2022年生物材料重点总结.docx

《2022年生物材料重点总结.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《2022年生物材料重点总结.docx（9页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、生物材料检验： 分析检验生物材料中化学物质及其代谢物的含量或因化学物质引起的生物效应指标变化；生物材料：是人体体液（如血液） 、排泄物（如呼吸气、尿液） 、毛发,指甲以及组织脏器等 的总称；生物标志物： 指生物系统接触外源性物质后显现的一种变化；分为三类： 接触性生物标志物、效应性生物标志物,敏锐性生物标志物；生物接触限值（BEL）：大体相当于健康人吸入接触最高答应浓度的毒物时生物材料中被测物 的水平；尿液可分为全日尿,晨尿,定时尿和随时尿；生物半减期：指进入生物体内的化学物质的里量通过各种途径排除一半所需要的时间,又代谢半减期；一、检验方法的一般要求：1. 方法的一般要求1）灵敏度挑选符合生

2、物监 测的基本要求2）操作简便3）试剂易 得、价廉4）效率高5） 符合国情,易推行、推广2挑选和建立生物检测方法必需考虑的因素：1） 被测成分溶解性,稳固性 含量水平高 g/L水平低ug/L二 、方法研制准就的基本内容1取样、运输、储存的原就1 ）取样： （ 1）容器工具材质不干扰测定（2）取样的操作要防止污染（ 3）取 样时间依据半减期判定打算（4）取样的体积尿液=50ml静脉血 =5ml末梢血 500ul2储存时间：一天,三天,一周,两周一般只要求两周3）运输过程：保证分析 物稳固,必要时要冷藏和冷冻运输4）防腐剂（尿）和抗凝剂（血）2. 样品预处理原就1 ）尿液浓度按比重校正尿标准比重

3、1.020 ,1.030 及=75%3. 制定分析方法的程序1 ）分析条件挑选、优化2）确定检出限（ 1）影响检出限的因素：试剂的纯度,仪器的工作状态,电源稳固性光源的温度变化、污染等不行掌握的因素； （2）检出限的确定一般用统计法, 一般用空白 值的 3 倍标准差运算； 色谱法用 3 倍噪音水平,检出限应小于 0.3 倍生物接触限值；（3）检出限的表 示 方 法浓 度 或绝 对 量 表 示 , 用浓 度 表 示 时 要 说明 方 法 取 样 体积；3）精密度：同一个人用同一方法重复测定同一匀称 样品测定结果的符合程度通常在线性范畴内取高、中、低三个浓度水平分别重复测定 35 次；用 RSD表

4、示或用变异系数表示复杂方法 RSD=20 简洁方法=75% 如105% 说明存在明显的系统误差； （3）用标准方法或权威方法比较：两个方法均值相对误差应小于10%t 检验在确定一个置信水平条件,两方法测定无明显差异5）干扰试验： 假如有干扰,要找出排除干扰的方法6）样品的稳固性试验：时间：当天, 3 天,1 周,2 周温度：室温,一般冰 箱冷藏（ 4）,冷冻储存（ -8 ）, 低温冰箱（ -20 ）4. 方法的验证1）新方法的验证：必需是 另一单位研制方供应方法全部技术材料验证内容：四项线性范畴, 精密度,精确度,样品的稳固性；2）引进国外标准方法或权威方法,引进方就是验证方；5. 现场应用第

5、一要观看检出率观看检测结果与环境污染的符合程度同时取 非接触样品进行对比三、确定生物监测指标的依据（一）化学物质在体内的动力学过程1. 吸取1） 呼吸道吸取气体物质通过肺泡壁及四周毛细血管吸取固体物质,溶解时吸取的前提2）皮肤有些有机物很简洁被皮肤吸 收 F=C/15*0.038-0.153pexp-0.016MNF 皮肤吸取量mg/ 2/hC 化学物质在水中的饱和度 mg/mlP 辛醇- 水的安排系数MN 相 对 分 子 质 量 许 多 农 药 易 被 皮 肤 吸 收如 有 机磷2. 体内分压和贮存1）起始主要分布于血液中最终分 布取决亲和力2）血液侧得 量是反映新近吸取量或机体组织的水平3

6、） 血液中毒物或其他被测物并非匀称分布4）一般脂溶性溶剂及卤代烃会 分布在脂肪组织中,乳汁是检测有机氯农药最好的样品5）体内储存毒物的形式大多为结合状态,测定尿液中的代谢物需要先水解3.生物转化1）概念：外源性化合物在体内经过一系列化学变化并形成其衍生物以及分解产物的过程；2）有关生物转化的争论是毒物发生质的变 化生物转化的数量关系, 个体差异很大是一种动态过程, 对时间的明白是确定采样时间的基础,生物半衰期；4. 排出易挥发性有机溶剂从 呼吸气中排出较多； 长期蓄积的有机氯农药可从乳汁中排出及嘱咐中排出,易代谢的有机毒物大多以结合态从尿中排出；（二）、个体差异1 、毒物在生物体内的动力学过程

7、有种属家族和个体的差异,其中生物转化过程变异极大；2、生物监测的个体差异可用监测结果的变异系数表示；3 、个体差异降低了生物监测的精确性,却可帮忙检出特别敏锐人群或耐受人群；（三）、接触水平（剂量）效应（反应）关系1 、 是确定一次生物监测指标的关键依据；2 、 生物监测结果与空气毒物浓度之间的相关资料,可作为挑选生物监 测指标的替代依据；四、检验指标的挑选与分类（一）、挑选的基本要 求1、特异性好； 2、具有良好的剂量效应关系； 3、稳固性好； 4、有精确牢靠的检验方法；（二）、生物材料检验指标的分类1、化学物质原形：化学物质在生物体内不进行生物转化或转化速度很慢；缺乏毒物代谢动 力学资料；

8、代谢产物在体内没有特异性2、化学物质代谢产物3、生物效应指标；五、样品的采集与储存一）、生物材料样品的挑选（一）、种类及特点尿液:最常用的1）特点：采集便利、无损耗性、采 集量大2）适用性：水溶性化 学物质、代谢产物、金属等3）尿样的种类：（1）全日尿（24h 尿）收集 24h 内的全部尿液, 通常只用于住院病人 （2）晨尿 起床后、早餐前第一次排出的尿（ 3）定时尿：生物半减期班前尿：第 2 个工作日上班前以内排出的尿班中尿：上班 23h 以后排出的尿 班末尿： 下班前 1h 内排的尿班后尿： 下班以后 1h 以内排出的尿 周末尿：连续工作第五个工作日的班末尿；血液1）特点：成分较恒定个体差

9、异小取样污染机会小 损耗性采集样品 血样贮存条件要求较高； 2）种类：血清：不抗凝离心分别出的上层清夜 血浆： 加抗凝剂离心分别的上层清夜 全血 红细胞； 呼出气 1）特点优点：操作便利、干扰物少,非损耗性缺点： a、被测物的含量比较低b、肺泡气中水分对某些测定有影响c、肺部“死腔”中环境空气对肺泡气稀释不稳固,影响测定结果的说明；2）适用性监测仅限于挥发性物质主要用于测定化学物质原形呼出气监测结果能反映采样期间车间空气的平均浓度；3）呼出气的分类混合呼出气、 终末呼出气（肺泡气）第一阶段呼出的是空气,其次阶段混合呼出气,第三阶段肺 泡气；（二）、生物材料样品的挑选1、同一毒物或代谢产物在 不

10、同生物材料其生物学意义不一样, 血镉代表近期接触水平、 尿镉反映长期接触的浓度；2、挑选生物材料样品种类的要求： 被测物有特异性 与外剂量有相关性有足够的稳固测定结果重复性好, 个体差异在答应范畴内 采样能被受试者接受；3、尿、血、呼出气是目前较抱负 的生物材料样品,美国 BEI55 个尿 58%、血 27%、呼出气 14%；二）、样品采集、运输及储存 （一）、一般要求1、采样时间：依据生物半减期；2、采样环境：无污染；3 、采样容器：测无机成分、塑料、高压聚合玻璃：硬质、石英不锈钢含 Cr、Ni 、Mn（不能用于测此三种元素）使用前要求用酸液（稀 HNO）3 浸泡 24h 洗涤；测有机物玻璃

11、、塑料（不能用橡胶和添加染料的橡胶）冷冻储存不能用玻璃仪器；4、样品的运输与保 存；5 、采样记录编号检验项目受试者信息采样信息：时间、地点、环境、过程；采样人及记录人信息（二）样品采集与储存1、尿样1 ）尿样的校正：1 比重校正法标准比重 1.020校正公式 C 校正=（1.020-1.000 ）/（ d-1.000*c=kcd 的使用范畴 1.010 1.0302肌酐校正法 . 尿中被测物浓度 （ mg/g 肌酐）=实测浓度（ mg/L）/ 肌酐浓度（g/L ）,肌酐含量2 采样.采集尿液不少于 50ml,用顶空分析法测定挥发 性物质时 . 收集尿样的容器要布满尿样并知道体积,记录 2 人

12、上次排光膀胱的时间及采集样的终点时间；3 储存. 贮存一般 2 周.反腐 加酸. 氯仿. 冷藏 测尿中汞或挥发性有机物要尽快测定要储存 5 天以上的,最好冷冻 2、血样1 ）采集（1）、全血；要抗凝（2）、血清（血浆）或红细胞2 留意事项采集过程防止污染 . 毛细管血防止溶血. 金属针头（取下） 再挤出针管时不能太快取末梢血要防止挤压采集部位, 自然流出弃去第一滴血有三种情形不宜采集毛细管血 a 血液量超过 5ml.b 采集环境有外源性化学物质存在c 测定挥发性成分3 血样的运输与储存防止振动和温度的转变血样冷冻确定溶血采集血清或血浆时, 应分别再储存 暂时存放 4过夜, 长时间储存要冷冻 测

13、酶活性要采集后尽快分析 3. 呼出气. 1）采集方法： 先深呼吸 23 次,再复原正常呼吸时采集呼出气 采集肺泡气只收集末端呼出气 2 ）留意事项： 受检者必需时肺功能正常者 要挑选对被测物吸附小的容器 要在正常呼吸状态下收集样品呼出过程不能有阻力 采样的时机要依被测物代谢 速度打算 三、生物材料样品的预处理原就 （一）无机物分析的样品处 理 1 、稀释法 . 1 ）. 常用的稀释剂 ;1 稀硝酸液（尿）,2）TntonX 100 表面 活 性 剂 3 ） 基 体 改 进 剂 溶 液 2 ） . 常 用 机 体 改 进 剂 ： 硝 酸 盐（ NH4+ Ni2+Ca2+）磷酸盐（ Na+NH4+

14、）3）. 应用实例:磷酸铵,硝酸铵和 TritonX-100可改善血清中铜锌的测定磷酸氢胺,硝酸铵测定血铅可提高灰化温度至1000硝酸镍可使测定砷和Se 的灰化温度到1000磷酸铵可使测定 Cd 的灰化温度增至 8002 、酸提取法1.硝酸提取,测定血铅 .6mol/L硝酸离心取上清液；标准物质被测成分的含量是已知的 2,盐酸提取 3,三氯乙酸（固体）；铁（有效） 提取+2 价铁 3、 矿物化法（无机法处理）（二）有机物分析的样品处理（p11）第五节铅一、接触途径：铅矿,开采,冶炼 二、代谢物和生物监测指标（一）动力学过程 .1 、吸取1）呼吸道：铅尘烟蒸汽2 消化道：铅尘3）皮肤,无机物不吸

15、取有机铅化合物可被吸取（四乙基铅）2 、分析：起始分布在血中有95%与红细胞结合最终主要以磷酸盐沉积于管中,其次 是肝肾脑等3 、生物效应：抑制血红蛋白的合成1 ）抑制 5氨基乙酰丙酸脱水酶,导致血尿中 -ALA 增加 2）抑制粪川啉元氧化酶3 ）抑制亚铁螯合酶4 、排除：吸取的铅主要经尿排出,尿铅生物半减期较长；（二）铅接触的 生 物 监 测 指 标1 、 血 铅 ： 直 接 反 映 近 期 接 触 铅 的 情形2、尿铅：反应机体中铅的负荷量,是铅中毒的帮助诊断指标3、生物效应指标： 1）尿中 ALA2）血中铅原卟啉三、样品的采集与储存用于尿铅血铅的测定1. 尿样.采样时间的限定立刻采集一次

16、尿样按 1%比例加HNO3, 4可储存两 周；2. 血样.1）末梢血 40L2）静脉血四、尿铅和血铅的测定石墨炉原子吸取法（一）尿铅的测定1 、原理：尿样用基体改进剂液稀释后直接进行测定,基体改进剂液NH4H2PO4抗+坏血酸2、石 墨 炉 升 温 程 序 适 用 涂 铜 石 墨 管 干 燥 70 ,40S 灰化 450,30S原子化2000 5S（停气）清除2200 3S3、石墨管涂钼处理,向石墨管中加20 L 钼酸铵液,石墨炉升温程序并重复10 次升温,石墨管内壁呈灰白色4、标准系列液配置铅标准系列液基体改进剂液（混合液）正常人混合尿：没有接触铅的健康人的尿,取 2 份,一份比重小于 1.

17、020 ,一份比重大于 1.020 ,混合 成比重为 1.020 的尿液5 、说明 ： 1）基体改进剂液的作用：本法选用 4%磷酸二氢铵 -6%抗坏血酸作为基体改进剂,能有效地克服基体干扰2 ）背景吸取的扣除背景校正器扣除背景吸取, 氘灯背景校正石墨管涂钼可降低背景吸取（二）血铅的测定1 、样品处理：全血用 TritonX-100液稀释,稀 HNO3酸化,进样测定2、石墨炉升温程序 :干燥：75-100 ,10S（斜坡升温）灰化 450-500 30S保 持 10S（斜坡）原子化24007S清除25003S3、标准系列液： 铅标准液 TritonX-100液正常人血五、生化指标的测定（一） 尿

18、中 ALA的测定1、原理： ALA可与乙酰乙酸乙酯缩合生成吡咯化合物用乙酸乙酯萃取吡咯化合物显色, 加对一二甲氨基苯甲酸生成红色化合物 max=554nm2、操作要点：两份经稀释尿样 加 PH=6缓冲液样品管加乙酰乙酸乙酯尿样空白管补充缓冲液各沸水浴 10min各加 4mL乙酸乙酯萃取 离心、静置、分层取清夜显色 10min 后测定（二）全血中游离原 卟啉的测定1、原理：用乙酸 - 乙酸乙酯破坏红细胞盐酸萃取原卟啉,测定荧光强度2、样品处理：1）样品： 20L 血+0.1mL 生理盐水2）加硅藻土悬浮液, 乙酸乙酯乙酸液、 振摇、破坏红细胞3）离心, 取上清液加盐酸萃取第三节、镉一、接触途径：

19、锌矿的开采及冶炼工业上含镉材料的生产农业上也有镉化合物的应用二、代谢和生物监测 指标（一）代谢 1. 吸取、呼吸道和消化道 2. 生物效应急性中毒靶器官： 肺慢性中毒靶器官：肺、肾、骨3. 排出少量由尿排出,属于蓄积性元素（二）生物监测指标1、尿镉：只反映长期接触情形2 血镉：只反映近期接触情形三、镉接触指标的测定石墨炉原子吸取法（一）尿镉的测 定1 、原理：用磷酸氢二铵液稀释, 直接标准曲线法定量2、石 墨 炉 升 温 顺 序1 ） 干 燥0100 30S （ 斜 坡 ）2 ） 灰化10020020S（斜坡）40010S（阶梯）3）原子化18005S4）清除20003S3、标准系列液：镉标准

20、液空白尿液基体改进剂液1%NH3（二）血镉测定1 、原理：血样加稀 HNO3离心,取上清液测定,标准曲线法定量2、标准系列液镉血标准液：抗凝小牛全血 +镉标准液4%HNO3第七节：汞一、接触机会矿的开采与冶炼 电器和外表制造化学工业二、代谢和生物监测指标（一） 动力学过程1. 吸取主要是呼吸道2. 分布 无机汞主要是肾、 其次肝、脑 有机汞主要 是脑 其次肝、胃 3. 排出 尿汞 生物半减期 23 个月（二） 生物监测指标1. 血汞：反映近期接触无机汞的量2. 尿汞：用于诊断汞中毒观看驱汞 疗效三、样品采集、储存1. 尿样：随机取一次尿样加碱 NaOH 使浓度达到 40g/L ,4可储存 2

21、周2. 血 样 周末血抗凝4可以储存数天四、尿汞的测定冷原子吸取法（一）碱性氯化亚锡仍原 法1. 原理：在碱性条件及有 Cd+ 存在条件下,高浓度的 SnCl2 将有机汞及 无机汞仍原成元素,用测氯仪测定2. 标准系列液的配置汞标准液基体尿液正常人混合尿NaOH液 DL-半胱氨酸3. 测定将上述标准系 列液加 1 滴磷酸三酯,加 SnCl2-CdSO4液立刻通入空气测定（载气）4. 说明：磷酸三酯消泡 Cd2+催化作用 DL-半胱氨酸起稳固剂的作用,防止无机汞吸附挥发； 仍可使有机汞不分解测定读数： 读取最大吸光度值（二）酸性 SnCl2 仍原法1. 原理：用 KMnO4和浓 H2SO4分解尿

22、样,使汞都转化成 Hg2+,用 SnCl2 仍原成 Hg,吹空气导入测汞仪2. 测定： 尿液和标准系列液同样用 KMnO4和浓 H2SO4分解3. 说明：1）KMnO4和浓 H2SO4加入的次序：先加 KMnO4液再加浓 H2SO42）测定前先对气路系统进行净化； 加 SnCl2（酸性）测定空白水、吹气观看到仪器的响应值为零为止每次测定都使响应值为 0 再测其次份第三章：非金属化合物及其代谢产物第一节： CO一、代谢及生物监测指标1. 吸取： 呼吸道2. 生物效应： 进入机体 与 血 红 蛋白 结 合 形 成 碳 氧血 红 蛋 白 （ HbCO） 形式 导 致 机 体 组 织缺O2HbCOHb

23、CO3. 分布：血液中 HbCO形式4. 排出呼出气约有 1%被氧化成CO25. 生物监测指标1）血中碳氧血红蛋白2）呼出气中 CO三、样品的采集与储存1.呼出气： 1）采集班中（ 3h 后） 或班末呼出气2）收集终末呼出气2.血液： 1）采集班中（ 3h 后）或接触最高浓度时的血2）抗凝3）密闭储存4 11 周 4）最好取静脉血5）受试者不抽烟四、血中碳氧血红蛋白的测定分光光度法1 、原理： 1）血中血红蛋白的四种成分： Hb、HbO2、HbCO、HbMet2 ）HbCO,HbMet3 2 2 NaO SHb3）测定 Hb 和 HbCO吸光度,最大吸 收波长分别为 432nm 和 420nm

24、2 、测定方法：1 ）摩尔吸光系数的测定：用吸光系数代替（1）过饱和 HbO2液的制备, 血样用水和 Tris液适量稀释通入O230min（ 2）饱和 HbO2液的制备： 取（1）中 2 份通入 N2（3）饱和 HbCO 液制备取（ 1）中 2 份,通入 CO 10min（ 4） HbCO和 Hb 液制备在（ 2） 和（3）的溶液中加 Na2S2O4固体Hb2）（HbCOHb,3）（5）分别测定 420nm和 430nm吸光度作为吸光常数（有四个值）2 ）血样测定HbCO HO SNab4 2 2稀释血样分别测 420nm和 430nm的吸光度3 运算： 31KAK AKA-KA%43042

25、4204 4202430KK）碳氧血红蛋白（A420 ：血样在 420nm吸光度；A430 血样在 430nm吸光度K1、K2 是HbCO在 420nm、430nm的吸光常数K3、K4 是 Hb在 420nm、430nm的吸光常数4.留意事项：（1）所用氮气和氧气应为高纯度氮和高纯度氧,不纯氮和氧 气中含微量的CO,能干扰测定结果（ 2）连二亚硫酸钠遇水易分解,在空气中简洁被氧化失效, 应以小瓶分装使用, 防止接触空气和水分（3） 测定吸光系数必需采纳新奇血液, 一次测定值在仪器波长稳固的情形下可以使用一段时间,但仍应定期核检；（ 4）测试液应尽量防止接触空气,准时测定, 否 就 会 造 成

26、结 果 偏 低第 二 节CS2二 、 代 谢 及 生 物 监 测 指标（一）代谢1 、吸取：呼吸道、皮肤2 、生物转化1）吸取后约 7090%转化为多种代谢产物2 ）目前,接触者中 尿中已确认的有 3 种：TTCA、2- 巯基-2- 噻唑啉酮 -5 ,硫脲（其中 TTCA争论较少,生减期为 2h）3 ）排出： a. 代谢产物随尿排出b. 约 2030%以原形从呼吸道 排出c. 约 1%以原形从尿中排出（二）生物监测指标1 、尿中 TTCA：班末尿 2、呼出气中 CS2,目前争论较少三、样品采集与储存四、尿中 TTCA 的测定 HPLC法 1、样品的处理： A、取离心后的尿样B、稀 HCL酸化：

27、乙醚提取C、离心分层, 去上层醚液于试管中D、40用 N2 吹干加 20ul 甲醇定容2 、说明： A、尿样经离心后取上层尿液,易于分别B、此法从国外引进,将原先的梯度洗脱改为等度洗脱； 国外的梯度洗脱是用两种配比的流淌相切换洗脱C、TTCA 纯品需自己纯化五、呼出气中 CS2 测定（一） GC 法1、样品处理：（1）、呼出气中 CS2浓度在测定范畴内不需要处理,直 接进样（ 2）、呼出气中 CS2低于测定浓度范畴需富集,用 TenronGC管富集2、色谱条件：固定相： OV-17；检测器：火焰光度检测器3、说明：（1）采集终末呼出气,最终呼出的100ml（ 2） TenronGC管： 2,6

28、- 二苯基对苯醚的多孔聚合物, 用于捕集 / 热解吸 （ 3）富集测定要求做富集空白测定：用 180ml 气体（冲洗气）注入空白 Tenron GC 管中,热解吸后测定 （二）检气管法：快速检测法 1、依据检气管中形成色 带长度,粗略估量浓度 2、特点：操作简洁、快速、成本低、精度差, 相 对 偏 差 达 20%-30%以 上 第 四 章 芳 香 烃 及 其 代 谢 产 物 第 一节 苯 一、代谢及生物监测指标 1、吸取：主要是呼吸道,其次 是皮肤 2、代谢与排泄 1 ）吸入的苯约 50%以上以原形从肺中排出, 约 10%以原形储存在有机组织中 2 ）约 40%进入血液循环,在肝中代谢,代谢

29、产物 50%-70%的苯酚, 6%为间苯二酚, 2%为对苯二酚,仍有极少量的粘糖酸等都 以结合态从尿中排出 3）有极少量的苯以原形从尿中排出 3、生物检测指标： 1 ）尿酚 A、因正常人尿中很有酚且个体差异大 B、尿酚不是特异性指标 C、仅用于群检 2 ）呼出气中的苯：在测定尿酚以后,测定呼出气中苯作为确认试验3）尿苯：1993 年有人提出用尿苯作苯接触的生物接触指标,目 前 , 仍 没纳 入 生 物 监 测 指标二 、 呼 出 气中 苯 的 测 定 GC 法（一）原理：用塑料袋或采样管收集呼出气,呼出气用N2 吹入活性炭管吸附（ -78 ） 280热解吸,用载气（ N2）导入色谱仪, FID

30、 检验,通过六通阀切换完成（二）苯标准气的配制： 注入 20ul 苯于 100ml 玻璃配气瓶中,临用时从中抽取肯定体积注入另一配气瓶中稀释成20ng/ml的苯标准气（三）测定： 1）取苯标准气（ 0.5 、1.0 、2.0ul）和样品分别注入呼吸气的采样管中2）将采集管 37 摄氏度恒温 2h3）一端与六通阀连接,一端接 N24）吹入冷阱（ -78 ）中的活性炭管5）热解吸导入色谱仪三、尿酚的测定 GC法1、原理：尿样加盐酸加热（ 90 水 浴） 水解 , 再用 乙醚 萃取 苯酚2 、 尿 样采 集与 储存 ： 班 末尿50ml42 周3、样品处理与测定：1） 5.0ml尿样, 1ml 浓盐

31、酸于具塞试管中, 90水浴 1h2）、用 3.0ml 乙醚振摇萃取3）取上层醚液注入GC 仪4 、标准曲线：苯酚标准系列液用3ml 乙醚提取4 、 色 谱条 件（ 1 ） 液 晶柱 分 离分 离苯 酚和 邻间 对 甲酚；（2）FFAP柱,分别苯酚和对甲酚5、说明：（1） 3ml乙 醚 萃 取 要 避 免 乙 醚 挥 发 , 分 层 后 不 是3ml , 加 乙 醚 补 至3ml（ 2 ） 可 用 内标 志法 定量四 、 甲 苯、 二甲苯（一）代谢及生物监测指标1 ）代谢1 甲苯约15%25%以原型呼出约 1%从尿中排出约 80%代谢甲苯 O 苯甲酸马尿酸马尿酸排出的半减期为 23 人；2 二甲

32、苯约 5%原形从肺中呼出 60%80%生物转化主要终产物是甲基马尿酸2 ）生物监测指标1甲苯尿中马尿酸非特异性对群体判定有肯定的定义呼出气体中甲苯作为确认2 二甲苯：尿中马尿酸正常人尿中无甲基马尿酸 特异性指标（二）、尿中马尿酸的测定比色法（ 喹啉苯磺酰氯比色法）（ 1）原理（ 2）样品采集两天后班末尿, 按 100+1 体积比加氯仿（ 3）样品处理与测定（ 4）留意事项：1、试剂加入顺序不能颠倒2、日光对显色有破坏作用要避光放置（加入苯磺酰氯后）第四节乙苯一、代谢及生物监测指标（一） 代谢与排 泄 1 、只有 少部分 以原形从呼 吸道排出；2、70%以上代谢后随尿排出, 主要代谢产物为扁桃酸

33、60%苯酰甲酸 25%（二）监测指标： 1、呼出气体中乙苯2、尿中扁桃酸（非特异性）二、生物监测方法： 1、呼出气体中乙苯的测定GC法与呼出气中笨的测定类似2、尿中扁桃酸的测定HPLC法内标法定量内标物4- 羟基苯甲酸第五章芳香族硝基和氨基化合物第一节苯胺一、代谢和生物监测指标1 、吸取：主要通过呼吸道吸取,很简洁经皮肤吸取2、代谢主要代谢途径：苯胺苯基羟胺对氨基酚接触 24h 后,有 1560%转化为对氨基酚、以结合态随尿排出3、生物监测指标： 尿中对氨基酚正常人尿中含微量对氨基酚平均3.7mg/L二、尿中对氨基酚的测定（一）盐酸萘乙二胺分光光度法 1 、原理：尿中对氨基酚经水解；萃取分别

34、重氮化偶合显色；重氮化试剂：亚硝酸盐 偶和显色剂：盐酸萘乙二胺 2、操作要点 1 样品处理： 盐酸酸化沸水浴水解约 1 人 萃取先用 NaOH调中性, 用乙酸乙酯萃取,再用盐酸溶液反萃取；2 重氮化偶合反映 重氮化,酸性条件下加过量的亚硝酸盐、反应 10min除过量 的 NaNO2 液 加 氨 基 磺 酸 胺 溶 液 至 无 色 气 泡 产 生 止 放10min偶合反应显色：加盐酸萘乙二胺生成紫红色3 比色定量580nm尿空白管作参比,标准曲线法定量3、说明： 1 尿样应采集班末或班后尿,采样前要询问受检者是否服用药物2 重氮化反应, NaNO2过量才能完全重氮化 但 NaNO2对偶和显色有干

35、扰3 重氮化反应应在尽量低温条件下进行,而偶合反应在60为宜,水浴加热前,偶合剂加入后充分混合 （二） HPLC 法 1 样品处理： 1 水解,同上法 2 萃取 先在酸性条件下用乙酸乙酯萃取 再在中 性条件下用乙酸乙酯萃取对氨基酚 两次萃取除杂质 2 、说明： P96 用磷酸氢二钾（ 弱碱 ） 调剂 PH 值其次节： 硝基苯一、 代谢产物和生 物监测指标1 、吸取：很简洁从皮肤吸取,主要从呼吸道吸取；2 、代谢：代谢产物有硝基酚和氨基酚仍有少量苯胺, 对硝基酚 13 16%,对氨基酚 10%； 3、排出：代谢产物与葡萄糖醛酸和硫酸结合, 随尿排出； 少量以原形级微量本案随呼出气排出；4 、生物

36、监测指标尿中对硝基酚（特异性）二、尿中对硝基苯酚的测定P98（一）、邻甲酚分光光度法1 、原理：尿样经酸水解；苯取先用混合有机溶剂取,再用氢氧化铵溶液反萃取；仍原用三氯化钛将其仍原成对氨基酚；邻甲酚显色蓝色 600nm 比色定量；2 、样品处理： 1）水解盐酸酸化沸水浴 1h；2）萃取先用异戊醇 石油醚乙醚萃取,再用 3mol/L 氯水反萃取；3、显色测定先加邻甲酚, 再加三氯化钛溶液；立刻振摇至黄色沉淀变成淡黄色沉淀,过滤30min 后600nm测定吸光度； （二）HPLC法1 、样品处理1）水解同上法；2）萃取 二氯甲烷萃取 3 次定容至 20ml； 2 、说明1）尿液采集后,尽快加盐酸,

37、10oc以下运输； 2）流淌相配比和流速可依据仪器性能调整；第三节：三硝基甲苯TNT2,4,6 三硝基甲苯一. 代谢 1）经氧化仍原化合等途径代谢； 2）以仍原代谢途径为主,主要代谢物4硝基 2,6二硝基甲苯； 3） 各种代谢产物以结合态随尿排出；二. 生物监测指标4 A三.GC 法测定尿中 4A1 、样品处理： 1）盐酸酸化沸水浴 1h；2）萃取代谢加固体碳酸氢钠调 PH78 用甲苯萃取（尿样 1ml,甲苯 1ml） 2. 色谱条件：1）检测器 ECD2）固定相： OV17（固定液）3）柱温 220程序升温成效更好200（0.4min ）10 /min2205/min240第六章：卤代烃化合

38、物及其代谢产物的测定第一节：氯乙烯一、代谢1）经呼吸道吸入大部分以原形从呼吸道中排 出2 ）少部分在肝脏转化先转化成一种致癌活性物环氧氯乙烯在甘光甘肽或 半胱氨酸参加下最终代谢物为亚硫基二乙酸（硫代二乙酸 ）3 ） 少 量 的 氯 乙 烯 以 原 形 随 尿 液 排出二、生物监测指标：尿中硫代氯乙酸,呼出气中氯乙烯很少作为检测指标三 GC法测定尿中硫代氯乙酸（一）原理尿样 经酯 化后 水 蒸气 蒸至 近干 甲 醇 乙 醚溶 解其 中的 硫 代 二乙酸酯化重氮甲烷酯化火焰光度计监测（二） 样品处理：1）1ml 尿液加 0.1mlHCl 酯化2）瓷蒸发皿水蒸气蒸干至结晶状态3）甲醇乙醚溶解残渣,上

39、层夜转入离心管混水浴浓缩至1ml（三）酯化：（通风柜中进行）亚硝基甲脲与氢氧化钠溶 液反应生成重氮甲烷气体导入样液酯化溶液至浅黄色为止,在放置10min,最终用甲醇定容；（四）留意事项？第三节：三氯乙烯和四氯乙烯一、代谢与生物监测指标（一）代谢1. 三 氯 乙 烯1 ） 吸 入 约 20%以 原 形 从 肺 中 排出2）有 50 60% 储存在体内（蓄积性）3）大部分在肝中转化成三氯乙酸和三氯乙醇仍有少量一氯乙酸4）脱离接触 50h 后,尿中三氯乙酸浓度达到最高；2. 四氯乙酸 约 98%经肺排出约 2%代谢转化成三氯乙酸 二 生物监测指标 1. 三氯乙烯：尿中三氯乙酸和三氯乙醇联合作为三氯乙

40、烯接触的生物监测指标呼出空气中三氯乙烯特异性指标2. 四氯乙烯：尿中三氯乙酸 非特异性呼出空气中特异性二、尿中三氯乙酸的测定（一） 顶空GC法1 、原理在密闭顶空瓶中三氯乙酸三氯乙烷抽取顶空 气注 入气 相色 谱 仪 FID检测内标 法定 量内标 物为正丁醇第七章：农药接触指标的测定第一节、有机磷农药二代谢和生物监测指标（一）、毒性效应抑制胆碱酯酶的活性造成乙酰胆碱过量, 导致胆碱能神经过度兴奋,使中枢神经系统紊乱（二）、胆碱酯酶1. 真性胆碱酯酶1 ）指的是乙酰胆碱酯酶和红细胞胆碱酯酶2）主要存在于神经组织和 细胞中3）对乙酰胆碱有很高的特异性4）在血中活性占 80%以上 2、假性胆碱酯酶1

41、 ）指的是血清胆碱酯酶2）存在于血清中3）是非特异性胆碱酯酶 4）在血中活性约 20% （三）生物监测指标：血中胆碱酯酶活性 效应性指标（三全血中胆碱酯酶的活性测定） （ 1）三氯化铁分光光度法 1. 原理：乙酰胆碱 酶 乙酸+胆碱 剩余的乙酰胆碱与羟胺反应 乙酸胆碱 - 2OHOHNH乙酰羟胺 显色 乙酰羟胺 3 FeCl 红色物质 520nm 测定吸光度标准曲线法定量 2、标准系列液乙酰胆碱标准系列液 3、样品处理及测定 1 ）样品处理：将 A、B 两个样品管 37水浴 5min 向 A 管加入乙酰胆碱标液 1ml, 37 水浴中精确反应 30min（每隔10min 振摇一次） 取出 立刻向 A、B 管各加胆碱羟胺液 4ml 再向 B管加乙酰胆碱标液 1ml 2）测定 向 A、B管及标准管各加盐酸（ 1+2） 2ml 加 2ml FeCl3 液振摇过滤 520nm测定吸光度 4 、运算：被水解的乙酰胆碱吸光度 =AB-AA 以此吸光度（差值）查标准曲线得到被水解乙酰胆碱量（ mol）此值为 40ul 血