3植物组织培养技术[1](1).pptx

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1、 课题目标课题目标 说明植物组织培养的基本原理，学习植说明植物组织培养的基本原理，学习植物组织培养的基本技术，进行菊花或其物组织培养的基本技术，进行菊花或其他植物的组织培养。他植物的组织培养。 课题重点与难点课题重点与难点 课题重点：植物组织培养过程中使用的课题重点：植物组织培养过程中使用的无菌技术。无菌技术。 课题难点：植物组织培养过程中使用的课题难点：植物组织培养过程中使用的无菌技术。无菌技术。愈伤组织愈伤组织D、植物激素、植物激素植物组织培养过程植物组织培养过程离体的植物离体的植物器官、组织、器官、组织、细胞细胞脱分化脱分化愈愈伤伤组组织织再分化再分化芽芽根根植植物物体体组织培养实验过程

2、简图组织培养实验过程简图移栽移栽制备制备MS固固体培养基体培养基外植体消外植体消毒毒 接种接种 培培 养养栽栽 培培二、实验操作二、实验操作 移移 栽栽MS培养基的配制操作步骤培养基的配制操作步骤（1）MS培养基母液的配制培养基母液的配制: MS培养基含有十几种化合物，配制培养基含有十几种化合物，配制不方便也难称量准确，可将培养基中的不方便也难称量准确，可将培养基中的各种成分扩大一定倍数分别称量，配成各种成分扩大一定倍数分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。(母液配制见下表母液配制见下表) （ 2）MS（1000mL）培养基的配制）培养基的配制: 按

3、比例分别取适量各种成分的母液，加入烧按比例分别取适量各种成分的母液，加入烧杯，称取蔗糖杯，称取蔗糖30g，琼脂，琼脂7g，加水并加热使琼，加水并加热使琼脂溶解，按照需要的浓度分别加入激素，用脂溶解，按照需要的浓度分别加入激素，用1mol/L NaOH和和1mol/L HCl溶液调节溶液调节pH至至5.86.0。将配好的培养基迅速分装至组培瓶。将配好的培养基迅速分装至组培瓶中，拧上盖子，放入灭菌锅中，拧上盖子，放入灭菌锅121，灭菌，灭菌20min。植物组培具体操作步骤植物组培具体操作步骤（1）取材：）取材： 取菊花生长旺盛的嫩枝取菊花生长旺盛的嫩枝(外植体不能太小，否则外植体不能太小，否则会影

4、响愈伤组织的形成会影响愈伤组织的形成)。（2）消毒与修剪外植体：）消毒与修剪外植体： 流水冲洗后流水冲洗后,加少许洗衣粉刷洗加少许洗衣粉刷洗,流水冲流水冲20分钟分钟; 放入放入70酒精中摇动酒精中摇动23次次,持续持续67秒秒,无菌水无菌水冲洗冲洗23次，用无菌吸水纸吸干次，用无菌吸水纸吸干; 放入质量分数为放入质量分数为0.1%氯化汞溶液中浸泡氯化汞溶液中浸泡12分钟分钟,无菌水冲洗无菌水冲洗23次，无菌吸水纸吸干。次，无菌吸水纸吸干。（3）接种）接种常用灭菌剂使用浓度及效果比较表常用灭菌剂使用浓度及效果比较表 植物组织培养消毒与接种示意图植物组织培养消毒与接种示意图（六）栽培（六）栽培

5、材料的移栽及温室培养：材料的移栽及温室培养： 炼苗：先在外界环境闭瓶锻炼炼苗：先在外界环境闭瓶锻炼3天，再开天，再开瓶锻炼瓶锻炼3天（以培养基上开始长出菌为宜）。天（以培养基上开始长出菌为宜）。 移栽：去净培养基，可先在灭过菌的珍珠移栽：去净培养基，可先在灭过菌的珍珠岩或蛭石上培养使根系发达再转移到土壤中。岩或蛭石上培养使根系发达再转移到土壤中。菊花炼苗菊花炼苗菊花移栽苗菊花移栽苗1、外植体带菌、外植体带菌2、培养基及接种、培养基及接种器具灭菌不彻底器具灭菌不彻底3、接种操作时带入、接种操作时带入4、环境不清洁、环境不清洁 植物组培污染途径植物组培污染途径污染的预防措施污染的预防措施（一）防止

6、外植体带菌（一）防止外植体带菌（二）保证培养基及接种器具彻底灭菌（二）保证培养基及接种器具彻底灭菌（三）操作人员严格遵守无菌操作规程（三）操作人员严格遵守无菌操作规程（四）保证接种与培养环境清洁（四）保证接种与培养环境清洁1、培养基的灭菌（高压蒸汽、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）灭菌）2、外植体的消毒（酒精、氯、外植体的消毒（酒精、氯化汞）化汞）3、接种的无菌操作（酒精、接种的无菌操作（酒精、酒精灯酒精灯灼烧）灼烧）4、无菌箱中的培养；、无菌箱中的培养；5、移栽到消过毒的环境中生、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。存一段时间。思考：在整个操作过程中，是如何来实现无菌环思考：在整个操作过程中，是如

7、何来实现无菌环境的？境的？组组织织培培养养原理原理过程过程意义意义利用植物细胞的全能性利用植物细胞的全能性快速繁殖，培育无毒植株，培育作快速繁殖，培育无毒植株，培育作物新品种物新品种根根芽芽植植物物体体离体植离体植物器官、物器官、组织或组织或细胞细胞 ( (脱分化脱分化) )愈伤愈伤组织组织 ( (再分化再分化) )植物组织培养小结植物组织培养小结: :操作条件操作条件含有全部营养成分的培养基、一定的含有全部营养成分的培养基、一定的温度、空气、无菌环境、适合的温度、空气、无菌环境、适合的PHPH、适时光照等适时光照等 练习练习 1.答：植物组织培养所利用的植物材料体答：植物组织培养所利用的植物

8、材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。进行严格的无菌操作。 2.答：外植体的生理状态是成功进行组织答：外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再分化。生理状况好，容易诱导脱分化和再分

9、化。影响植物组织培养的影响因素影响植物组织培养的影响因素及注意事项及注意事项影响植物组织培养的几个因素影响植物组织培养的几个因素 植物的材料植物的材料 培养基培养基 植物激素植物激素 pH值值 外界因素（温度，光照，通气状况，材料处外界因素（温度，光照，通气状况，材料处理等）理等）【注意事项注意事项】1、实验所使用的器材必须要严格灭菌，注意、实验所使用的器材必须要严格灭菌，注意无菌操作，避免因染菌导致实验失败；无菌操作，避免因染菌导致实验失败；2、配制贮存母液时，要算好各种成分逐次加、配制贮存母液时，要算好各种成分逐次加入，等第一种成分完全溶解后再加入第二种入，等第一种成分完全溶解后再加入第二

10、种成分，切忌成分，切忌“一锅煮一锅煮”。有机物质和铁盐溶。有机物质和铁盐溶液配好以后要装入棕色瓶放入电冰箱内保存，液配好以后要装入棕色瓶放入电冰箱内保存，其它两种种母液可在常温下保存但最多不能其它两种种母液可在常温下保存但最多不能超过一个月；超过一个月；3、pH值对培养基的硬度有影响，值对培养基的硬度有影响，pH过高过高培养基变硬，培养基变硬，pH过低培养基不能凝固，过低培养基不能凝固，所以要调整好培养基的所以要调整好培养基的pH值；值；4、材料脱毒时不要在酒精中停留过长时间，、材料脱毒时不要在酒精中停留过长时间，以免材料被杀死。以免材料被杀死。5、所有制备好的溶液和试剂瓶上都要有标、所有制备

11、好的溶液和试剂瓶上都要有标签，注上名称、浓度、消毒与否和制备签，注上名称、浓度、消毒与否和制备日期。日期。组织培养实验室设置及设备介绍组织培养实验室设置及设备介绍（1）实验室设置）实验室设置组织培养实验室设置简图组织培养实验室设置简图（2） 组培相关设备仪器介绍组培相关设备仪器介绍 电子天平电子天平 纯水机纯水机 酸度计酸度计 高压灭菌锅高压灭菌锅 干燥箱干燥箱 摇床摇床 超净工作台超净工作台 数码显微镜数码显微镜数码显微镜又叫数码显微镜又叫视频显微视频显微镜镜，它是将显微镜看到的，它是将显微镜看到的实物图像通过数模转换，实物图像通过数模转换，使其成像在显微镜自带的使其成像在显微镜自带的屏幕上或计算机上。屏幕上或计算机上。 我们我们可以对微观领域的研究从可以对微观领域的研究从传统的普通的双眼观察到传统的普通的双眼观察到通过显示器上再现，从而通过显示器上再现，从而提高了工作效率。提高了工作效率。 培养架培养架 恒温光照培养箱恒温光照培养箱 非洲菊非洲菊 雏菊雏菊金盏菊波斯菊百日草孔雀草