2022年发酵工程实验.docx

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1、精品学习资源试验一酸奶的制作与乳酸菌的活菌计数 5 学时试验目的：1、学习并把握酸奶制作的基本原理与方法；2、明白市售酸奶的生产工艺；3、把握乳酸菌活菌计数方法与操作；试验原理：乳酸菌在乳中生长繁衍，发酵分解乳糖产生乳酸等有机酸，导致乳的pH 值下降， 使乳酪蛋白在其等电点邻近发生凝集；乳酸菌属于兼性厌氧微生物，在无氧条件下生长繁衍较好，试验室条件下利用混菌培育的方法，尽可能让乳酸菌在无氧条件下生长，每个单菌落代表一个微生物细胞；试验内容：一酸奶制作1、10%脱脂奶粉溶解于热水 80左右中，充分搅拌匀称，配成调制乳；2、添加蔗糖： 为了缓和酸奶的酸味， 改善酸奶口味， 在调制乳中加人 4-8

2、的蔗糖；3、灭菌：方法有两种：将乳加热至90，保温 5min ；4、接种：往冷却到43-45灭过菌的乳中加入乳酸菌，接种量为2%-5% ；5、分装：酸奶受到振动，乳凝状态易被破坏，因此，不能在发酵罐容器中先发酵然后再进行分装，须是将含有乳酸菌的牛乳培育基先分装到小容器中，加盖后送入恒温室培育，在小容器中发酵制成酸奶；6、发酵：发酵的温度保持在40-43 ，一般发酵时间为3-6h；发酵终点的确定有两种方法：1检测发酵奶的酸度，到达65-70 T ；2倾斜观看，瓶内酸奶流淌性差，而且瓶中部有微小颗粒显现；7、冷却：发酵终止，将酸奶从发酵室取出，用冷风快速将其冷印到10以下，一般 2 h ，使酸奶中

3、的乳酸菌停止生长，防止酸奶酸度过高而影响口感；8、冷藏和后熟：经冷却处理的酸奶，贮藏在2-5 的冷藏室中储存；9、感官指标1色泽：色泽匀称一样，呈乳白色，或稍带微黄色；2组织状态：凝块稠密牢固匀称细腻，无气泡，答应少量乳清析出；3气味：具有幽香纯洁的乳酸味，无酒精发酵味，无霉味和其他外来不良气味；二乳酸菌活菌检测、检测培育基：蛋白胨15g ，牛肉膏 5g ，葡萄糖 20g ，氯化钠 5g ，碳酸钙 10g ， 琼脂粉 20g ，水 1000ml，115 121 灭菌 20min，灭菌后放置水浴 52 保温备用；欢迎下载精品学习资源、稀释：取 10 克样品放入添加 90ml无菌水的带 4-6颗玻

4、璃珠的 250ml三角瓶中， 摇床 180rpm震荡 30min ，即为 10 1 样品溶液；再从中取1ml至添加 9.0ml 无菌生理盐水三角瓶中，稀释至10 2 ，以此类推稀释至 10 8 ，即稀释了 1 亿倍;、倒培育平板，从上述已稀释了1 亿倍的乳酸菌悬液中取1ml ，在无菌操作台上注入 9.0cm培育皿中，再将已经灭了菌的保持在52 水浴锅中的呈溶解状态的培育基，倒入 15 毫升左右于培育皿中， 全部浸到培育皿， 与菌悬液充分混合匀称 倒入培育基后，立刻用手转动培育皿，转动几下，让其混合匀称，然后等其凝固再移入培育箱中培育，留意最终一步倒平皿必需在超净台无菌操作，以免杂菌污染；每次稀

5、释均要换灭好菌的移液管；、培育条件： 37 恒温培育箱培育48 72h ；、培育完毕后，取出进行计数，由于是稀释了1 亿倍，所以一个透亮圈菌落代表1亿/ 克，假如有 200 个透亮圈，就是 200亿/ 克；试验器材及试剂：菌种：市售酸奶试剂：白糖奶粉培育基各成分器材：培育箱、电炉、铝锅5L ，培育皿，酸奶发酵瓶自带试验结果：1、 具体描述自己制作的酸奶结果：答：制作后酸奶与市场所售酸奶比较，比市场所售酸奶更稠密，酸奶的香味与酸味明显，制作胜利2、 记录个人酸奶中各菌数测定的平行数据，运算最终平均值；答：最终培育基上未显现乳酸菌菌落，全部为杂菌菌落，因此无法统计酸奶中的菌含量3、 同时用图片记录

6、试验过程中各现象与结果并对图进行注释；欢迎下载精品学习资源摸索题 ：答：制备乳酸菌时， 瓶子上方留有一部分空间， 并未使乳酸菌完全处于无氧环境中发酵， 但乳酸菌是兼性厌氧菌，因此在存在少量氧气的环境中，乳酸菌也可以生长， 酸奶制备胜利； 但在平板接种时，由于污染杂菌， 乳酸菌并未长出；乳酸菌计数失败；欢迎下载精品学习资源乳酸菌的保藏通常为低温条件，这给运输、保藏带来很大的成本，请问可采纳什么方法使乳酸菌在常温条件下有很高的存活率？答：在基因水平上对乳酸菌进行基因重组，从而获得耐高温乳酸菌；在基因库里挑选抗高温的基因并利用基因重组技术将其重组在乳酸菌基因上，对乳酸菌的基因进行修饰使其表达，以此来

7、获得耐高温菌株；欢迎下载精品学习资源试验二 枯草芽孢杆菌固态发酵及活菌数测定 5 学时试验目的：1、学习明白固态发酵原理；2、以枯草芽孢杆菌为对象，明白固态发酵的掌握技术；3、把握枯草芽孢杆菌活菌计数方法与操作；试验原理：作为抗生素的替代品，益生菌和酶制剂等的讨论与开发近几年成为绿色饲料添加剂的热点，其中益生菌倍受关注；作为益生菌的一种，芽孢杆菌制剂在动物生产中的讨论和应用始终都是畜牧业科研和生产人员关注的焦点；目前芽孢杆菌多采纳液体深层发酵技术，再经喷雾干燥进行生产，对设备要求高，生产工艺复杂；而固体发酵采用的原料一般是廉价的农副产品如草粉、麸皮等 ，采纳的设备也较液体发酵简洁，生产成本大大

8、低于液体发酵；所以近年来各生产厂家都在积极探究芽孢杆菌的固体发酵技术，以求简化生产工艺，提高产量，降低生产成本；固态发酵定义：指没有或几乎没有自由水存在下，在有肯定湿度的水不溶性固态基质中，培育一种或多种微生物的生物反应过程，是以气相为连续相的生物反应过程；枯草芽孢杆菌属于好氧微生物，试验室条件下利用稀释涂布培育的方法，让菌在有氧条件下生长，每个单菌落代表一个微生物细胞；试验内容：1、液体种子培育基配制：葡萄糖 0.2%， NaCl 0.5% ，酵母膏 0.5%，蛋白胨 1%， pH 7.0 ；2、液体种子培育：每 300 mL 三角瓶装量 50 mL 液体种子培育基，在115条件下灭菌 30

9、 min ；降温后从斜面接一环菌苔至种子培育基；置 37控温摇床培育； 转速 200 rmin-1 ， 至芽孢率达 90% 以上时停止 ，约需 24 h；3、固体发酵培育基： 麸皮 60%，稻草粉 10%，玉米粉 5% ，豆粕 25%，硫酸镁 0.05%，硫酸铵 0.5% ，；4、三角瓶固体发酵培育：每 250 mL 三角瓶装量 20-30 g湿重，固体发酵培育基原料试剂混合料，加水， 搅拌匀称，培育基经 121 灭菌 30 min ，降温后接种量为 2%V/M ：V 液体菌种体积数， M 固体发酵培育基的质量，然后置 37培育箱中静止培育，间时拍打，使其均匀生长；至脱落芽孢率为80%以上时，

10、停止发酵，约需48 h；二枯草芽孢菌活菌检测、检测培育基：葡萄糖0.2% ，NaCl 0.5% ，酵母膏 0.5%，蛋白胨 1%，琼脂粉 2% ，pH 7.0；115 灭菌 20min ，灭菌后放置水浴 52 保温备用；欢迎下载精品学习资源、稀释：取 10 克样品放入添加90ml无菌水的带玻璃珠的250ml三角瓶中，摇床180rpm震荡 30min ，即为 10 1 样品溶液；再从中取 1ml至添加 9.0ml无菌生理盐水的三角瓶中，稀释至10 2 ， 以此类推稀释至 10 8 ，即稀释了 1 亿倍;、倒培育平板，将已经灭了菌的保持在52 水浴锅中的呈溶解状态的培育基，倒入15 毫升左右于培育

11、皿中，全部浸到培育皿，待培育基凝固；从上述已稀释了1 亿倍的菌悬液中取 ml 于已凝固的培育基外表，用玻璃刮铲涂布匀称，静止10min， 然后再移入培育箱中培育；、培育条件： 37 恒温培育箱培育24 48h ；、培育完毕后，取出进行计数；三 芽孢率测定 : 采纳芽孢革兰氏染色后显微镜下观看试验器材及试剂：菌种：枯草芽孢杆菌试剂：培育基成分器材：培育箱、灭菌锅，培育皿试验结果：1、 具体描述枯草芽孢杆菌固态培育物外观、气味、培育物状态等 ：答：枯草芽孢杆菌淡黄色，中间色深，外表较平整，无光泽，边缘不整齐，形成的菌落为圆形；培育基中的枯草芽孢杆菌有腥臭味，长势良好，观看培育基， 无明显染菌现象；

12、3、同时用图片记录试验过程中各现象与结果，并对图进行注释；2、 记录活菌测定中各平行数据，运算最终平均值；答：数量稀释倍数密度 /g第一个平板1125107109其次个平板655107109第三个平板平均值225107109109菌落成白色，菌落外表有褶皱摸索题：在枯草芽孢杆菌固态生产过程中，为了防止霉菌与酵母的污染，可如何进行操作？答：加入抗真菌抑制剂欢迎下载精品学习资源试验三、淀粉糖化与酒精发酵 5 学时试验类型 ：综合性 试验目的：1. 明白酒精发酵的主要类型、工艺原理及其掌握条件2. 熟识酒精生产的工艺流程、把握酒精发酵的操作方法3. 把握用酶法从淀粉原料到水解糖的制备原理及方法4.

13、把握在试验室中模拟酒精发酵的工艺流程试验原理玉米粉、大米粉中可供发酵的物质主要是淀粉，而酿酒酵母由于缺乏相应的酶，所以不能直接利用淀粉进行酒精发酵，因此必需对原料进行预处理， 包括蒸煮液化、糖化等，蒸煮可使淀粉糊化，并破坏细胞，形成均一的醪液，能更好的接受糖化酶的作用，并转化为可发酵性糖，以便酵母进行酒精发酵；在无氧条件下酵母菌利用可发 酵性糖转化为酒精和二氧化碳的作用，称为酒精发酵，是生产酒精及各种酒类的基础， 可通过测定发酵过程中产生CO 2 的量和最终产物酒精的量得知酵母的发酵才能；试验内容1、原料的粉碎将玉米、大米用粉碎机粉碎，玉米淀粉含量为70%，大米淀粉含量为 75%；2、蒸煮糊化

14、称取肯定量的粉碎后淀粉质原料，按肯定的料水比100g：200ml， 调制淀粉乳， 90-100 条件下恒温水浴加热，淀粉乳受热后，在肯定温度范畴，淀粉粒开头破坏，晶体结构消逝，体积膨大，粘度急剧上升，呈粘稠的糊状，即成为非结晶性的淀粉；3、糖化经蒸煮糊化后的醪液，经过淀粉酶的糖化作用，将原料中的淀粉转化为可发酵性糖，供酵母利用；酶参考用量：淀粉乳 33%， 60 ，酶 240U/g 绝干淀粉，糖化时间16h；糊化醪液调整 pH4.5 ，往其中加入肯定量的淀粉酶120U/g 、糖化酶 120U/g ， 60 恒温下不断搅拌，直至粘度下降到肯定程度，淀粉完全糖化4、发酵1干酵母活化将干酵母按 1:

15、20 的比例投放于37 的温水中复水20min ；目的：复原酵母细胞的正常功能；2淀粉醪液糖化后，取400ml 上清液于干净的大可乐瓶中，加相同体积的水稀释，加入活化好的酵母种液5ml ，混匀， 28 度培育箱中静止培育36h 左右；欢迎下载精品学习资源5、二氧化碳生成的检验1观看三角瓶中的发酵液有无气泡溢出；2滴入 10%氢氧化钠 1ml 于发酵液试管中，观看，如气体逐步消逝，就说明有二氧化碳的存在；6、二氧化碳生产量的测定1接种完，擦干瓶外壁，于天平上称量，记为W1;2 试验终止，取出瓶轻轻摇动，使二氧化碳尽量溢出，在同一天平上称量，记为W2 ； 3二氧化碳生成量= W1-W27、酒精生成

16、的检验1打开瓶塞，嗅闻有无酒精气味；2取发酵液 5ml，加 10%硫酸 2ml ；3再加入 1% K 2Cr2O7 溶液 10-20 滴，如颜色由黄色变为黄绿色说明有酒精产生；K 2Cr2O7+H 2SO4 +CH3CH 2OH CH 3 COOH+K 2SO4+Cr 2SO 43试验器材及试剂：菌种： 活性干酵母试剂： 培育基各成分、 大米粉、 活性干酵母、 淀粉酶、糖化酶、大可乐瓶溶液： 10% H2SO4 、1%K2Cr2O7 、10%NaOH器材：试管、培育箱、灭菌锅、三角瓶、水浴锅、粉碎机、离心机试验结果：1、 具体记录试验过程中各参数及数据；淀粉淀粉酶CaCl2糖化酶100g10g

17、2. 对试验结果的判定与分析；答:1 二氧化碳生成的检验培育约48h 后，观看瓶中混合液，淀粉大部分沉降在瓶底，上清浓度较稀， 靠瓶壁边缘有一连串微小气泡2 酒精生成的检验打开瓶塞，闻到有浓重酒精气味；取发酵液 5ml,加 10%硫酸 2ml, 加 1%K2Cr 2O7溶液 10-20 滴，颜色由黄色变为黄绿色，稍加热后现象产生更快，更明显；摸索题： 现有 3 株不同来源的酒精酵母，请设计与本试验操作不同的试验，判定哪株酵母发酵酒精才能最强？答：按试验步骤配制等量的三组醪液，加入等量糖化酶进行糖化作用，将原料中的淀粉转化为可发酵性糖，向三组糖化后的淀粉上清中加入等量 3 株不同来源的酒精酵母种

18、液，相同条件下培育一段时间，分别测定三组试验产生的 CO2的质量，进行比较；产 CO2越多表示发酵酒精才能越强；欢迎下载精品学习资源试验四 黑曲霉固体发酵生产纤维素酶及酶解底物反应5 学时试验目的 ：1、明白黑曲霉固体发酵产酶情形2、把握微生物固体发酵操作技术3、明白纤维素酶提取方法及酶活性定性测定方法试验原理 ：纤维素酶是降解纤维素的一组酶的总称，是起协同作用的多组分酶系，属于诱导酶，其产生需要纤维素类物质的诱导；试验中以米曲霉为发酵菌株，稻草作为产酶诱导物；试验内容1、黑曲霉菌种活化1配制 PDA 培育基：称取 200g 马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml 煮沸半个小时，纱布过滤，再加

19、20g 葡萄糖和 20g 琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管， 每试管约 5-10ml 视试管大小而定 ， 15 磅蒸气 121 灭菌 20 分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用；2在无菌超净台上接种保藏的黑曲霉于PDA 斜面， 28 培育 5-7 天，斜面上长满孢子；2、配制发酵培育基： 15g 麸皮+10g 稻草粉， 0.5%KH2PO4 ， 0.5% NH42SO4 ，加15ml 水加水量 40% 60%，拌匀，装瓶；3、灭菌： 121 灭菌 30min ，冷却至室温；4、黑曲霉孢子悬浮液制备已培育好的黑曲霉孢子斜面一支，加入约 10ml 无菌水， 洗下孢子， 制成孢子悬液；5、

20、接种： 用移液管在无菌条件下吸取肯定量的悬液，移入灭菌好的固体培育基中， 于 30 度条件下培育 96h，期间每隔 12h 摇动三角瓶一次；6、提取粗酶液向瓶中加入无菌水约50ml，浸泡固体曲30min-1h ；过滤得粗酶液；7、酶活性测定1配制 1%CMC 底物平板：配方： 1g 羧甲基纤维素钠， 1.8g 琼脂， 100ml ，琼脂完全溶解后，加入0.03g 曲利本蓝，倒平板，每皿约15ml ；2打孔：打孔器经酒精燃烧灭菌后，每平板打4 孔，并在酒精灯火焰上稍稍加热打孔处，使孔四周的培育基微融，然后平放冷却；3加样：往孔内加入粗酶液适量约100ul ，同时需设对比；4培育反应：将加样后的平

21、板当心平端放入30培育箱， 放置 20 小时左右；5观看结果：可直接观看透亮圈有无、测定透亮圈直径；欢迎下载精品学习资源试验器材及试剂：菌种：黑曲霉试剂：土豆、稻草、麸皮、硫酸铵、羧甲基纤维素钠CMC 器材：培育箱、灭菌锅、三角瓶、摇床、离心机、天平、三角瓶试验结果：1、 认真观看固体培育基发酵前后的状态，并描述；答：固体培育基发酵前：培育基颜色较浅，各成分麸皮、稻草新奇，粘度大成团状固体培育基发酵后：培育基中产生较多黑色孢子及菌体，培育基养分成分被利用，体积缩小2、 认真观看底物平板酶解前后的现象，并测量水解圈大小；现象：纸片四周显现浅浅的水解圈，打孔培育基未显现水解圈，纸片直径2.5cm，

22、水解圈 3cm，直径比 5:6摸索题： 纤维素是自然界最丰富的资源，从理论角度分析如何最大限度地通过酶法利用该资源？而现实存在什么问题？目前对纤维素降解有哪些讨论进展？答：要想最大限度的利用纤维素，可从两个方面入手；一是通过生产高性能纤维素酶的方法，二是找到包蕴能量较高的纤维素；而现实中存在的问题是高性能纤维素酶的猎取，而可以通过诱变和挑选获得可产生纤维素酶的新菌株；目前在纤维素的降解方面，微 生物的讨论较多，降解纤维素的真菌有很多，如木霉属、青霉属、曲霉属、根霉属、 漆斑霉属、枝顶孢霉属、毛壳霉属和脉孢霉属等；其中，很多纤维素降解真菌在生长 过程中能产生菌丝， 菌丝具有很强的穿透才能，能穿透

23、植物角质层的阻碍，紧紧依附和穿插在纤维物质上，增大降解酶与纤维物质的接触面积，从而加快降解速率；如木霉属、青霉属、漆斑霉属、毛壳霉属和脉抱霉属为丝状真菌；目前，木霉属是迄今所 知纤维素酶系最全面和讨论较多的一个属；欢迎下载精品学习资源试验五 甘露聚糖酶液体发酵及酶解反应 6 学时试验目的：1. 明白并把握液体发酵产酶操作及酶反应条件的掌握2. 与固体发酵产酶进行比较分析试验原理甘露聚糖是植物半纤维素的重要组分，其主链是由吡喃甘露糖残基以1,4- -D 糖苷键连接而成；当主链的某些残基被葡萄糖取代，或半乳糖通过1,6- -糖苷键与甘露糖残基相连形成分枝，就称之为异甘露聚糖，主要有半乳甘露聚糖、葡

24、萄甘露聚糖和半乳葡萄甘露聚糖；甘露聚糖是半纤维素的其次大组分，在自然界中分布广泛，且多以异甘露聚糖的形式存在，同型甘露聚糖非常少见；-甘露聚糖酶以内切方式降解甘露聚糖主链产生不同聚合度的甘露寡糖和少量甘露糖，是甘露聚糖降解酶中最关键的酶；甘露聚糖酶可广泛应用于食品、造纸、纺织印染等行业；利用-甘露聚糖酶可以制取有特别保健作用的甘露寡糖；在纸浆制造业，可用于代替碱法进行脱色、漂白；在纺织印染方面，利用-甘露聚糖酶与其它酶联合作用，能有效去除产品上粘附的余外染料，降低能耗和对环境的污染等；甘露聚糖酶的工业化生产将在很多行业产生很 大的经济和社会效益；因此，近年来甘露聚糖酶逐步成为国内外关注和讨论的

25、热点之 一；甘露聚糖酶是一种半纤维素酶，其产生需要肯定的诱导物存在；本试验以枯草芽 孢杆菌为菌株，以魔芋粉为诱导物；试验内容1. 菌种活化1 配制 LB 固体培育基：蛋白胨10g/L ， 酵母提取物 5g/L ，氯化钠 10g/L ，琼脂 20g/L ，待琼脂充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管，每试管约5-10ml 视试管大小而定，15 磅蒸气 121灭菌 20 分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用；2在无菌超净台上接种保藏的枯草芽孢杆菌于LB 斜面， 28 培育 2 天；2. 配制产酶培育基：蛋白胨10g/L ， 酵母提取物 5g/L ，氯化钠 10g/L ，魔芋粉30g/L ，3. 以

26、10%的体积量分装于三角瓶中25ml 液体培育基 /250ml 三角瓶， 121 灭菌 20 分钟；4. 菌悬液的制备已培育好的枯草杆菌斜面一支，加入约10ml 无菌水，洗下菌体，制成菌悬液；5. 接种用移液管在无菌条件下吸取肯定量的悬液，移入灭菌好的固体培育基中，于37 度200rpm 条件下培育 72h；6. 粗酶液提取： 3000rpm 离心收集得到粗酶液7. 酶解底物分析：预备两三角瓶，分别加入50ml 自来水， 46 度水浴保温欢迎下载精品学习资源8. 往两三角瓶中各加入1g 魔芋粉，然后其中一个加入粗酶液1ml，另一个加入 1ml 蒸馏水做空白对比 ；以后每隔 5-10min 往两

27、三角瓶中各加入1g 魔芋粉， 前后共加 5g9. 酶解反应 30-60min ，期间观看反应现象；试验器材及试剂：菌种：枯草芽孢杆菌试剂：蛋白胨、酵母粉、氯化钠、魔芋粉器材：培育箱、灭菌锅、三角瓶、摇床、离心机、天平、三角瓶试验结果：1、 认真观看液体培育基发酵前后的状态，并描述； 答：发酵之前的液体培育基的状态：在配制产酶培育基时，魔芋粉难溶解，照旧是固体颗粒；等完全灭完菌后，放正在试验台上，等冷却后，状态比较像固体培育基，但魔芋粉照旧不溶解，其颗粒匀称地分布于培育基中；经过三天的培育之后，产酶培育基被液化，得到的是含有粗酶液的液体培育基，完全呈黄褐色的液体状2、 认真观看底物水解前后的现象

28、；答：对比组：魔芋粉结成团， 透亮，具有弹性， 黏度很大，无法搅拌，试验难以连续；试验组：魔芋粉已被完全酶解，三角瓶中完全是液体状的酶解产物，溶液呈透亮状；摸索题：以本人液体发酵产酶为例，请具体介绍甘露聚糖酶定量测定的原理与方法；答：原理：样品中的甘露聚糖酶对底物半乳甘露聚糖进行水解，用 DNS试剂3,5-二硝基水杨酸分光光度法测定水解所产生的复原糖量；方法：别向 2 支试管中加入1.8mL 底物溶液，置50水浴中保温5min；在其中一 支试管中加入 200 L 稀释酶样， 磁力旋转搅拌匀称， 置于 50水浴中精确保温 5 min；加入 3.0 mL DNS 试剂至两支试管中，搅拌匀称；在另一

29、支试管空白管中加入200L 稀释酶样，同时将两支试管放入沸水浴中精确保温5min ，取出置入冷水中冷却至室温；于 540 nm处测量酶样对空白的吸光度，在酶活标准曲线上读取酶活，再乘以酶样稀释倍数；欢迎下载精品学习资源试验六 从土壤中别离挑选产抗生素放线菌及抗菌谱分析试验目的：1、从土壤中别离产抗生素的放线菌；2、抗生素产生菌的抗菌谱测定；3、把握微生物的基本操作；试验原理：放线菌是重要的抗生素产生菌，主要分布在土壤中，其数量仅次于细菌，一般在中性偏碱性、有机质丰富、通气性好的土壤中含量较多；由于土壤中的微生物是各种不同种类微生物的混合体，为了讨论某种微生物，就必需把它们从这些混杂的微生物群体

30、中别离出来，从而获得某一菌株的纯培育；别离放线菌常用稀释倒平板法；依据放线菌的养分、酸碱度等条件要求，常选用合成培育基或有机氮培育基；假如培育基成分转变，或土壤预先处理120热处理 1h，或加入某种抑制剂如加数滴10%酚等，都可以使细菌 本试验加入重铬酸钾150 L ，霉菌显现的数量大大削减，从而剔除了其它杂菌；再通过稀释法，使放线菌在固体培育基上形成单独菌落，并可得到纯菌株；放线菌可以产生抗生素，抑制其他菌种的生长，挑取纯菌落进行抗菌谱分析，指示菌为大肠杆菌 G-和枯草芽孢杆菌 G+；试验内容1、高氏一号培育基的制备可溶性淀粉 20g，硝酸钾 1g,氯化钠 0.5g，K2HPO4 .3H2O

31、 0.5g，MgSO4 .7H2O 0.5g ， FeSO4.7H2O 0.01g，琼脂 20g，水 1000ml ， pH7.4 ；配制时，先用冷水，将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000ml ；112灭菌 20 分钟试验中所用无菌器具均在此时灭菌 ；2、土壤取样及其悬液梯度稀释选定取样点最好是有机质含量高的菜地，按对角交叉五点法取样；先除去表层约 2cm 的土壤，将铲子插入土中数次，然后取210cm 处的土壤；盛土的容器应是无菌的；将 5 点样品约 1kg 充分混匀，除去碎石、植物残根等，土样取回后应尽快投入试验；3、称土样 10g 于

32、盛有 90mL 无菌水并装有玻璃珠的三角瓶中，振荡 10 20min，使土样中的菌体、芽孢或孢子匀称分散，此即为 10-1 浓度的菌悬液，静置 30s；另取装有9ml 无菌水的试管 4 支，编号 10-2、10-3、10-4、10-5；用无菌吸管无菌操作取 10-1 浓度的土壤悬液 1ml 并加入编号 10-2 的无菌试管中， 并吹吸吸管 34 次，使与 9ml 水混匀，即为 10-2 浓度的土壤稀释液；依此类推，直到稀释至 10-5 的试管中每个稀释度换 1支无菌吸管；稀释过程需在无菌室或无菌操作条件下进行；4、稀释倒平板法别离土壤中放线菌取 3 支 1 毫升移液管分别从10-3、10-4、

33、10-5 菌悬液中吸取1 毫升菌悬液，分别注入编号 10-3、10-4、10 -5 的培育皿内，每一梯度两个平板；将温度为45 50的高氏一欢迎下载精品学习资源号培育基倒入上述各培育皿内，轻轻旋转使菌悬液充分混合匀称，凝固后，将培育皿倒扣放置在暖和处28左右培育一周，每天观看培育基外表有无微生物菌落；将平皿上的放线菌菌落挑取在淀粉琼脂平皿上四区划线进行别离纯化，28恒温培育一周左右，观看放线菌菌落特点；5、抗菌谱测定：1配制 LB 培育基： 蛋白胨 10g/L ， 酵母提取物 5g/L ，氯化钠 10g/L ， 琼脂 20g/L ；灭菌后倒平板；2将摇床培育12h 的大肠杆菌和枯草芽孢杆菌分别

34、涂布于固态 LB 培育基，静置 10min ； 3挖取一个放线菌菌落含培育基 ，倒置于平板分区的中心，培育一天后，观看并测量抑菌圈大小；试验器材及试剂：菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌试剂：蛋白胨、酵母提取物、氯化 钠、琼脂、可溶性淀粉、硝酸钾、氯化钠、K2HPO4.3H2O 、MgSO4 .7H2O 、FeSO4.7H2O 、酒精、土壤器材：培育箱、灭菌锅、三角瓶、摇床、天平、三角瓶、试管、棉塞、涂布棒、接种环试验结果：1 描述别离到的放线菌培育特点；放线菌外表光滑，颜色各异，黄，黑，褐，白，橙色，菌落较小；2 观看并测量对指示菌的抑菌圈大小；枯草芽胞杆菌没有抑菌圈，大肠杆菌基本都有抑菌圈，菌圈直径0.8cm，抑菌圈直径小的 0.93cm，大的 1.3cm；摸索题：以某一抗生素为例，描述其工业生产操作；1. 制备孢子2.斜面接种3.接种到大米上，产生米孢子5. 接 种 到 二 级 种 子 罐6. 接 种 到 发 酵 罐8.过滤器9.萃取器10.蒸发器11.结晶器欢迎下载