2022年残留溶剂方法学验证方案.docx

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1、第 4 页 共 20 页VP -01-06-00-041重庆麦克福新制药阿莫西林残留溶剂分析方法验证方案文件编号： VP-01-06-00-041方案起草部门签名日期质量治理部方案审核部门签名日期质量治理部质量治理部方案批准质量受权人签名批准日期生效日期：年月日1、概述在阿莫西林制备工艺中，使用了甲醇与丙酮两种对人体具有危害的二类溶剂，我公司为了确保阿莫西林原料中甲醇与丙酮的残留在国家要求范畴内，开发了阿莫西林胶囊中甲醇与丙酮残留的检测方法，依据中国药典2021 年版的要求对此检测方法进行方法学验证；2、验证目的证明本方法能满意阿莫西林原料中甲醇与丙酮的残留溶剂测定，确保阿莫西林原料中甲醇与丙

2、酮的残留溶剂检测方法精确、重现并耐用，检测结果数据真实牢靠；3、验证范畴本验证方案适用于阿莫西林中甲醇与丙酮的残留溶剂检验方法验证；4、确认小组成员及职责姓 名部门及职务验证小组中职务及职责袁家勇质量负责人组长：验证方案的批准实施、验证报告的批准；吴涛质量部长副组长：负责起草、组织实施验证方案，完成验证报告；彭雪梅QA组员：负责审核验证方案及实施过程的监督和检查；张海QC组员：执行验证方案，样品的质量检验及记录的填写；李树冰QC组员：执行验证方案，样品的质量检验及记录的填写；5、验证前的风险评估验证小组人员依据质量风险治理规程，对分析方法进行了风险评估，确定了需进行方法确认的项目；5 严峻性

3、S： 危害可能产生后果的程度；严峻程度分为五个等级；级 别级别描述评定标准赋分值第五级特别严峻可能导致检测结果不精确或不行靠， 直接影5响产品质量；第四级严峻可能导致检测结果产生重大偏差， 对产品质4量有较大影响；第三级中等可能导致检测结果产生偏差， 对产品质量有3肯定影响；其次级稍微可能导致检测结果产生偏差， 但在可接受范2围；第一级可忽视对检测结果无影响或影响可以忽视；1可能性 P： 影响检测结果的大事发生的可能性频率或概率，建立以下五个等级：级别级别描述评定标准赋分值第五级很高难掌握，特别有可能发生5第四级高较难掌握，很有可能发生4第三级中等可以掌握，可能发生3其次级低简单掌握，不太可能

4、发生2第一级稀有很简单掌握，发生的几率极低1可检测性 D： 检测到反常情形存在的才能的程度，定义如下：级 别级别描述评定标准赋分值第五级几乎不行能没有已知的掌握方法能找出反常情形或现行5掌握方法找出反常情形的可能性很微小；第四级微小现行掌握方法找出反常情形的可能性很小；4第三级中等现行掌握方法找出反常情形的可能性中等；3其次级高现行掌握方法找出反常情形的可能性高；2第一级现行掌握方法找出反常情形的可能性很高，很高1几乎确定能找出反常情形；风险优先数量等级判定 RPN.1 风险等级判定标精的确定RPN 是大事发生的严峻程度、可能性和可探测性三者乘积，用来衡量可能的仪器缺陷， 以便实行可能的预防措

5、施；RPN = Severity严峻程度 Possibility 发生的可能性 Detection可探测性 风险得分风险级别RPN8低风险9RPN 36中风险37RPN 125高风险风险得分风险接受及掌握措施低风险风险可接受，无需实行额外的风险掌握措施中风险要求采纳掌握措施，通过提高可检测性及或降低风险产生的可能性来降低最终风险水平，所采纳的措施可以是规程或者是技术措施，但均应经过验证；高风险风险不行以接受，需实行风险掌握 /降低措施注：当 RPN8，但严峻性 S 为 5 时，仍需按中等以上风险进行后续掌握；VP -01-06-00-041麦克福新制药第 5 页 共 20 页风险风险项目可能的

6、失败模式潜在影响SPDRPN级别建议实行措施专属性不具有专属性不能有效别离33327中首次使用前对专属性进行验证定量限与检测限定量限、检测限高甲醇或丙酮无法被检出对分析方法的定量限、检测限进行验证精密度精密度差精确度不同时间或人员测定的结果不一样首次使用前对精密度进行验证首次使用前对准回收率低结果不精确线性线性差结果不精确确度进行验证首次使用前对线性进行验证范畴范畴窄耐用性耐用性差浓度超过范畴后结果不精确参数微小变化对结果影响较大首次使用前对范畴进行验证首次使用前对耐用性进行验证33327中33327中33327中33327中33327中33327中6、验证前的预备人员培训在本方案实施前，已对

7、方案实施过程中涉及人员进行培训，以保证方案顺当实施，做好培训记录，培训记录见表 1；表 1训确认表文件名称培训人参与培训人员溯源资料阿莫西林残留溶剂分析方法验证方案VP-01-06-00-041麦克福新制药第 20 页 共 20 页结论检查人 /日期复核人 /日期7、验证内容验证项目及可接受标准验证项目可接受标准溶剂空白应不干扰甲醇和丙酮的检测；专属性系统适用性甲醇和丙酮与相邻峰之间的别离度样品加入试验：不干扰残留溶剂测定，溶剂峰别离度 对比溶液连续进样6 次的峰面积的 RSD 10%理论塔板数 2000残留溶剂峰别离度定量限符合 S/N=10 1 的要求检测限符合 S/N=3 1 的要求线性

8、及范畴相关系数 R2精确度回收率均在 80% 120%，且 RSD 不得大于 10%；精密度重复性与中间精密度各6 份供试品测得的结果RSD 均不得大于 10.0% ，共计 12 份结果的 RSD 不得大于 15%；耐用性各考察色谱条件下，各项转变测试结果均应满意系统适用性要求；见表 2表 2 仪器配置表名称型号编号气相色谱仪万分之一电子天平十万分之一电子天平检查人 / 日期复核人 / 日期7.3 验证所用的试剂及样品 见表 3表 3 验证所用试剂及样品名称规格批号供应商丙酮分析纯甲醇色谱纯N,N 二甲基乙酰胺 DMAC分析纯阿莫西林检查人 / 日期复核人 / 日期7.3 试验条件：检测器：

9、FID氢火焰离子化检测器色谱柱： WEL-624升温程序： 50，维护 6min，60/min 的速率升温至 240，维护 3 分钟进样口温度： 200检测器温度： 260 载气：氮气流速： ml/min分流比 1:1进样方式：顶空进样，顶空瓶平稳温度80，平稳时间 30min7.4.1.1目的：确定所需测定的目标溶剂可以很好的别离， 并且不会受到来自溶媒及可能显现的杂质的干扰；7.4.1.2.1 空白溶剂：精密移取 5mlDMAC置于 20ml 顶空瓶中，密封；7.4.1.2.2 甲醇贮备液：精密称取甲醇 30mg，置于已有 20mlDMAC 的 50ml 量瓶中，加 DMAC稀释至刻度，摇

10、匀，即得；7.4.1.2.3 甲醇定位溶液：精密量取甲醇储备液5ml 置 50ml 量瓶中，用 DMAC 稀释至刻度， 摇匀；取 5ml 置于 20ml 顶空瓶中，密封；7.4.1.2.4 丙酮贮备液：精密称取甲醇 50mg，置于已有 20mlDMAC 的 50ml 量瓶中，加 DMAC稀释至刻度，摇匀，即得；7.4.1.2.5 丙酮定位溶液：精密量取丙酮储备液5ml 置 50ml 量瓶中，用 DMAC 稀释至刻度， 摇匀；取 5ml 置于 20ml 顶空瓶中，密封；7.4.1.2.6 对比溶液：精密量取甲醇贮备液 5ml ，丙酮储备液 5ml 置 50ml 量瓶中，用 DMAC稀释至刻度，摇

11、匀，即得；取 5ml 置于 20ml 顶空瓶中，密封；7.4.1.2.7 样品溶液：取样品约 0.1g ，置于 20ml 顶空瓶中，精密加入 5mlDMAC溶解，密封；密封，超声使其分散匀称，即得；7.4.1.2.7样品- 对比溶液：取样品约 0.1g ，置于 20ml 顶空瓶中，精密加入上述对比溶液 5ml， 密封，超声使其分散匀称，即得；分别将上述空白溶剂、甲醇定位溶液、丙酮定位溶液、对比溶液、样品溶液、样品- 对比溶液混合溶液各进样 1 针，记录色谱图；可接受标准：. 空白溶剂色谱图中目标峰出峰位置邻近无显著干扰峰；. 对比溶液谱图中甲醇和丙酮目标峰与相邻峰的别离度应不小于，理论塔板数5

12、000；. 样品中可能显现的杂质对溶剂测定无干扰；结果见表 4表 4 专属性试验结果出峰次序名称保留时间别离度理论塔板数123结论试验人 / 日期复核人 / 日期7.4.2.1 目的：确认用本仪器系统进行残留溶剂测定方法的验证符合要求；7.4.2.2 溶液的配制：系统适用性溶液的配制：取专属性项下对比溶液，作为系统适用性溶液；测定：取系统适用性溶液，连续进样6 次，记录色谱图；可接受标准：.对比溶液连续 6 次进样所得图谱中目标峰峰面积RSD10%，保留时间的RSD 1%.理论塔板数 2000；别离度见表 5表 5 系统适用性试验结果序号保留时间 min 峰面积理论塔板数别离度 甲醇丙酮甲醇丙

13、酮甲醇丙酮甲醇丙酮123456平均值RSD%结论试验人 / 日期复核人 / 日期7.4.3.1目的：确定在本色谱条件下，被测溶剂可以被检出的最低浓度；取专属性项下的甲醇定位溶液及丙酮定位溶液，用DMAC逐级稀释成肯定浓度的溶液，精 密移取 5ml, 置于 20ml 顶空瓶中， 密封；顶空进样， 记录色谱图，直到符合 S/N=3 1 的标准， 该浓度的溶液即为检测限溶液，取此溶液5ml 共 3 份，分别置于 20ml 顶空瓶中，密封；7.4.3.3测定：取检测限溶液，顶空进样，共3 次，记录色谱图，运算各溶剂的最小检测限；可接受标准：符合 S/N=31见表 6表 6 检测限试验结果残留溶剂名称进

14、样次数S/NS/N 平均值检测限浓度 g/ml相对样品限度 %1甲醇231丙酮23结论试验人 / 日期复核人 / 日期7.4.4.1目的：确定在本色谱条件下，被测溶剂可以被精确定量的最低浓度；取专属性项下的甲醇定位溶液及丙酮定位溶液，用DMAC逐级稀释成肯定浓度的溶液，精 密移取 5ml, 置于 20ml 顶空瓶中， 密封；顶空进样， 记录色谱图， 直到符合 S/N=10 1 的标准， 该浓度的溶液即为定量限溶液，取此溶液5ml 共 5 份，分别置于 20ml 顶空瓶中，密封；7.4.4.3测定：取定量限溶液，顶空进样，平行操作共5 次，记录色谱图，运算各溶剂的最小定量限；可接受标准：符合 S

15、/N=10 1，重复 5 份的峰面积 RSD 不大于 10%见表 7表 7 定量限试验结果残留溶剂名称进样次数峰面积S/NS/N 平均值检测限浓度相对样品测定限度12甲醇34512丙酮345结论试验人 / 日期复核人 / 日期7.4.5.1目的：测试在定量限至限度标准的120%范畴内，待测溶剂的响应值与浓度之间的线性关系；溶液的配制：定量限：取定量限项下的浓度及平均峰面积值进行运算；线性贮备液：取专属性项下甲醇储备液、丙酮储备液作为线性储备液；线性溶液 1：分别精密量取甲醇储备液、丙酮储备液各2ml ，置 50ml 量瓶中，用 DMAC稀释至刻度，摇匀，即得甲醇24ug/ml，丙酮 40ug/

16、ml；线性溶液 2：分别精密量取甲醇储备液、丙酮储备液各3ml ，置 50ml 量瓶中，用 DMAC稀释至刻度，摇匀，即得甲醇36ug/ml，丙酮 60ug/ml；线性溶液 3：分别精密量取甲醇储备液、丙酮储备液各4ml ，置 50ml 量瓶中，用 DMAC稀释至刻度，摇匀，即得甲醇48ug/ml，丙酮 80ug/ml；线性溶液 4：分别精密量取甲醇储备液、丙酮储备液各5ml ，置 50ml 量瓶中，用 DMAC稀释至刻度，摇匀，即得甲醇60ug/ml，丙酮 100ug/ml；线性溶液 5：分别精密量取甲醇储备液、丙酮储备液各6ml ，置 50ml 量瓶中，用 DMAC稀释至刻度，摇匀，即得甲

17、醇72ug/ml，丙酮 120ug/ml；测定：精密量取各线性溶液5ml 置于顶空瓶中，密封，顶空进样检测，记录色谱图，记录每个浓度点的峰面积；以浓度对峰面积做回来曲线，以二次回来得到回来方程及相关系数；7.4.5.4可接受标准：线性相关系数 R2；试验结果见表 8表 8 线性与范畴试验结果123456溶剂项目定量限限度标准的 40%限度标准的 60%限度标准限度标准的 80%限度标准的 120%浓度 g/ml峰面积甲醇回来方程 相关系数 R2浓度 g/ml峰面积丙酮回来方程相关系数R2结论试验人 / 日期复核人 / 日期Excel 绘制曲线并运算相关系数7.4.6.1 目的：考察残留溶剂分析

18、方法测定结果与真实值或参考值接近的程度；7.4.6.2 溶液的配制； 空白溶液： DMAC对比贮备溶液： 精密称取甲醇 30mg、丙酮 50mg置于已加入 20mlDMAC 的 50ml 量瓶中，用 DMAC 稀释至刻度并摇匀，即得；对比贮备溶液：精密称取甲醇 30mg、丙酮 50mg置于已加入 20mlDMAC 的 50ml 量瓶中， 用 DMAC 稀释至刻度并摇匀，即得；对比溶液：精密量取对比贮备溶液 5ml 置 50ml 量瓶中，以 DMAC 稀释至刻度，摇匀， 即得；取 5ml 置于 20ml 顶空瓶中，密封；对比溶液：精密量取对比贮备溶液 5ml 置 50ml 量瓶中，以 DMAC

19、稀释至刻度，摇匀， 即得；取 5ml 置于 20ml 顶空瓶中，密封；供试品溶液：精密称取本品，置20ml 顶空瓶中，精密加入DMAC5ml ，密封，超声使其分散匀称，摇匀，平行配制 2 份；80%对比溶液：精密量取对比贮备溶液 4ml 置 50ml 量瓶中，以 DMAC 稀释至刻度，摇匀，即得；120%对比溶液：精密量取对比贮备溶液 6ml 置 50ml 量瓶中，以 DMAC 稀释至刻度， 摇匀，即得；80%精确度溶液的配制：精密称取本品0.1g，置 20ml 顶空瓶中，精密加入 80%对比溶液5ml，作为 80%回收溶液，密封，超声使其分散匀称，摇匀，平行配制3 份；100%精确度溶液的配

20、制：精密称取本品，置20ml 顶空瓶中，精密加入对比溶液5ml ， 作为 100%回收溶液，密封，超声使其分散匀称，摇匀，平行配制3 份；120%精确度溶液的配制： 精密称取本品， 置 20ml 顶空瓶中，精密加入 120%对比溶液 5ml ， 作为 120%回收溶液，密封，超声使其分散匀称，摇匀，平行配制3 份；测定：取对比溶液连续顶空进样5 次，对比溶液连续顶空进样2 次，供试品溶液、 80% 精确度溶液、 100%精确度溶液、 120%精确度溶液顶空进样 1 次，记录色谱图，运算各浓度点的回收率；运算公式：RfWsCs AsVSRfRf1Rf 22残留RfAu5 Wu100%测得量 Rf

21、AF5回收率测得量- 样品原有量加入量100%式中： Rf -甲醇或丙酮的校正因子；Rf 1五针对比液中甲醇或丙酮的校正因子的平均值；Rf 2 -两针对比液中甲醇或丙酮的校正因子的平均值；Rf对比液中甲醇或丙酮的校正因子的平均值； WS- 对比液中甲醇或丙酮的称样量，mg；Cs-对比品的含量， %；Vs对比品稀释倍数；As对比液色谱图中甲醇或丙酮的峰面积；Wu-供试品的称样量， mg；Au供试品色谱图中甲醇或丙酮的峰面积；AF精确度溶液色谱图中甲醇或丙酮的峰面积；可接受标准： 9 份回收率均在 80%120%，且 RSD 不得大于 10%；见表 9：表 9精确度试验结果溶80%精确度溶液100

22、% 精确度溶液120%精确度溶液项目剂123123123样品原有量 ug加入量 ug甲测得量 ug醇回收率 %平均回收率 %RSD %样品原有量 ug加入量 ug丙测得量 ug酮回收率 %平均回收率 %RSD %结论试验人 / 日期复核人 / 日期精密度重复性7.4.7.1.1目的：考察重复测定供试品中溶剂残留结果之间的接近程度；溶液配制：对比溶液：同对比溶液：同供试品溶液：精密称取阿莫西林置20ml 顶空瓶中，加 5mlN ， N-二甲基乙酰胺，密封， 超声使其分散匀称，摇匀即得；平行制备6 份；测定：取对比溶液连续顶空进样5 次，对比溶液连续顶空进样 2 次，各供试品溶液顶空进样 1 次，

23、记录色谱图；中间精密度7.4.7.2.1目的：测定在同一试验室下的变异：不同时间，不同试验者测试结果的重现程度；溶液配制：对比贮备溶液： 精密称取甲醇 30mg、丙酮 50mg置于已加入 20mlDMAC 的 50ml 量瓶中， 用DMAC 稀释至刻度并摇匀，即得；对比贮备溶液：精密称取甲醇 30mg、丙酮 50mg置于已加入 20mlDMAC 的 50ml 量瓶中， 用 DMAC 稀释至刻度并摇匀，即得；对比溶液：精密量取对比贮备溶液 5ml 置 50ml 量瓶中，以 DMAC 稀释至刻度，摇匀， 即得；取 5ml 置于 20ml 顶空瓶中，密封；对比溶液：精密量取对比贮备溶液 5ml 置

24、50ml 量瓶中，以 DMAC 稀释至刻度，摇匀，即得；取 5ml 置于 20ml 顶空瓶中，密封；供试品溶液：精密称取本品，置20ml 顶空瓶中，精密加入DMAC5ml ，密封，超声使其分散匀称，摇匀，平行配制 6 份；测定：取对比溶液连续顶空进样6 次，记录色谱图；可接受标准：重复性与中间精密度各6 份供试品测得的结果 RSD 均不得大于 10.0%，共计 12份结果的 RSD 不得大于 15%；见表 10表 10精密度试验结果测定次数甲醇测试结果 %丙酮测试结果 %重复性中间精密度重复性中间精密度123456平均值 %RSD%12 份平均值12 份 RSD %结论试验人 / 日期复核人

25、/ 日期耐用性7.4.8.1目的：验证在测定条件有微小变动时，测定结果不受影响的承担程度；溶液配制：对比贮备溶液： 精密称取甲醇 60mg、丙酮 10mg置于已加入 20mlDMAC 的 100ml 量瓶中， 用 DMAC 稀释至刻度并摇匀，对比溶液：精密量取对比贮备溶液10ml 置 100ml 量瓶中，以 DMAC 稀释至刻度，摇匀， 即得；取 5ml 置于 20ml 顶空瓶中，密封；测定 5%，其他条件不变；取对比溶液顶空进样6 次，记录色谱图；原载气流速： 2.98ml/min，转变后载气流速： 12.83ml/min ，2ml/min 2%，其他条件不变；取对比溶液顶空进样6 次，记录

26、色谱图；原初始柱温： 50，转变后初始柱温： 149， 251顶空瓶平稳温度 2%，其他条件不变；取对比溶液顶空进样6 次，记录色谱图；原顶空瓶平稳温度： 80，转变后顶空瓶平稳温度：178， 2827.4.8.4可接受标准：各项转变测试结果均应满意系统适用性要求；.对比溶液连续 6 次进样所得图谱中目标峰峰面积 RSD10%；. 理论塔板数 2000；. 别离度试验结果见表 11表 11 耐用性试验结果色谱条件峰面积理论塔板数别离度 甲醇RSD丙酮RSD甲醇丙酮甲醇丙酮载气2.83ml/min流速ml/min49柱温5178平稳温度82结论试验人 / 日期复核人 / 日期8、偏差/变更处理验

27、证过程中假如显现偏差和变更，应立刻通知验证小组并对偏差和变更进行具体记录， 分析偏差产生的根本缘由、进行影响分析并提出解决方法；全部偏差和变更得到有效处理后， 验证方可进入下一步骤；原始的偏差处理单和变更处理单经过批准后必需附在最终的验证报 告中；9、拟定 .再验证周期发生以下情形之一时，需进行再验证原辅料来源、生产工艺发生转变，必需再验证；9.2 检查方法发生转变，必需再验证；10、验证结果评判与结论10.1 验证小组依据验证结果进行综合评判，做出确认是否符合要求的结论；10.2 验证结果的评判至少应包括：验证过程是否产生变更和偏差，是否得到解决和批准； 验证是否有遗漏？确认记录是否完整？验证过程中方案有无修改？修改缘由、依据以及是否经过批准？验证结果是否符合标准要求？偏差及对偏差的说明是否合理？是否需要进一步补充试验？