2022年人教版高中生物课堂笔记--生物选修3笔记.docx
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1、精品学习资源生物选修三学问点基因工程的产生三个理论和三个技术:基因工程是在生物化学、分子生物学和微生物学等学科根底上开展起来的, 正是这些学科的根底理论和相关技术的开展催生了基因工程,详细有三大理论发觉 和三个技术突破;1) 理论根底: DNA 是遗传物质; DNA 分子的双螺旋结构和半储存复制;遗传密码的通用性和遗传信息传递的方式;2) 技术根底:限制性核酸内切酶的发觉与DNA 的切割; DNA 连接酶的发觉与 DNA 片段的连接;基因工程载体的构建与应用理论上的三大发觉、发觉了遗传物质DNA1944 年,艾弗里 O.T.Avery 的肺炎双球菌转化试验、揭示了遗传物质的分子机制:DNA 分
2、子的双螺旋结构和半储存复制1953 年,沃森 J.D.Watson 和克里克 F.Crick 的 DNA 双螺旋结构模型、半储存复制图,获1958 年诺贝尔奖;、确立了遗传信息的传递方式:以密码形式传递1963 年,美国尼伦伯格M.W.Nirenberg 和马太 H.Matthaei 确立了遗传信息以密码形式传递,破译了编码氨基酸的遗传密码3 个核苷酸 =1个密码子 =1 个 aa;技术上的三大突破、世界上第一个重组DNA 试验:实现不同来源DNA 的体外重组1972 年斯坦福高校化学家伯格P.Berg借助内切酶和连接酶将猴病毒 SV40 的 DNA 和大肠杆菌噬菌体的DNA 在试管中连接在了
3、一起,第一次胜利地实现了DNA 的体外重组;、第一个基因克隆试验:重组DNA 表达试验,是世界上第一个基因工程试验1973 年美国斯坦福高校医学院遗传学家科恩 S.Cohen将体外构建的含有四环素和卡那霉素抗性基因的重组质粒导入大肠杆菌,获得了具有双抗性的大肠杆菌转化子,胜利完成了第一个基因克隆试验;是基因工程产生的标志;、第一个真核基因在原核生物中的表达:第一次实现了异源真核基因在原核生物中的表达1974 年,科恩 S.Cohen和博耶 H.Boyer 将非洲爪蟾编码核糖体基因的 DNA 片断同 pSC101 质粒重组,并导入大肠杆菌细胞,结果说明动物基因已进入大肠杆菌并转录出相应的mRNA
4、 产物, 第一次实现了异源真核基因在原核生物中的表达;专题 1基因工程基因工程的概念基因工程是指根据人们的愿望,进行严格的设计, 通过 体外 DNA重组和转基因技术, 给予生物以 新的遗传特性 ,制造出 更符合人们需要的新的生物类型和生物产品;基因工程是在 DNA分子水平 上进行设计和施工的,又叫做DNA重组技术 ;一基因工程的根本工具1. “分子手术刀限制性核酸内切酶限制酶1来源:主要是从 原核生物 中别离纯化出来的;2功能:能够识别双链DNA分子的某种 特定 的核苷酸序列,并且使每一条链中特定 部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 断开,因此具有 专一 性;3结果:经限制酶切割产生的DNA片段
5、末端通常有两种形式:粘性末端EcoRI 酶 和平末端 SmaI 酶;2. “分子缝合针DNA连接酶(1) 两种 DNA连接酶 E coliDNA 连接酶和 T4- DNA连接酶的比拟:相同点:都缝合 磷酸二酯 键;区分: EcoliDNA连接酶来源于 T 4 噬菌体 ,只能将双链 DNA 片段互补的 黏性末端 之间的磷酸二酯键连接起来;而T 4DNA 连接酶能缝合 两种末端,但连接平末端的之间的效率较低;(2) 与 DNA 聚合酶作用的异同 :DNA 聚合酶只能将 单个核苷酸 加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯键;DNA连接酶是连接 两个 DNA片段 的末端,形成磷酸二酯键;3. “分子
6、运输车载体1载体具备的条件:能在受体细胞中复制并稳固储存; 具有一至多个限制酶切点,供外源DNA片段插入 ; 具有标记基因,供重组DNA的鉴定和挑选 ;2最常用的载体是 质粒 , 它是一种 暴露的、结构简洁的、独立于细菌染色体之外,并具有自我复制才能的双链环状DNA分子 ;3其它载体:噬菌体的衍生物、动植物病毒 二 基因工程的根本操作程序第一步: 目的基因的猎取1. 目的基因是指:编码蛋白质的结构基因;2. 原核基因实行 直接别离 获得,真核基因是 人工合成 ;人工合成目的基因的常用方法有 反转录法 _和化学合成法 _;从基因文库 基因组文库或 cDNA文库 中猎取人工合成目的基因: 常用的方
7、法有化学合成法和反转录法;3. PCR 技术扩增目的基因1原理: DNA双链复制2过程:第一步:加热至 90 95 DNA解链 ;其次步:冷却到 55 60, 引物结合到互补 DNA链 ;第三步:加热至 70 75, 热稳固 DNA聚合酶从引物起始互补链的合成 ;其次步: 基因表达载体的构建最核心步骤1. 目的:使目的基因在受体细胞中稳固存在 ,并且可以 遗传至下一代 ,使目的基因能够 表达和发挥作用 ;2. 组成: 目的基因 启动子 终止子 标记基因1启动子:是一段有特殊结构的DNA片段 ,位于基因的 首端 ,是 RNA聚合酶识别和结合的部位,能驱动基因转录出 mRNA,最终获得所需的 蛋白
8、质 ;2终止子:也是一段有特殊结构的DNA片段 ,位于基因的 尾端 ;3标记基因的作用:是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因,从而将 含有目的基因的细胞 挑选出来;常用的标记基因是抗生素基因 ;提示:与载体相比拟 , 增加启动子、目的基因和终止子三个基因片段, 其功能各不相同;启动子 DNA 片段 起始密码子 RNA; 终止子 DNA 片段 终止密码子 RNA;第三步: 将目的基因导入受体细胞_1. 转化的概念: 是目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维护稳固和表达的过程;2. 常用的转化方法:将目的基因导入植物细胞:采纳最多的方法是农杆菌转化法 ,其次仍有基因枪法 和 花粉管通道法 等;
9、将目的基因导入动物细胞:最常用的方法是显微注射技术 ;此方法的受体细胞多是 受精卵 ;2+将目的基因导入微生物细胞: 原核生物作为受体细胞的缘由是 繁衍快、 多为单细胞、遗传物质相对较少 , 最常用的原核细胞是 大肠杆菌 , 其转化方法是: 先用 Ca 处理细胞,使其成为 感受态细胞 , 再将 重组表达载体 DNA分子欢迎下载精品学习资源供学习参考欢迎下载精品学习资源溶于缓冲液中与感受态细胞混合,在肯定的温度下促进感受态细胞吸取DNA分子,完成转化过程;3. 重组细胞导入受体细胞后, 挑选含有基因表达载体受体细胞的依据是 标记基因是否表达 ;第四步: 目的基因的检测和表达1. 第一要检测转基因
10、生物的染色体DNA上是否插入了目的基因,方法是采纳DNA分子杂交技术 ;2. 其次仍要检测目的基因是否转录出了mRNA,方法是采纳用标记的目的基因作探针与 mRNA杂交 ;3. 最终检测 目的基因是否翻译成蛋白质,方法是从转基因生物中提取蛋白质 ,用相应的 抗体 进行 抗原抗体杂交 ;4. 有时仍需进行个体生物学水平 的鉴定;如转基因抗虫植物是否显现抗虫性状 ;三基因工程的应用1. 植物基因工程: 抗虫、抗病、抗逆转基因植物,利用转基因改进植物的品质;2. 动物基因工程: 提高动物生长速度、改善畜产品品质、用转基因动物生产药物;3. 基因治疗: 把正常的外源基因导入病人体内,使该基因表达产物发
11、挥作用;四蛋白质工程的概念蛋白质工程是指以 蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为根底,通过基因修饰或基因合成,对现有蛋白质进行改造 ,或制造一种 新的蛋白质 ,以满意人类的生产和生活的需求;基因工程在原那么上只能生产自然界已存在 的蛋白质转录翻译专题 2细胞工程一植物细胞工程1. 理论根底原理: 细胞全能性供学习参考全能性表达的难易程度:受精卵生殖细胞干细胞体细胞; 植物细胞 动物细胞2. 植物组织培育技术1过程: 离体 的植物器官、组织或细胞 愈伤组织 试管苗植物体2用途: 微型繁衍、作物脱毒、制造人工种子、单倍体育种、细胞产物的工厂化生产 ;3条件: 离体、无菌 、养分物质、激素、光
12、照等其他相宜条件;4位置:是培育 转基因植物 、植物体细胞杂交 培育植物新品种的最终一道工序;植物繁衍微型繁衍: 可以高效快速地实现种苗的大量繁衍作物脱毒: 采纳 茎尖 组织培育来除去病毒 由于 植物分生区邻近的病毒极少或没有 人工种子: 以植物组织培育得到的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等为材料,经人工薄膜包装得到的种子;优点: 完全保持优良品种的遗传特性,不受季节的限制; 便利贮存和运输 作物新品种培育单倍体育种: a 过程:植株 AaBb 通过减数分裂得到花粉AB 、Ab 、aB 、 ab 四种类型;对花粉进行 花药离体培育技术是植物组织培育 ,得到 单倍体 植株 ; 对其幼苗时期进行秋水仙
13、素 处理,得到了正常的纯合二倍体植株 AABB 、AAbb 、aaBB 、 aabb四种类型;b 优点:明显缩短育种年限,快速获得纯系植株;突变体利用: 在组织培育中会显现突变体,通过从有用的突变体中选育出新品种 如挑选抗病、抗盐、含高蛋白的突变体细胞产物的生产:通过能够产生对人们有利的产物的细胞进行组织培育,从而让它们能够产生大量的细胞产物;5位置:是培育 转基因植物 、植物体细胞杂交 培育植物新品种的最终一道工序;3. 植物体细胞杂交技术1过程:2诱导融合的方法:物理法包括离心、振动、电刺激等;化学法一般是用 聚乙二醇 PEG作为诱导剂;3去壁的方法: 酶解法纤维素酶和果胶酶4意义: 克服
14、了远缘杂交不亲和的障碍;二动物细胞工程1. 动物细胞培育1概念:动物细胞培育就是从动物机体中取出相关的组织 ,将它分散成 单个细胞 ,然后放在相宜的 培育基 中,让这些细胞 生长和繁衍 ;2动物细胞培育的流程: 取动物组织块 动物胚胎或幼龄动物的器官或组织剪碎用 胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成 单个细胞 制成 细胞悬液转入培育瓶中进行原代 培育贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞连续传代 培育;3细胞贴壁和接触抑制:悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上 ,称为 细胞贴壁 ;细胞数目不断增多,当贴壁细胞分裂生长到外表相互抑制 时,细胞就会 停止分裂增殖 ,这种现象称为 细胞的
15、接触抑制 ;4动物细胞培育需要满意以下条件 无菌、无毒的环境 :培育液应进行 无菌 处理;通常仍要在培育液中添加肯定量的 抗生素 ,以防培育过程中的污染;此外,应定期更换培育液,防止代谢产物积存对细胞自身造成危害; 养分 :合成培育基成分:糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等;通常需参与 血清、血浆 等自然成分; 温度 :相宜温度:哺乳动物多是36.5 0.5 ; pH: 7.2 7.4 ; 气体环境 : 95%空气 5%CO2;O2 是细胞代谢 所必需的, CO2 的主要作用是 维护培育液的 pH;5动物细胞培育技术的应用:制备病毒疫苗、制备单克隆抗体、检测有毒物质、培育医学讨论的各种
16、细胞;2. 动物体细胞核移植技术和克隆动物1哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞 核移植比拟简洁 和体细胞 核移植比拟难;2选用去核 卵 母 细胞 的缘由:卵 母 细胞 比拟大,简洁操作 ;卵 母 细胞细胞质多,养分丰富;3体细胞核移植的大致过程是:高产奶牛供应体细胞进行细胞培育 ;同时采集卵母细胞,在体外培育到减欢迎下载精品学习资源二分裂中期的卵母细胞,去核显微操作 注:为什么要用卵细胞?它可以提 供充分的养分;操作简便;细胞质不会抑制细胞核全能性的表达;将供体细胞第三步:杂种细胞的挑选和培育第四步:杂种植株的诱导与鉴定单克隆抗体的提纯欢迎下载精品学习资源注入去核卵母细胞;通过电刺激使两细胞融合,
17、供体核进入受体卵母细胞,构建重组胚胎;将胚胎移入受体代孕母牛体内;生出与供体奶牛遗传基因相结果猎取杂种植株获得 杂种细胞 ,以生产 细胞产品欢迎下载精品学习资源同的犊牛用途和意义4. 单克隆抗体克服远缘杂交的不亲和障碍,大大扩展杂交的亲本组合范畴 应用:白菜 - 甘蓝等杂种植株1制备单克隆抗体2诊断、治疗、预防疾病, 例如“生物导弹治疗癌症欢迎下载精品学习资源核移植1抗体:一个 B 淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 ;从血清中别离出的抗体产量低、纯度低、特异性差;2单克隆抗体的制备过程:对免疫小鼠注射特定的抗原蛋白目的使小鼠产生了效应B 细胞 ;提取 B 淋巴细胞;同时用动物细胞培育的方法培育骨髓
18、瘤细胞并提取;促使它们细胞融1. 植物组织培育与动物细胞培育的比拟植物组织培育动物细胞培育原理细胞的全能性细胞的增殖欢迎下载精品学习资源胚胎移植合 注:融合的结果是有许多不符合要求的;如有 2 个 B 淋巴细胞融合的细胞等,所以要进行挑选 ;在特定的挑选培育基上挑选出融合的杂种细胞 特点是能迅培 养基 的 物理性质固体液体合成培育基欢迎下载精品学习资源速大量增殖,又能产生专一的抗体 ;然后对它进行 克隆化培育和抗体检测 挑选出能够分泌所需抗体的杂种细胞 ;最终将杂交瘤细胞在体外做大规模培育或注射入小鼠腹腔内增殖, 从细胞培育液或小鼠腹水中可得到大量的单克隆抗体;培育基的成分水、矿质元素、维生素
19、、蔗糖、氨基酸、琼脂、 激素 等结果葡萄糖、 氨基酸、 无机盐、 维生素、 动物血清 等欢迎下载精品学习资源培育成新的植株或组织培育 成细胞系或细胞株4体细胞核移植技术的应用:欢迎下载精品学习资源加速家畜遗传改进进程,促进良畜群繁育;爱护濒危物种,增大存活数量;生产宝贵的医用蛋白;作为异种移植的供体;用于组织器官的移植等;培育目的植株快速繁衍脱毒植株的培育人工种子生产药物、杀虫剂等转基因植物的培育蛋白质生物制品的生产皮肤移植材料的培育检测有毒物质生理、病理、药理学讨论欢迎下载精品学习资源5体细胞核移植技术存在的问题:克隆动物存在着 健康 问题、表现出 遗传和生理 缺陷等;3. 动物细胞融合1动
20、物细胞融合也称 细胞杂交 ,是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程;融合后形成的具有原先两个或多个 细胞遗传信息的单核细胞,称为杂交细胞 ;取材植物幼嫩的部位或花药等动物胚胎或诞生不久的幼龄动物的器官或组织其他条件均为无菌操作,需要相宜的温度、pH、O2 等条件3生物技术与育种技术原理优点缺点欢迎下载精品学习资源2动物细胞融合与植物原生质体融合的原理根本相同, 诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的方法类似,常用的诱导因素有 聚乙二醇、灭活的病毒、电刺激 等;3动物细胞融合的意义:克服了 远缘杂交的不亲和性 ,成为讨论 细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育 的重要手段;4动物细胞
21、融合与植物体细胞杂交的比拟:细胞工程植物体细胞杂交动物细胞融合理论根底细胞的 全能 性、细胞膜的 流淌 性细胞 增殖 、细胞膜的 流淌 性3杂交瘤细胞的特点:既能大量繁衍 ,又能产生 专一的抗体 ;4单克隆抗体的优点:特异性强,灵敏度高,并能大量制备;5单克隆抗体的作用: 作为诊断试剂 :精确识别各种 抗原 物质的微小差异, 并跟 肯定抗原 发生特异性结合,具有 精确、高效、简易、快速的优点; 用于治疗疾病和运载药物:主要用于治疗 癌症治疗 ,可制成“ 生物导弹 ,也有少量用于治疗其它疾病;诱变育种杂交育种提高生物廉价的频率,使基因后代变异性状较快稳固; 可大幅度改进某些性状,突变缩短育种进程
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