2022年实验七-氨基酸的分离鉴定.docx

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1、精品学习资源试验七 氨基酸的别离鉴定纸层析法一、目的通过氨基酸的别离，学习纸层析法的基本原理及操作方法；二、原理纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的安排层析法，它是利用不同的氨基酸在展层溶剂中的安排系数不同而得以别离的一种方法；惰性支持物是新华一号滤纸， 其上含有许多的羟基， 与水有较强的亲和力因此把它看成是含有静止水相的惰性支持物； 水相因此称为静止相固定相 ，有机溶剂称为流淌相；展层溶剂由两个互不相溶的有机溶剂和水组成， 它们相互混合时便分成两相： 一相是以水饱和了的有机相， 另一相是以有机溶剂饱和了的水相；安排系数 溶质在固定相的浓度 / 溶质在流淌相的浓度；当用滤纸进行安排层析时， 流淌相

2、流经支持物时与固定相之间连续抽提，使氨基酸在两相之间不断安排而得以别离；不同的氨基酸在肯定的条件下，有其肯定的Rf 值，故可依据 Rf 值定性鉴定氨基酸，但通常用已知的标准氨基酸层析作对比，本试验就是如此；纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的安排层析法；层析溶剂由有机溶剂和水组成欢迎下载精品学习资源物质被别离后在纸层析图谱上的位置是用Rf 值比移值来表示的：Rf= 原点到层析点中心的距离 / 原点到溶剂前沿的距离在肯定的条件下某种物质的Rf 值是常数； Rf 值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统；层析滤纸的质量和层析温度等因 素有关；本试验利用纸层析法别离氨基酸；三、材料与方法1、材料： 层析缸；

3、 毛细管； 喷雾器； 培育皿； 层析滤纸； 正丁醇；冰醋酸；分液漏斗；烧杯；培育皿；赖氨酸；脯氨酸； 氨酸；苯丙氨酸；亮氨酸；茚三酮2操作步骤1. 配置层析液置于密闭的层析缸中；2. 预备滤纸：取层析滤纸一张；在纸的一端距边缘2cm 处用铅笔划始终线， 在直线上每间隔 2cm做一记号，标出 5 个原点；3. 点样：用毛细管将各氨基酸样品点在5 个原点上，用量10 20 l ，每点在纸上扩散的直径，最大不超过3 mm，边点样边用电吹风吹干，越小越好；干后再点一次；4. 扩展用线将滤纸缝成筒状，纸的两边不能接触；将盛有约 20 mL扩展剂的培育皿快速置于密闭的层析缸中，并将滤纸直立于培育皿中 点样

4、的一端在下，扩展剂的液面需低于点样线 1 cm ；待溶剂上升 15 20 cm 时即取出滤纸，铅笔描出溶剂前沿界线，自然干燥或用吹风机热风吹干；欢迎下载精品学习资源5. 显色用喷雾器匀称喷上0；1茚三酮正丁醇溶液， 然后置烘箱中烘烤 5 分钟 100 或用热风吹干即可显出各层析斑点；6. 运算各种氨基酸的 Rf 值；四、结果与分析样品上上升度cmRf 值层析液7.23赖氨酸1.880.24脯氨酸2.930.43亮氨酸4.320.62缬氨酸3.750.51苯丙氨酸0.59混合氨基酸1.85 、2.63、3.880.34 、0.47 、0.61表 1在显色反应中， 脯氨酸与茚三酮反应产生黄色物质，

5、其余皆为紫色，由于脯氨酸为亚氨基酸，与茚三酮反应并不释放氨气，而直接产生黄色物质；混合氨基酸肯定有赖氨酸和脯氨酸， 可能有缬氨酸和苯丙氨欢迎下载精品学习资源酸，由于脯氨酸与茚三酮反应生成黄色物质，赖氨酸、亮氨酸、缬氨酸和苯丙氨酸与茚三酮反应生成紫色物质；五、争论与结论本试验的关键是层析液的制备， 点样点要小；由于层析时间较短， 混合氨基酸没有完全分开，所以本次试验失败；六、摸索题1. 何为纸层析法？答：纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的安排层析法；2. 何谓 Rf 值？影响 Rf 的主要因素是什么？答：1氨基酸被别离后在纸层析图谱上的位置是用Rf 值 比移 来表示的： Rf=原点到层析中心的距离

6、/原点到溶剂前沿的距离；2在肯定的条件下某种物质的Rf 值是常数； Rf 值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因 素有关；3. 怎样制备扩展剂？答：扩展剂800-1000mL 是 4 份水饱和的正丁醇和1 份醋酸的混合物；将 20mL正丁醇和 5mL冰醋酸放人分液漏斗中，与15mL 水混合，充分振荡，静置后分层放出下层水层；取漏斗内欢迎下载精品学习资源的扩展剂约 5mL置于小烧杯中做平稳溶剂， 其余的倒人培育皿中备用；4. 层析缸中平稳溶剂的作用是什么？答：1防止或削减边缘效应的显现 . 所谓边缘效应 , 是指并列点样的同一物质经薄层绽开后薄板边缘处的比移值比中间的

7、要大的现象；2平稳剂起到使纸层析上吸附的溶剂到达饱和；是物质在绽开剂和纸层析上吸附的溶剂中溶解度不同而进行别离；七、参考文献1、 牛文琪 张庆国 汪宏喜吴 坚.氨基酸的别离与分析 试验教学设计 J.中国电力训练 . 2021,16:127-1282、 黎景丽， 文一彪 .对氨基酸的别离及其显色的争论J.中国调味品 . 2002,2:8-123、 翁连进， 王士斌， 蔡晓.混合氨基酸的别离技 J.化工进展. 2000,192:51-534、 营爱玲， 王建， 王晓琳 .纳滤膜对氨基酸的别离争论 D.北京科技高校学报 . 2004,266:642-6475、 马立周 .生物转化制备 L- 丝氨酸的

8、争论 D.江南高校硕士学位论文 ,20216、 付勇.苏氨酸母液中氨基酸的别离欢迎下载精品学习资源7、 吴国华，林山杉，王为民 .味精废液中碱性氨基酸的别离J.发酵科技通讯 . 2021,383:6-98、 王立华，王永利，吴江.养液中多种氨基酸的别离与测定J.中国农学通报 . 2021,2513:26-329、 杨晓玲，赵宗云，刘永军 .用纸层析别离鉴定氨基酸方法的改良 J.植物生理学通讯 . 2002,384:368-39010、 杨丽， 尤丽， 叶金秀等 .纸层析别离鉴定氨基酸试验的 改 良 J.云 南 民 族 大 学 学 报 自 然 科 学 版 . 2021,203:230-232欢迎下载