者在比例合适和增浊剂作用下，可快速形成较大的免疫复合物，使反应液出现浊度当反应液中保持抗体迁筑自浓度固定时形成的免疫复合物随抗原量增加而增加，反应液的浊度也随之增加，即待测抗原量与反应液的油度是正相关:与标准曲线比较，即可计算出待测抗原的含量。免疫浊度测定方法:1 透射免疫比浊试验 2 散射免疫比浊试验(终点散射比浊试验速率散射比浊试验)3 胶乳增加免疫浊度测定放射 免疫分析(RIA) ：是用放射性核素标记

8、小分子抗原为特征，让待检抗原和标记抗原竞争性结合限量特异性抗体，通过测定与抗体结合的标记抗原的放射性强度反映待检抗原的含量。放射免疫分析原理:当标本中无待检抗原时，抗体全部与标记抗原结合，并存在游离标记抗原:当标本中含有待检抗原时，待检抗原与抗体结合，致使标记抗原与抗体结合受到抑制，抑制程度与待测抗原含量成正比:换言之，待测抗原含量与最终测量的结合标记物(AgAb)的放射性强度呈反比函数关系。免疫放射分析（IRMA) ：于 1968 年由 Miles 和 Hales 首创，此分析方法的特征是用放射性核素标记抗体为特征，待测抗原和过量标记抗体发生非竞争性免疫结合反应，采纳固相免疫吸附方式分别结合

9、标记物（B)和游离标记（F)。免疫放射分析虽然也是用放射性核素为标记物，但为了与放射免疫分析相区分，独创者将其称之为免疫放射分析 （表格内容背诵， 大题小题选择都可能）酶联免疫吸附试验(ELISA)：是以酶作为标记指示物，以抗原抗体免疫反应为基础的固相吸附测定方法。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。ELISA 的基本原理 将待测标本(含待测抗原或抗体)和酶标记的抗体或抗原按一点程序加入反应体系中，与结合在固相载体上的抗原或抗体反应形成固相化的抗原抗体酶复合物，用洗涤的方法将固相抗原抗体酶复合物与其他成分分别，结合在固相载体上

10、的酶量与标本中特测物质的量呈定比例: 加入酶反应底物后，底物被固相载体上的酶催化生成有色产物，产物的量与标本中待测物质的量干脆相关，故可依据呈色的深浅进行定性和定量分析。ELISA 方法建立的基本步骤:主要包括待测物选择、免疫原的设计与合成、抗体的制备、ELISA方法类型的建立及对所建立的方法进行评价等步骤。cut-off 值也称为临界值，简写为 CO.常通过 S/co 的比值推断检测阴性 和阳性反应结果，如在 ELISA 方法类型中，夹心法、间接法和捕狂法结果判定 S/CO≥1 为阳性反应，SlCO≤1 为阴性:而在竞争法中，结果判定 S/CO<1 为阳性反应。（p101）

11、在 ELISA 测定中确定合适的 cut off 值，对削减假阴性和假阳性具有重要意义。ELISA 既可用于测定抗原，又可用于测定抗体。依据测定抗原和抗体的不同可采纳 夹心法、间接法 ， 竞争法和捕获法四种基本类型 。免疫印迹试验：是一种将高辨别率凝胶电泳和免疫反应相结合的检验技术，因与 Southern早先建立的检测核酸的印迹方法 Southernblot 相类似，又称为 Western blot。蛋白免疫印迹原理是将混合抗原样品在凝胶上进行单向或双向电泳分别，然后取固定化基质膜与凝胶相贴，在印迹膜的自然吸附力、电场力或其他外力作用下，使凝胶中的抗原组分转移到固相载体上，如 NC 膜、尼龙膜

12、等。固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分别的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，/与对应的抗体进行抗原和抗体反应再与酶、荧光素、发光剂或放射性核素等标记的其次抗体进行反应，经过底物显色、荧光或发光检测或放射自显影对特异性蛋白进行检测和分析细胞因 子(cytokine) ：是由免疫细胞及组织细胞表达并分泌，在细胞间发挥相互调控作用的一类小分子蛋白质或多肽 黏附分子：是由细胞产生、介导细胞间或细胞与细胞外基质间相互结合的分子。细胞因子的种类细胞因子种类繁多， 已发觉有 200 余种，按结构和功能分为以下六虽动能大类:白细胞介素(nereukin， IL)、干

13、扰素 itneferon IFN)、集落刺激因子 Colom-stimulatingfactor， CSF)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor， TNF)、生长因子(growth factor， GF)和趋化因子(chemokine)。细胞因子的共同特性与生物学功能：细胞因子多为低分子量、可溶性的多肽或糖蛋白，大部分为单体，少数以二聚体、三聚体或四聚体形式存在，半衰期短。细胞因子通常以自分泌、旁分泌或内分泌方式作用于自身细胞、邻近细胞或远处细胞，通过与靶细胞表面相应的受体结合发挥功能，具有高效、多效性、重叠性、网络性、协同性和拮抗性等作用特点。作为体内免疫调整网络的重要

14、组成部分，细胞因子参加调控免疫细胞的发育、分化和功能:参加调控免疫应答，发挥机体抗感染、抗肿瘤及诱导细胞凋亡等功能。（p200）细胞因子受体的共同特性 :细胞因子受体为跨膜蛋白，由胞膜外区、跨膜区和胞质区三部分构成。依据细胞因子受体的结构特点分为 1 型细胞因子受体家族、型细胞因子受体家族、肿瘤坏死因子受体超家族免疫球蛋白受体超家族和趋化因子受体家连，受体的组织分布及密度确定了其对细胞因子反应的特异性。细胞因子必需与其相应受体结合后才能启动细胞内的信号转导通路，发挥相应的生物学效应。除膜型受体外，大多数细胞因子还存在可溶型受体，可与相应的膜型受体竞争性结合抑制细胞因子的功能。黏附分子的特性 (

15、p201)细胞表面的黏附分子均为跨膜糖蛋白，由胞膜外区、跨膜区和胞质区三部分组成，依据其结构特点分为免疫球蛋白超家族 imnouliniupefamil IgSF)、整合素家族(integrin family)、选择素家族(electin famil)和钙黏蛋白家族(cadhein family)等。细胞表面的黏附分子可脱落下来进入血液或体液，成为可溶型黏附分子。可溶型黏附分子缺少跨膜区和胞质区，但具有黏附分子的结合活性，在调整细胞黏附途径中发挥重要作用。在某些疾病状态时，体内可溶型黏附分子水平可显著增加，其水平与疾病的严峻程度或预后亲密相关，可作为监测疾病病程或预后的指标。黏附分子的主要生物

16、学功能:黏附分子参加机体多种重要的生理和病理过程，如参加免疫细胞的分化和发育、参加免疫应答和炎症反应、参加伤口愈合与血栓形成、参加淋巴细胞的归巢、参加调整细胞凋亡等功能。细胞因子和黏附分子常用的测定方法有:酶联免疫吸附试验、化学发光酶免疫试验、流式细胞术和酶联免疫斑点试验等。细胞因子和黏附分子免疫学测定方法学评价: (一) 优点 1.免疫学测定法影响因素较少，特异性高，特殊是单克隆抗体的应用。2.操作简便、快速，易于推广。目前大部分细胞因子均有商品化试剂盒，极大地便利了临床试验室开展检测。3.重复性好，试验结果稳定。(二)缺点 1.免疫学测定法检测的是细胞因子的蛋白含量不能区分生物学活性与非生

17、物学活性的物质，与生物学活性不肯定呈正相关， 有时与临床症状不一样。2.由于不同厂家试剂盒所用的抗体来源不同(即识别同细胞因子的不同表位)及与抗原结合的亲和力不同，导致对同标本测定结果可能不同，即试验室之间结果可比性差，难于进行质量限制及标准化。3.本法的敏感性相对较低，不如生物学测定法。4.标本中细胞因子的可溶型受体，会影响特异性抗体对细胞因子的结合;存在于标本中的某些细胞因子结合蛋白血清中可结合细胞因子的载体蛋白，都会对测定产生干扰。血清总补体活性测定（p218 ）测定原理: CP-CH50 是检测血清中补体经典激活途径的溶血活性，与补体 C1C9 各组分的量及活性均有关:其原理是利用绵羊

18、红细胞(sReep red blood cell， SRBC)与相应抗体(溶血素)结合成复合物后，可激活血清中的补体，导致 SRBC 表面形成跨膜小孔，使胞外水分渗入，引起 SRBC 肿胀而发生溶解(即溶血)。费 SRBC 和溶血素量定时，在规定反应的时间内，溶血程度与补体量及活性呈正相关但并非直线关系。以溶血百分率为纵坐标、补体(常用豚鼠血清)含量为横坐标作图可得特别的 s 形曲线(图 18-2)。从 S 形曲线图可见，在稍微溶血和接近完全溶血时，对补体含量的改变不敏感;在 30% 70%之间几乎呈直线，补体含量稍有变动就会造成溶血程度的明显变更。因此，试验常以 50%溶血作为判定终点，它比

19、 100%溶血更敏感，故该试验方法称为 50%补体溶血试验(50% complement hemolysis， CH50)。引起 50%溶血所须要的最小补体量为一个 CH50 单位(U)，通过计算可测定出待测血清中总的补体溶血活性，以 CH50 (kU/L)表示。补体依靠的细胞毒试验 原理是带有特异性抗原的靶细胞(如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞等)与相应抗体结合信，在补体的参加下，可引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡，而不带特异抗原的细胞仍存活。伊红-Y 或台盼蓝等染料可通过损伤的细胞膜进入细胞，使损伤死亡或濒死细胞着色，而活细胞不着色。本试验可用于检测细胞膜抗原(如 HL

20、A 分型、T 细胞表面抗原等)，也可用于鉴定抗体的特异性。补体参加的其他试验（p222）1.免疫粘连血凝试验免疫粘连血凝试验是检测多种病毒及其抗体的试验，它是利用抗原和特异性抗体结合，在补体存在的条件下，可使人的O型红细胞发生凝集。2.溶血空斑试验溶血空班试验是检测抗体形成细胞(antibody forming cell， AFC)的试验，它是用经 SRBC 免疫的小鼠脾细胞(含 SRBC 激活的 B 细胞，即 AFC)与 SRBC 在凝胶中混匀温育，AFC 分泌抗 SRBC 的抗体与 AFC 四周的 SRBC 结合，而后加入补体再温育后，因补体被活化即可导致 AFC 四周的 SRBC 溶解，

21、形成一个肉眼可见的溶血空斑。3.胶固素结合试验 胶固素结合试验是检测循环免疫复合物的试验，它是利用牛胶固素(用放射性核素标记)在含钙的条件下，可与待检血清中免疫复合物上的 iC3b 结合，再用聚乙二醇沉淀法分别已与 iC3b 结合的牛胶固素，依据放射性强度推算免疫复合物的含量。4. C1q 抗体的测定试验该试验是将 Clq 干脆作为抗原用于检测患者血清中的 Clq 抗体，Clq抗体为种自身抗体，系统性红斑狼疮(尤其是活动期)、狼疮性肾炎、低补体血症性荨麻疹样血管炎、类风湿性关节炎、混合性结缔组织病和毒性充满性甲状腺肿(Graves 病)等自身免疫性疾病患者的血清中可检测到 C1q 抗体，其含量

22、与疾病病情星正相关。常用 ELISA 检测。亲合素（avidin)和链霉亲合素（streptavidin，SA）是生物素的自然特异性结合物。两者均为大分子蛋白，几乎全部用于标记的物质均可以与亲合素或链霉亲合素结合，最常用于标记酶、荧光素及胶体金等示踪物。（p227） 亲合素又称抗生物素蛋白或卵白素，是从卵白蛋白中提取的一种富含色氨酸带糖基的 碱性蛋白。亲合素的分子量为 68kD，pl 为 10.5，在 pH913 的缓冲液中性质稳定，耐热并 耐多种蛋白水解酶作用。 链霉亲合素是与亲合素有类似生物学特性的一种蛋白质，是链霉菌属细菌 Streptomyces avidinii 在培育过程中分泌的一

23、种偏弱酸性的蛋白质产物，现可通过基因工程技术生产。其分子量为 65kD，pI 为 6.0，结构与亲合素相像，由 4 条相同肽链构成，能与 4 个分子的生物素特异性结合，结合常数(Ka)为 105mol/L。亲合素和链霉亲合素 结合的特点:1 特异 性 2 敏感性 3 稳定性 4 适用性室内质控失控后的处理 失控后的最佳处理是确认失控的缘由，发觉问题并提出妥当解决的方法，消退失控的缘由，并防止以后再次发生。以下为导致失控的常见因素：1.测定操作中的随机误差，如标本和试剂吸取的重复性差、试剂未混匀、洗涤不充分和温育时间及环境条件的一样性不佳等。2.仪器的问题，如光路不洁、比色波长不对、管道堵塞等。

24、3.试剂的问题，如校准品不对或变质、显色底物变质、试剂受到污染和试剂因贮存不当失效。4.室内质控品失效。找寻失控缘由和处理的步骤包括：重新测定同一室内质控品、新开一支室内质控品重新检测、进行仪器维护或更换试剂、重测失控项目、重新校准等。如仍无法订正，则应暂缓失控项目标本的检测，并要求包括检测系统厂商技术支持人员等在内的全部可能的技术支援， 室内质控品的基本条件1.质控品的基质应尽可能与临床常规试验中的待测标本一样，以避开可能的基质效应。2.室内质控品要求其所含待测物的浓度接近试验或临床确定性水平。3.室内质控标本在适当的贮存条件下能长期稳定，这是室内质控标本必需具备的一个条件。4.志向的室内质

25、控品，其靶值或预期结果应当是已知的。5.无已知的传染危急性 6.单批可大量获得。7.价廉。超敏反应 (hypersensitivity) ：是机体接受某些抗原刺激时，出现生理功能紊乱或组织细胞损伤等异样的适应性免疫应答。依据超敏反应的发朝气制和临床特征，将其分为 I、四型。I型由抗体介导，可经血清被动转移。型由 T 细胞介导，可经细胞被动转移。免疫增殖性疾病主要是由淋巴细胞异样增殖所致的一组疾病，主要表现为免疫球蛋白异样（质和量）和免疫功能异样，包括良性增生和恶性增生两类。对免疫球蛋白异样增多的检测，其目的是早期发觉疾病、监控病情和推断预后，常见有 M 蛋白和尿轻链蛋白的检测。常用的免疫学方法

26、有：血清区带电泳；免疫电泳；免疫固定电泳；血清免疫球蛋白定量等。 免疫缺陷病(IDD) ：是指由于遗传或其他因素造成的免疫系统先天发育障碍或后天损伤所引起的各种临床综合征。根据病因可分为原发性免疫缺陷病 PIDD 和继发性免疫缺陷病 SIDD.免疫缺陷病临床共同特点 1、易感染 2 易伴发恶性肿瘤 3、易伴发自身免疫病联合免疫缺陷病(CID) ：是指 T 细胞和 B 细胞均才为快有分化发育障碍，导致细胞免疫和体液免疫联合缺陷所致的疾病。其发病机制涉及多种，共同特征是:患者全身淋巴组织发育不良，淋巴细胞削减;易发生严峻和持续性的细菌、病毒和真菌感染，且常为机会性感染:接种某些减毒活疫苗可引起严峻

27、的全身感染，甚至死亡。 机体抗肿瘤免疫效应机制 一、抗肿瘤的细胞免疫机制在抗肿瘤免疫效应中，细胞免疫比体液免疫作用更为重要。主要效应细胞包括 T 细胞、 NK 细胞、巨噬细胞和树突状细胞等。抗原致敏的 T 细胞只特异性杀伤带相应抗原的肿瘤笔记细胞，包括 CD8 + CTL 和 CD4 +Th 细胞，其中 CD8 +CTL 是主要效应细胞。NK 细胞在抗肿瘤免疫早期起重要作用，是机体抗肿瘤的第一道防线。巨噬细胞既可作为抗原提呈细胞(APC)启动免疫应答，也可作为效应细胞溶解肿瘤细胞。树突状细胞可高表达 MHC-I、MHC-II 等分子，参加肿瘤抗原的提呈。(二)抗肿瘤的体液免疫机制肿瘤患者血清中

28、存在能与肿瘤细胞反应的抗体，肿瘤抗原可刺激机体发生体液免疫应答，主要为:递呈肿瘤抗原，如 B 细胞以其 BCR 捕获肿瘤细胞释放(或分泌、脱落)的可溶性抗原，加工处理后与 MHC-II 类分子结合，诱导 CD4 +T 细胞对肿瘤的免疫应答:分泌抗体介导的肿瘤杀伤效应，包括补体依靠的细胞毒作用(CDC)、抗体依靠细胞介导的细胞毒作用(ADCC)、抗体调理作用等。其中 CDC 仅可杀伤单个肿瘤细胞，对实体瘤无效。其他如转铁蛋白抗体可封闭肿瘤细胞表面的转铁蛋白受体而抑制肿瘤细胞生长:某些抗体与肿瘤细胞膜结合后，使肿瘤细胞的黏附特性变更甚至消逝，限制肿瘤生长及转移。肿瘤标记物（ tumor marke

29、r)：是指在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞生物合成、释放或机体对肿瘤细胞反应而产生的一类物质，这些物质可存在于肿瘤细胞和组织中，也可进入血液和其他体液。可利用免疫和分子生物学等技术进行检测。肿瘤标记物可存在于细胞表面、细胞质、细胞核和细胞外（血液/体液)。习惯上将体液肿瘤标记物按其本身的性质分为以下七类（表 26-2)。1.胚胎抗原类 2.糖蛋白抗原类 3.激素类 4.酶和同工酶类 5.特别蛋白质类 6.癌基因产物类7.其他肿瘤标记物 肿瘤标记物的临床应用原则: :1 肿瘤的协助诊断。2 肿瘤的鉴别诊断和临床分期。3 肿瘤的疗效监测。4 肿瘤的复发和转移监测。5 个体化医疗靶标检测。6 肿瘤

30、标记物的联合检测。常见恶性肿瘤与肿瘤标记物 肺癌 CYFRA21-1、CEA、NSE、SCC 肝癌 AFP、DCP、GPC-3 。胃癌 CA-724、CA-199、胃蛋白酶原 PG前列腺癌 PSA 结直肠癌 CEA、CA242、粪便隐血试验及 DNA 标记物 乳腺癌 CA153、雌激素受体 ER 孕激素受体 PR，乳腺癌易感基因 BRCA1 和 BRCA2 卵巢癌 HE4，CA125 骨髓瘤β2M胰腺癌 CA199 等本文来源：网络收集与整理，如有侵权，请联系作者删除，谢谢！第20页 共20页第 20 页 共 20 页第 20 页 共 20 页第 20 页 共 20 页第 20 页 共 20 页第 20 页 共 20 页第 20 页 共 20 页第 20 页 共 20 页第 20 页 共 20 页第 20 页 共 20 页第 20 页 共 20 页