12植物组织培养技术课件(苏教版选修1)(1).pptx

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1、栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践第二节植物组织培养技术第二节植物组织培养技术栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践学习导航学习导航1.理解植物组织培养的原理。理解植物组织培养的原理。(重点重点)2明确植物组织培养的一般过程。明确植物组织培养的一般过程。(重难点重难点)栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践新知初探新知初探思维启动思维启动无菌无菌离体离体愈伤组织愈伤组织全能性全能性完整基因组完整基因组完整植株完整植株栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践已经分化已经分化愈伤组织愈伤组织愈伤组织愈伤组织栏

2、目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践1为什么科学家利用胡萝卜的韧皮部细胞就可为什么科学家利用胡萝卜的韧皮部细胞就可以培育出完整的胡萝卜植株？以培育出完整的胡萝卜植株？提示：提示：原因是植物的每个细胞都具有全能性。原因是植物的每个细胞都具有全能性。想一想想一想栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践二、植物组织培养技术的操作流程二、植物组织培养技术的操作流程(以天竺葵以天竺葵的组织培养为例的组织培养为例)1.准备：实验器材和药品。准备：实验器材和药品。2.配制：配制配制：配制MS基本培养基。分别向基本培养基。分别向MS基本基本培养基中添加所需的激素，配制

3、诱导愈伤组织培养基中添加所需的激素，配制诱导愈伤组织形成的培养基、分化芽的培养基、形成的培养基、分化芽的培养基、_的的培养基，搅拌均匀，并调节培养基，搅拌均匀，并调节pH。生根生根栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践3.灭菌灭菌4.取材与接种取材与接种(1)取天竺葵幼嫩的叶，流水冲净后，吸去表面取天竺葵幼嫩的叶，流水冲净后，吸去表面水分，浸没在质量分数为水分，浸没在质量分数为10%的的_或或质量分数为质量分数为2%的的NaClO溶液中溶液中515 min，用，用无菌水冲洗无菌水冲洗46次，消毒并切成约次，消毒并切成约0.5 cm2的小的小块。块。漂白粉漂白粉栏目栏目导引

4、导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践(2)接种于已经配制好的诱导接种于已经配制好的诱导_形成的形成的培养基上，做好标记放在适宜条件下培养。培养基上，做好标记放在适宜条件下培养。5.观察与记录观察与记录每天观察每天观察_的生长情况，并记录其变的生长情况，并记录其变化情况。化情况。6.转接幼苗：愈伤组织转接幼苗：愈伤组织分化芽的培养基分化芽的培养基幼幼芽芽_的培养基的培养基炼苗炼苗移栽。移栽。愈伤组织愈伤组织外殖体外殖体生根生根栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践2在植物组织培养过程中，为什么要进行一在植物组织培养过程中，为什么要进行一系列的消毒、灭菌，并且要求

5、无菌操作？系列的消毒、灭菌，并且要求无菌操作？提示：提示：避免杂菌在上面迅速生长消耗营养，且避免杂菌在上面迅速生长消耗营养，且有些杂菌会危害培养物的生长。有些杂菌会危害培养物的生长。想一想想一想栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践三、植物激素对植物组织培养的影响三、植物激素对植物组织培养的影响_是启动细胞分裂、脱是启动细胞分裂、脱分化、再分化的关键激素。分化、再分化的关键激素。1.生长素用量比细胞分裂素用量多时，有利于生长素用量比细胞分裂素用量多时，有利于_而对芽的形成有抑制作用。而对芽的形成有抑制作用。2.生长素用量比细胞分裂素用量少时，有利于生长素用量比细胞分裂素用

6、量少时，有利于_而抑制根的形成。而抑制根的形成。3.生长素用量与细胞分裂素用量相当时，则促生长素用量与细胞分裂素用量相当时，则促进进_的生长。的生长。生长素、细胞分裂素生长素、细胞分裂素根的分化根的分化芽的分化芽的分化愈伤组织愈伤组织栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践1(1)在植物组织培养过程中，一般要添加生在植物组织培养过程中，一般要添加生长素和细胞分裂素等激素。长素和细胞分裂素等激素。()(2)当生长素的用量比细胞分裂素用量的比值高当生长素的用量比细胞分裂素用量的比值高时有利于愈伤组织组织的形成。时有利于愈伤组织组织的形成。()(3)植物能够进行光合作用，故光照是

7、植物组织植物能够进行光合作用，故光照是植物组织培养过程中的必要条件。培养过程中的必要条件。()(4)植物激素的使用顺序对植物组织培养没有影植物激素的使用顺序对植物组织培养没有影响。响。()判一判判一判栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践四、植物组织培养的应用四、植物组织培养的应用1._ 优良植物株系。优良植物株系。2.培育农作物培育农作物_。3.保存和运输种质。保存和运输种质。4.培育培育_植株。植株。快速繁殖快速繁殖新品种新品种无病毒无病毒栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践2(1)利用植物组织培养技术能培养抗病毒植利用植物组织培养技术能培养抗

8、病毒植株。株。()(2)单倍体育种利用了植物组织培养技术。单倍体育种利用了植物组织培养技术。()(3)植物组织培养不改变原植物的基因型。植物组织培养不改变原植物的基因型。()判一判判一判栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践要点突破要点突破讲练互动讲练互动植物组织培养的技术植物组织培养的技术1.细胞的全能性细胞的全能性(1)概念：生物体的细胞具有使后代细胞形成完整概念：生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能。个体的潜能。栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践(2)基础：生物体的每一个细胞都含有本物种的全套遗基础：生物体的每一个细胞都含有本物种的

9、全套遗传物质，都有发育成完整个体所必需的全套基因。传物质，都有发育成完整个体所必需的全套基因。(3)生物体内细胞没有表现出全能性，是由于基因在特生物体内细胞没有表现出全能性，是由于基因在特定的时间和空间条件下选择性表达，形成不同的组织定的时间和空间条件下选择性表达，形成不同的组织和器官的结果。和器官的结果。(4)植物细胞全能性大小的比较：植物细胞全能性大小的比较： 受精卵生殖细胞体细胞。受精卵生殖细胞体细胞。 体细胞中：幼嫩组织细胞体细胞中：幼嫩组织细胞(芽尖芽尖)成熟组织细胞。成熟组织细胞。栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践2.植物细胞全能性实现的条件植物细胞全能性

10、实现的条件(1)离体状态；离体状态；(2)提供种类齐全、比例适合的营养物质；提供种类齐全、比例适合的营养物质；(3)提供激素提供激素(细胞分裂素和生长素细胞分裂素和生长素)；(4)无菌操作无菌操作(防止杂菌污染防止杂菌污染)；(5)提供其他适宜条件提供其他适宜条件(如温度、酸碱度、光照如温度、酸碱度、光照等等)。栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践3.植物组织培养的基本过程植物组织培养的基本过程栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践特别提醒特别提醒植物组织培养中脱分化和再分化的比较：植物组织培养中脱分化和再分化的比较：比较比较内容内容脱分化脱分化再

11、分化再分化过程过程细胞细胞愈伤组织愈伤组织愈伤组织愈伤组织幼苗幼苗特点特点排列疏松、高度液排列疏松、高度液泡化的薄壁细胞泡化的薄壁细胞有根、芽有根、芽需要需要条件条件无菌、离体；适宜无菌、离体；适宜的营养；生长素和的营养；生长素和细胞分裂素细胞分裂素无菌、离体；适宜无菌、离体；适宜的营养；生长素和的营养；生长素和细胞分裂素、光照细胞分裂素、光照栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践植物细胞表现出全能性的必要条件是植物细胞表现出全能性的必要条件是()A导入其他植物细胞的基因导入其他植物细胞的基因B将成熟的细胞核移植到去核的卵细胞中将成熟的细胞核移植到去核的卵细胞中C用适当浓

12、度的秋水仙素处理用适当浓度的秋水仙素处理D脱离母体后，给予适宜的营养和适宜的温脱离母体后，给予适宜的营养和适宜的温度等外界条件度等外界条件栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践【思路点拨思路点拨】本题最关键的是掌握植物细本题最关键的是掌握植物细胞表现出全能性的前提条件是离体。胞表现出全能性的前提条件是离体。【解析解析】植物细胞只有脱离了植物体，在植物细胞只有脱离了植物体，在一定的外部因素作用下，经过细胞分裂形成一定的外部因素作用下，经过细胞分裂形成愈伤组织，才能表现出全能性，由愈伤组织愈伤组织，才能表现出全能性，由愈伤组织发育、分化出新的植物体。发育、分化出新的植物体。【

13、答案答案】D栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践1.下列实例中能体现细胞全能性的是下列实例中能体现细胞全能性的是()用悬浮培养的胡萝卜单个细胞培养成了可育用悬浮培养的胡萝卜单个细胞培养成了可育的植株的植株植物用种子繁殖后代植物用种子繁殖后代用烟草的单个组织培养出了可育的完整植株用烟草的单个组织培养出了可育的完整植株A BC D变式训练变式训练栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践解析：选解析：选B。细胞全能性是指已经分化的细。细胞全能性是指已经分化的细胞仍然具有发育成完整植株的潜能。其中胞仍然具有发育成完整植株的潜能。其中和和都是属于由分化的细胞经

14、过培养形成可都是属于由分化的细胞经过培养形成可育的植株，体现了细胞的全能性。植物的种育的植株，体现了细胞的全能性。植物的种子是具有胚芽、胚轴、胚根等完整个体雏形子是具有胚芽、胚轴、胚根等完整个体雏形的生殖器官，由其发育成后代不能体现细胞的生殖器官，由其发育成后代不能体现细胞的全能性。的全能性。栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践植物激素植物激素(生长素和细胞分生长素和细胞分裂素裂素)对实验结果的影响对实验结果的影响影响因素影响因素实验结果实验结果植物激素植物激素的浓度的浓度根据生长素作用的两重性：低根据生长素作用的两重性：低浓度促进生长，高浓度抑制生浓度促进生长，高浓度

15、抑制生长，甚至杀死植物长，甚至杀死植物栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践影响因素影响因素实验结果实验结果植物植物激素激素用量用量生长素细胞分裂生长素细胞分裂素素有利于根的分化、抑有利于根的分化、抑制芽的形成制芽的形成生长素细胞分裂生长素细胞分裂素素有利于芽的分化、抑有利于芽的分化、抑制根的形成制根的形成生长素生长素细胞分裂细胞分裂素素促进愈伤组织的形成促进愈伤组织的形成栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践影响因素影响因素实验结果实验结果使用顺使用顺序序先生长素，后细胞先生长素，后细胞分裂素分裂素有利于细胞分裂，有利于细胞分裂，但细胞不分化但细胞

16、不分化先细胞分裂素，后先细胞分裂素，后生长素生长素细胞既分裂也分化细胞既分裂也分化同时使用同时使用分化频率提高分化频率提高栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践 (2012南京高二质检南京高二质检)回答下列有关植物组回答下列有关植物组织培养的问题。织培养的问题。(1)用于植物组织培养的植物材料称为用于植物组织培养的植物材料称为_。(2)组织培养中的细胞，从分化状态转变为未分化组织培养中的细胞，从分化状态转变为未分化状态的过程称为状态的过程称为_。(3)在再分化阶段所用的培养基中，含有植物激素在再分化阶段所用的培养基中，含有植物激素X和植物激素和植物激素Y，逐渐改变培养基中

17、这两种植物激素，逐渐改变培养基中这两种植物激素的浓度比，未分化细胞群的变化情况如图所示，据的浓度比，未分化细胞群的变化情况如图所示，据图指出两种激素的不同浓度比与形成芽、根、愈伤图指出两种激素的不同浓度比与形成芽、根、愈伤组织的关系：组织的关系：栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践当植物激素当植物激素X与植物激素与植物激素Y的浓度比等于的浓度比等于1时，时，_；_；_。(4)生产上用试管苗保留植物的优良性状，其原因生产上用试管苗保留植物的优良性状，其原因是是_。栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操

18、作技术实践【思路点拨思路点拨】本题主要考查植物组织培养本题主要考查植物组织培养的相关知识，解答本题需从以下角度分析：的相关知识，解答本题需从以下角度分析：了解植物组织培养的一般过程。了解植物组织培养的一般过程。理解植物激素在植物组织培养中的作用。理解植物激素在植物组织培养中的作用。明确植物组织培养的作用。明确植物组织培养的作用。栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践【解析解析】(1)用于植物组织培养的材料叫外殖体。用于植物组织培养的材料叫外殖体。(2)植物组织培养的核心过程是脱分化与再分化，脱植物组织培养的核心过程是脱分化与再分化，脱分化指由分化状态变为未分化状态，再分化

19、指由未分分化指由分化状态变为未分化状态，再分化指由未分化状态变为分化状态。化状态变为分化状态。(3)仔细分析所给示意图，可知植物激素仔细分析所给示意图，可知植物激素X与植物激素与植物激素Y浓度比为浓度比为1时，利于愈伤组织的形成，大于时，利于愈伤组织的形成，大于1时利于时利于细胞群分化出芽，小于细胞群分化出芽，小于1时利于细胞群分化出根。时利于细胞群分化出根。(4)植物组织培养是一种无性繁殖技术，利于保持亲植物组织培养是一种无性繁殖技术，利于保持亲本的优良性状。本的优良性状。栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践【答案答案】(1)外殖体外殖体 (2)脱分化脱分化(3)未分

20、化细胞群经分裂形成愈伤组织未分化细胞群经分裂形成愈伤组织当植物激素当植物激素X与植物激素与植物激素Y的浓度比大于的浓度比大于1时，时，未分化细胞群分化形成芽未分化细胞群分化形成芽当植物激素当植物激素X与植物激素与植物激素Y的浓度比小于的浓度比小于1时，时，未分化细胞群分化形成根未分化细胞群分化形成根(4)组织培养形成试管苗的过程属于无性繁殖，后组织培养形成试管苗的过程属于无性繁殖，后代不发生性状分离代不发生性状分离栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践变式训练变式训练2.下列关于影响植物组织培养的因素，说法正下列关于影响植物组织培养的因素，说法正确的是确的是()A不同植物

21、组织培养的难易程度不同，同一不同植物组织培养的难易程度不同，同一种植物材料培养的难易程度相同种植物材料培养的难易程度相同B在植物组织培养中，培养基中必须添加植在植物组织培养中，培养基中必须添加植物激素物激素C植物激素中生长素和细胞分裂素的作用是植物激素中生长素和细胞分裂素的作用是互相独立的互相独立的栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践DpH、温度、光照条件等对植物组织培养也、温度、光照条件等对植物组织培养也特别重要特别重要解析：选解析：选D。同一种植物材料随年龄、保存时。同一种植物材料随年龄、保存时间的不同，培养的难易程度不同；有些植物组间的不同，培养的难易程度不同；有

22、些植物组织培养不需要添加植物激素；植物激素中生长织培养不需要添加植物激素；植物激素中生长素和细胞分裂素的作用是互相影响的。素和细胞分裂素的作用是互相影响的。栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践植物组织培养技术、微生物培植物组织培养技术、微生物培养技术和无土栽培技术的比较养技术和无土栽培技术的比较植物组织培养植物组织培养微生物培养微生物培养无土栽培无土栽培含义含义在无菌条件下，在无菌条件下，将离体的植物体将离体的植物体器官或组织接种器官或组织接种在适当的培养基在适当的培养基上进行培养，最上进行培养，最终发育成完整植终发育成完整植物体物体在无菌条件在无菌条件下，在适宜下，在

23、适宜的营养和环的营养和环境条件下对境条件下对微生物的培微生物的培养养将植物生长发将植物生长发育过程中所需育过程中所需各种矿质元素各种矿质元素按一定比例配按一定比例配成营养液，并成营养液，并利用这种营养利用这种营养液栽培植物液栽培植物栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践植物组织培养植物组织培养微生物培养微生物培养无土栽培无土栽培培养培养基成基成分分水、矿质元素、水、矿质元素、蔗糖、维生素、蔗糖、维生素、有机添加物和植有机添加物和植物激素等物激素等水、无机盐、水、无机盐、碳源、氮源碳源、氮源等等水、必需矿水、必需矿质元素质元素特殊特殊操作操作要求要求严格控制无菌操严格控制无

24、菌操作，在培养过程作，在培养过程中要更换培养基，中要更换培养基，调节细胞分裂素调节细胞分裂素和生长素的比例和生长素的比例严格控制无严格控制无菌操作，整菌操作，整个培养过程个培养过程无需更换培无需更换培养基养基适宜的环境适宜的环境条件，基质条件，基质垫底并固定垫底并固定幼苗，不需幼苗，不需要保证无菌要保证无菌条件条件栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践(2012渭河高二检测渭河高二检测)右图是植物组织培右图是植物组织培养的简略表示图。请据图回答：养的简略表示图。请据图回答：(1)把组织培养的过程按正确顺序排列把组织培养的过程按正确顺序排列_(用字母表示用字母表示)。栏目栏

25、目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践(2)外殖体发育成一个完整个体需经过外殖体发育成一个完整个体需经过_和和_两个过程。两个过程。(3)若若B中为胡萝卜根尖细胞，则培养成的新植中为胡萝卜根尖细胞，则培养成的新植株的叶片的颜色是株的叶片的颜色是_，这说明根尖细胞，这说明根尖细胞_。(4)从理论上讲，植物细胞有形成再生植株的从理论上讲，植物细胞有形成再生植株的可能性，这是可能性，这是_的表现。的表现。栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践【解析解析】本题考查植物组织培养技术。本题考查植物组织培养技术。(1)取离取离体的植物组织或器官置于适宜的条件下，诱导形成

26、体的植物组织或器官置于适宜的条件下，诱导形成愈伤组织、丛芽和完整植株，正确的组织培养顺序愈伤组织、丛芽和完整植株，正确的组织培养顺序是是BDCA。(2)外殖体发育成一个完整的个体需经过外殖体发育成一个完整的个体需经过脱分化和再分化两个重要的过程。脱分化和再分化两个重要的过程。(3)由胡萝卜的由胡萝卜的根尖细胞培养成的完整植株的叶片含有绿色，因为根尖细胞培养成的完整植株的叶片含有绿色，因为在植物的根尖细胞中携带着一套来自受精卵的完整在植物的根尖细胞中携带着一套来自受精卵的完整基因组，含有控制叶片绿色性状的基因。基因组，含有控制叶片绿色性状的基因。(4)植物植物组织培养依据的是植物细胞的全能性。组

27、织培养依据的是植物细胞的全能性。栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践【答案答案】(1)BDCA(2)脱分化再分化脱分化再分化(3)绿色含有控制叶片绿色性状的基因绿色含有控制叶片绿色性状的基因(4)细胞全能性细胞全能性栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践变式训练变式训练3.用于植物组织培养的培养液和用于无土栽培用于植物组织培养的培养液和用于无土栽培的营养液相比，以下说法不正确的是的营养液相比，以下说法不正确的是()A都必须含植物必需的矿质元素都必须含植物必需的矿质元素B都必须含有少量的有机物都必须含有少量的有机物C不都需要含有植物激素不都需要含有植

28、物激素D浓度都必须小于细胞液的浓度浓度都必须小于细胞液的浓度栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践解析：选解析：选B。无土栽培的幼苗一开始就能进。无土栽培的幼苗一开始就能进行光合作用，并且自身能够合成植物激素，行光合作用，并且自身能够合成植物激素，所以营养液中不需要加入有机物和激素；而所以营养液中不需要加入有机物和激素；而植物组织培养过程中，在分化形成芽之前，植物组织培养过程中，在分化形成芽之前，细胞不能进行光合作用，代谢需要的有机物细胞不能进行光合作用，代谢需要的有机物只能从培养基中获得，所以用于植物组织培只能从培养基中获得，所以用于植物组织培养的培养液必须含有少量的有

29、机物和适量植养的培养液必须含有少量的有机物和适量植物激素。物激素。栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践实验探究实验探究专项突破专项突破【操作与实践操作与实践】1.制备制备MS固体培养基固体培养基(过程见教材过程见教材P2223)2.外殖体消毒外殖体消毒天竺葵的组织培养天竺葵的组织培养栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践植物的茎、叶部分多暴露于空气中，栽培时植物的茎、叶部分多暴露于空气中，栽培时受泥土、肥料及杂菌的污染，消毒前要经自受泥土、肥料及杂菌的污染，消毒前要经自来水较长时间清洗。取天竺葵的细嫩的茎洗来水较长时间清洗。取天竺葵的细嫩的茎洗净放

30、在质量分数为净放在质量分数为10%的漂白粉或质量分数的漂白粉或质量分数为为2%的的NaClO溶液中溶液中515 min，取出用无，取出用无菌水冲洗菌水冲洗46次，切块备用。次，切块备用。栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践3.接种接种接种时必须在近火焰处打开容器的瓶口，并接种时必须在近火焰处打开容器的瓶口，并使瓶倾斜，以免空气中的微生物落入瓶中，使瓶倾斜，以免空气中的微生物落入瓶中，整个接种工作都应始终在近火焰处进行，接整个接种工作都应始终在近火焰处进行，接种完成后，立刻盖好瓶口。种完成后，立刻盖好瓶口。4.培养培养(1)愈伤组织的培养愈伤组织的培养栏目栏目导引导引第一

31、章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践首次培养愈伤组织时，恒温箱的门应该关闭，不首次培养愈伤组织时，恒温箱的门应该关闭，不必见光，因为在无光条件下愈伤组织长得更快。必见光，因为在无光条件下愈伤组织长得更快。2周以后，由于培养基中的营养成分已接近耗尽，周以后，由于培养基中的营养成分已接近耗尽，必须更换培养基，进行继代培养。必须更换培养基，进行继代培养。(2)愈伤组织的继代培养愈伤组织的继代培养进行继代培养所用的培养基和培养愈伤组织所用进行继代培养所用的培养基和培养愈伤组织所用的培养基相同。在严格的无菌条件下的培养基相同。在严格的无菌条件下(接种箱内接种箱内)将将愈伤组织连同原来的外殖体，一起移

32、到新的培养愈伤组织连同原来的外殖体，一起移到新的培养基上。愈伤组织的继代培养，一代为基上。愈伤组织的继代培养，一代为20 d。栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践如果延长培养时间，培养基中的营养物质会减少，如果延长培养时间，培养基中的营养物质会减少，外殖体也会分泌一些有毒物质，造成自身中毒。外殖体也会分泌一些有毒物质，造成自身中毒。20 d以后，可以根据愈伤组织的大小，决定是继续进行以后，可以根据愈伤组织的大小，决定是继续进行继代培养，还是进行试管苗培养。如果愈伤组织长继代培养，还是进行试管苗培养。如果愈伤组织长到直径为到直径为11.5 cm时，就可以进行试管苗培养，否

33、时，就可以进行试管苗培养，否则还需要进行第二代继代培养。在愈伤组织进行继则还需要进行第二代继代培养。在愈伤组织进行继代培养期间，可以将恒温箱的门打开，让愈伤组织代培养期间，可以将恒温箱的门打开，让愈伤组织见光，愈伤组织见光后，颜色可以转为绿色。见光，愈伤组织见光后，颜色可以转为绿色。栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践(3)试管苗的培养试管苗的培养当愈伤组织长到一定大小后，可以更换培养基，当愈伤组织长到一定大小后，可以更换培养基，进行试管苗的培养，试管苗的培养分为生芽培养进行试管苗的培养，试管苗的培养分为生芽培养和生根培养。培养一株完整的试管苗，必须先进和生根培养。培养

34、一株完整的试管苗，必须先进行生芽培养，然后进行生根培养，如果顺序颠行生芽培养，然后进行生根培养，如果顺序颠倒，先诱导生根，就不好诱导生芽了。注意，试倒，先诱导生根，就不好诱导生芽了。注意，试管苗应该进行见光培养。管苗应该进行见光培养。栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践5.移栽移栽试管苗一般在高湿、弱光、恒温下异养生长，出瓶试管苗一般在高湿、弱光、恒温下异养生长，出瓶后一定要保温、保湿。试管苗光合作用能力低，在后一定要保温、保湿。试管苗光合作用能力低，在移栽前给予较强光照闭瓶炼苗，以促进小苗向自养移栽前给予较强光照闭瓶炼苗，以促进小苗向自养转化。珍珠岩为固体基质型，含水

35、量高、蓄水性强转化。珍珠岩为固体基质型，含水量高、蓄水性强、透性好，适合做栽培的基质。、透性好，适合做栽培的基质。6.栽培栽培将幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗生长情况，适将幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗生长情况，适时浇水、施肥，直到开花。时浇水、施肥，直到开花。栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践【问题与探究问题与探究】1.在植物组织培养的过程中，为什么要进行在植物组织培养的过程中，为什么要进行一系列的消毒、消毒，并且要求无菌操作？一系列的消毒、消毒，并且要求无菌操作？【提示提示】植物组织培养的主要目的是快速植物组织培养的主要目的是快速繁殖、培养无病毒植株，因此，必须保

36、证培繁殖、培养无病毒植株，因此，必须保证培养材料、培养基、培养用具完全无菌，并且养材料、培养基、培养用具完全无菌，并且无菌操作。无菌操作。栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践其原因是：其原因是：a.培养基上的细菌等微生物比植物培养基上的细菌等微生物比植物具有更强的新陈代谢能力，利用植物组织培具有更强的新陈代谢能力，利用植物组织培养的培养基迅速的大量繁殖，它们比植物细养的培养基迅速的大量繁殖，它们比植物细胞生长得更快。胞生长得更快。b.细菌等微生物产生毒素，使细菌等微生物产生毒素，使培养基的植物细胞很快中毒死亡。因此在植培养基的植物细胞很快中毒死亡。因此在植物组织培养过程

37、中要进行一系列消毒灭菌，物组织培养过程中要进行一系列消毒灭菌，并且无菌操作。并且无菌操作。栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践2.接种接种34 d观察外殖体生长情况，据统计有部观察外殖体生长情况，据统计有部分外殖体被污染，分析外殖体被污染的原因？分外殖体被污染，分析外殖体被污染的原因？【提示提示】外殖体被污染的原因：外殖体被污染的原因：培养材料培养材料的取材没有很好地加以选择，老的材料比幼嫩的取材没有很好地加以选择，老的材料比幼嫩的材料带菌多，田间的材料比温室的生长材料的材料带菌多，田间的材料比温室的生长材料带菌多；带菌多；材料消毒不彻底，植物组织只能进材料消毒不彻底，

38、植物组织只能进行表面消毒，对材料内部所带的细菌、霉菌等行表面消毒，对材料内部所带的细菌、霉菌等杂菌往往难以对付，可在培养基中添加抗生素杂菌往往难以对付，可在培养基中添加抗生素解决；解决；栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践人为污染，如使用未消毒工具或呼吸排出细人为污染，如使用未消毒工具或呼吸排出细菌，手接触材料或器皿边缘，使用过的工作器菌，手接触材料或器皿边缘，使用过的工作器具未消毒而再继续使用，造成交叉污染，接种具未消毒而再继续使用，造成交叉污染，接种室空气污染，使真菌孢子在培养基上繁殖。室空气污染，使真菌孢子在培养基上繁殖。栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一

39、章无菌操作技术实践3.接种时要注意哪些问题？接种时要注意哪些问题？【提示提示】接种时注意事项：接种时注意事项：每接种一块外每接种一块外殖体前，镊子需放入体积分数为殖体前，镊子需放入体积分数为75%的酒精溶的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种。注意，沾有酒精的镊子要等到冷却后再接种。注意，沾有酒精的镊子要等到酒精挥发完后，再放到酒精灯火焰上灼烧；酒精挥发完后，再放到酒精灯火焰上灼烧；外殖体放入培养基时，必须放平。外殖体放入培养基时，必须放平。栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践每瓶放置外殖体的数量，应该根据锥

40、形瓶的大小每瓶放置外殖体的数量，应该根据锥形瓶的大小确定，一般放置胡萝卜确定，一般放置胡萝卜34块，菊的茎或叶块，菊的茎或叶68块。注意外殖体在培养基中分布均匀，也不要放块。注意外殖体在培养基中分布均匀，也不要放得太少，以充分利用培养基中的营养成分；得太少，以充分利用培养基中的营养成分；插插入时应注意方向，不要倒插。茎尖、茎段等基部入时应注意方向，不要倒插。茎尖、茎段等基部插入培养基，利于吸收水分和养分；插入培养基，利于吸收水分和养分；接种时的接种时的酒精灯火焰不要调得太高，接种时应靠近酒精灯酒精灯火焰不要调得太高，接种时应靠近酒精灯火焰操作，接种的速度要快，接种时严防接种箱火焰操作，接种的速

41、度要快，接种时严防接种箱内着火；内着火；接种后应及时盖好瓶盖，作好标记，接种后应及时盖好瓶盖，作好标记，写明材料名称和接种日期。写明材料名称和接种日期。栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践【例题例题】下图是水稻的花药通过无菌操作，下图是水稻的花药通过无菌操作，培养花粉产生植株的两种途径的示意图。请据培养花粉产生植株的两种途径的示意图。请据图回答下列问题：图回答下列问题：栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践(1)C过程指过程指_，B指指_。(2)这两种途径之间没有绝对的界限，主要取这两种途径之间没有绝对的界限，主要取决于决于_。(3)配制培养基时加

42、琼脂的目的是配制培养基时加琼脂的目的是_。(4)组织培养要求无菌操作的原因是组织培养要求无菌操作的原因是_。(5)要促进花粉细胞分裂和生长，培养基中应要促进花粉细胞分裂和生长，培养基中应有有_和和_两类植物激素。两类植物激素。栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践【解析解析】(1)花药离体培养过程再分化形成花药离体培养过程再分化形成丛芽后需要诱导生根。丛芽后需要诱导生根。(2)图示两种途径的主图示两种途径的主要区别在于所使用培养基中激素的种类及浓要区别在于所使用培养基中激素的种类及浓度比不同。度比不同。(3)培养基中加入琼脂可制成固体培养基中加入琼脂可制成固体培养基。培养

43、基。(4)由于微生物会在营养丰富的培养由于微生物会在营养丰富的培养基上快速繁殖，与离体培养的植物组织进行基上快速繁殖，与离体培养的植物组织进行竞争，故培养过程中应竞争，故培养过程中应“无菌无菌”操作。操作。(5)植植物组织培养过程中，生长素与细胞分裂素的物组织培养过程中，生长素与细胞分裂素的应用对于外殖体脱分化、再分化至关重要。应用对于外殖体脱分化、再分化至关重要。栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践【答案答案】(1)诱导生根诱导生根 生根生根 (2)培养基中激素的种类及其浓度配比培养基中激素的种类及其浓度配比(3)使培养基呈固体状态，有利于外殖体的生长使培养基呈固体状态，有利于外殖体的生长(4)如不无菌操作，微生物会在培养基上快速繁如不无菌操作，微生物会在培养基上快速繁殖，与离体培养的植物组织竞争殖，与离体培养的植物组织竞争(5)细胞分裂素细胞分裂素 生长素生长素栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践知能演练知能演练 轻巧夺冠轻巧夺冠栏目栏目导引导引第一章无菌操作技术实践第一章无菌操作技术实践本部分内容讲解结束本部分内容讲解结束按按ESC键退出全屏播放键退出全屏播放