2022年生物技术制药知识点总结.docx

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1、生物技术制药学问点总结第一章一、名词说明生物技术 ：生物技术是以生命科学为基础,利用生物体（或生物组织,细胞及其组分）的特性和功能, 设计具有预期性状的新物种和新品系,并与工程相结合,利用这样的新物种（或品系）进行加工生产,为 社会供应商品和服务的一个综合性的技术体系；生物技术制药：采纳现代生物技术可以人为地制造一些条件,借助某些微生物,植物或动物来生产所需的药品,称为生物技术制药；技术范畴：基因工程（核心） 、细胞工程（基础） 、酶工程（条件） 、发酵工程（手段） 、抗体工程等；二 、学问点1.生物技术进展简史：答： 1.传统生物技术阶段：技术特点：酿造技术；特点:自然发酵、全凭体会 、近代

2、生物技术阶段：技术特点：微生物发酵技术特点：产品类型多；生产技术要求高；生产设备规模庞大；技术进展速度快；3 现代生物技术：技术特点：基因工程技术（重组DNA 技术）2.生物技术药物的特性：（1 ） 分子结构复杂（2） 具有种属特异性3 针对性强,疗效高4 稳固性差5 基因稳固性6免疫原性7 体内的半衰期短8 受体效应9 多效性和网络性效应10 检验的特异性3. 生物技术制药的特点（四高一长）（1） 高技术：学问密集、技术含量高、多学科高度综合相互渗透（2）.高投入：平均费用 1-3 亿美元（3.）长周期： 8-10 年（ 4.）高风险：胜利率 5%-10%（5.）高收益： 2-3 年收回全部

3、投资,利润回报高达10 倍以上其次章一、名词说明基因工程技术 ：就是将所要重组的目的基因插入载体拼接,转入新的宿主细胞,构建成工程菌（或细胞）,实现遗传物质的重新组合,并使目的基因在工程菌内进行复制和表达的技术；补料分批培育 ：将种子接入发酵罐中进行培育,经过一段时间后,间歇或连续的补加新奇培育基,噬菌体进一步生长的培育方法；连续培育 ：将种子接入发酵罐反应器中,搅拌培育至菌体浓度达到肯定程度后,开动进料和出料蠕动泵,以肯定稀释率进行不间断培育；透析培育：利用膜的半透析原理使培育物和培育基分别,其主要目的是通过去除培育液中代谢产物来解除其对生产菌的不利影响；高密度发酵 ：培育液中工程菌的菌体浓

4、度在50gDCW/L以上,理论上的最高值可达500gDCW/L ；离子交换层析 ：离子交换层析是依据流淌相中的组分别子与交换剂上的平稳离子进行可逆交换时结合力大小的差别而进行分别的一种层析方法；疏水层析 ：疏水层析是利用蛋白质表面的疏水区域和固定相上疏水基团之间的相互作用力差异,对蛋白组分进行分别的层析方法；亲和层析 ：亲和层析是利用固定化配体与目的蛋白质之间特别特异的生物亲和力进行吸附,这种结合既是特异的,又是可逆的,转变条件可以使结合解除；凝胶过滤层析 ：凝胶过滤层析是以多孔性凝胶填料为固定相,按分子大小对溶液中各组分进行分别的液相层析方法；二、简答题1. 基因工程技术生产药物的优点？答：

5、 1、大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和多肽,为临床使用供应有效的保证；2、可以供应足够数量的生理活性物质,以便对其生理、生化和结构进行深化的讨论,从而扩大这些物质的应用范畴；3、可以发觉、挖掘更多的内源性生理活性物质； 4、内源生理活性物质在作为药物使用时存在的不足之处,可通过基因工程和蛋白质工程进行改造和去除；5、可获得新型化合物,扩大药物挑选来源；2. 基因工程技术制药的主要步骤？答： 1）猎取目的基因； 2）目的基因与运载体结合；3）将目的基因导入受体细胞；4）目的基因的表达和鉴定；3. 化学合成目的基因的先决条件？答：必需已知其核苷酸排列次序,或者已知其蛋白质的氨基酸次序,再按相应

6、的密码子推导出DNA 核苷酸序列；4. 人工合成目的基因的限制有哪些？答： 1）不能合成太长的基因；3）费用较高； 2）由于遗传密码简并性,合成的基因不肯定与自然基因完全一样,易造成中性突变；5. 基因工程宿主菌应满意哪些条件？目前应用最广泛的宿主菌有哪些？答： 1）具有高浓度、高产量、高产率；2）不致病、不产生内毒素；3）发热量低,需氧低,适当的发酵温度和细胞外形； 4）简洁进行代谢调控；5）简洁进行重组 DNA 技术； 6）产物简洁提取纯化；应用：原核细胞：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、链霉菌等真核细胞：酵母、丝状真菌6. 表达载体须具备哪些条件？ 答：（ 1）载体能够独立的复制；（ 2）应具有

7、敏捷的克隆位点和便利的挑选标记,以利于外源基因的克隆、鉴定和挑选；（ 3）应具有很强的启动子,能为宿主菌的RNA聚合酶所识别；（ 4）应具有阻遏子,使启动子受到掌握,只有当诱导时才能进行转录；（ 5）应具有很强的终止子,以使RNA聚合酶集中力气转录克隆的外源基因,而不转录其他无关的基因,同时很强的终止子所产生的mRNA较为稳固；（ 6）所产生的 mRNA必需具有翻译的起始信号7. 真核基因在大肠杆菌的表达形式有哪些？答：（ 1）融合蛋白表达方式（2）非融合蛋白表达方式（3）分泌蛋白表达方式8. 表达应用的酵母菌应满意什么条件？答：（ 1）菌体生长力要强（ 2）菌体内源蛋白酶要较弱（ 3）菌株性

8、能要稳固（ 4）分泌才能要强9 基因工程菌在发酵过程中,对发酵罐有哪些要求？答：（ 1）要供应菌体生长的最适条件；2 培育过程不得污染、保证纯菌培育；3 培育及消毒过程中不得游离出异物,不能干扰细菌代谢活动10. 离子交换层析的原理？答：当离子交换剂处于水溶液中时,活性离子可以从活性基因上解离下来,在基质骨架与溶液间自由迁移,并可与溶液间的同性离子,因与活性基因的化学亲和力不同而发生交换,即发生离子交换作用；11. 疏水层析的原理？答：蛋白质表面多由亲水基团组成,也有一些疏水性较强的疏水区；在高盐浓度时,蛋白质表面疏水部位的水化层被破坏,暴露出疏水部位,疏水作用增强,与固定相上的疏水基团产生疏

9、水性作用而被吸附；盐浓度降低时蛋白质疏水作用减弱,目的蛋白质被逐步洗脱下来；因此,疏水层析流淌相一般为pH6 8 盐水溶液,采纳高盐上样,低盐洗脱；12. 亲和层析的原理？答：通过将具有亲和力的两个分子中一个固定在不溶性基质（也称载体）上,利用分子间亲和力的特异性和可逆性,对另一个分子进行分别纯化；13. 凝胶过滤层析优缺点？答：优点：设备简洁、操作便利、样品回收率高、试验重复性好、不转变样品生物学活性；缺点：辨论率较低,特别是相对分子质量相近的分子之间；一、名词说明第三章 动物细胞工程制药细胞工程： 细胞工程是以细胞为单位,按人们的意志,应用细胞生物学、分子生物学等理论和技术, 有目的地进行

10、细心设计,细心操作,使细胞的遗传特性发生转变,从而达到改良或产生新品种的目的,以及使细胞增加或重新获得产生某种特定产物的才能,从而在离体条件下进行大量培育、增殖,并提取出对人类有用的产品；悬浮培育： 所谓悬浮培育即让细胞自由地悬浮在培育基内生长繁衍；贴壁培育： 贴壁培育是必需让细胞贴附在某种基质上生长繁衍的培育方法；代谢工程： 采纳基因工程的手段,使工程细胞增加或削减某种酶,改造它的代谢才能和途径,使其降低对某些养分物质的需要,削减某些代谢产物的产生和危害,以及掌握工程细胞的增值速度和制造产品的才能；组织工程： 将组织或细胞从机体取出,在体外模拟机体体内的生理条件进行培育,使之生存和生长；二、

11、简答题：1、动物细胞的生理特点：答： 1 细胞分裂周期长动物细胞分裂所需时间一般为1248h ；2 细胞生长需贴附于基质,有接触抑制现象3 二倍体细胞寿命有限（异倍体细胞系寿命长）4 对生长环境要求敏锐5 培育基要求高6 合成的蛋白质有修饰（或：动物细胞对蛋白质的合成途径和修饰功能与细菌不同）2、动物细胞培育时加入血清的作用机制：答： 1供应基本养分物质2供应激素和各种生长因子 3）供应贴附因子和舒展因子4对培育中的细胞起到某些爱护作用3、无血清培育基的优点：答： 1 提高了细胞培育的可重复性,防止了由于血清批次之间差异的影响；2 削减了由血清带来病毒、真菌、和支原体等微生物污染的危急；3 供

12、应充分、稳固；4 细胞产品易于纯化；5 防止了血清中某些因素对有些细胞的毒性；6 削减了血清中蛋白对某些生物测定的干扰,便于对试验结果的分析；4、动物细胞大规模培育有哪些：答： 悬浮培育 贴壁培育 贴壁悬浮培育,或称假悬浮培育5、动物细胞悬浮培育的优缺点：答：该培育方法的优点是操作简便,培育条件比较均一,传质和传氧较好,简洁扩大培育规模,在培育设备的设计和实际操作中可借鉴很多有关细菌发酵的体会；不足之处是由于细胞体积较小,较难采纳灌流培育,因此细胞密度一般较低；6、动物细胞贴壁培育的的优缺点：答：优点是适用的细胞种类广（由于生产中所使用的细胞绝大多数是贴壁细胞）,较简洁采纳灌流培育的方式使细胞

13、达到高密度；不足之处是操作比较麻烦,需要合适的贴附材料和足够的面积,培育条件不易均一,传质和传氧较差,这些不足经常成为扩大培育的“瓶颈”；7、动物细胞包埋成微囊培育的优点：答： 1 包埋或包裹在载体或微囊内的细胞可获得爱护,防止了剪切力的损害；2 可以获得较高的细胞密度,一般都在710 108 个/ml 以上；3 当掌握微囊膜的孔径后,可使产品浓缩在微囊内,从而有力图下游产物的纯化；4 可采纳多种生物反应器细心大规模培育,如搅拌罐式生物反应器,气升式反应器等；而包埋法当起颗粒直径较大时,仍可采纳固定床式生物反应器培育；8. 动物细胞包埋或微囊培育的优点是什么？答：（ 1）、 包埋在在体内的细胞

14、可以获得爱护,防止了剪切力的损害；（ 2）、可以获得较高的细胞密度,一般都在107108 个/ml 以上；（ 3）、可以使产品浓缩在微囊内,利于下游产物的纯化；（ 4）、可以采纳多种生物反应器进行大规模培育；9 动物细胞生物反应器的作用是什么？生物反应器应满意那些要求？答：（ 1）、作用是给动物细胞的生长代谢供应一个最优化的环境,从而使其在生长代谢过程中产生出最大量、最优质的所需产物；（ 2）、要求如下：生物反应器所用的材料特别是与培育基、细胞直接接触的材料必需对细胞无毒；生物反应器具有良好的传质、传热和混合的性能；密封性能好；能自动监控培育环境,保持质量的均 一； 能长期连续运转；容器内面光

15、滑,无死角；拆穿、连接和清洁便利,耐高压；设备成本尽可能底；10.动物细胞生物反应器的类型有哪些？答： 1、 搅拌罐式反应器；2、 气升式生物反应器；3、中空纤维式生物反应器；4、透析袋或膜式生物反应器；5 、固定床或流化床式生物反应器；一、名词说明第四章抗体： 由 B 细胞接受刺激后分化为浆细胞产生能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白；免疫球蛋白： 具有抗体活性及化学结构与抗体相像的球蛋白称为免疫球蛋白；凝集反应： 在细菌、红细胞等颗粒性抗原中加入相应抗体,在有适量的电解质存在下,能形成肉眼可见的凝集块,故称为凝集反应；？ 反向被动血凝试验： 红细胞经甲醛处理后,在酸性条件下能吸附蛋

16、白质；将抗HBs 吸附其上,如待测样品中含有 HBsAG ,就发生特异性结合而使血细胞凝集；单克隆抗体 ：通过 B 细胞与骨髓瘤细胞融合技术,获得特异性针对某一种抗原打算簇的细胞克隆,产生均一性的抗体；双功能抗体 ： 是双价双特异性单链抗体二、 简答题1. 免疫导向疗法为什么没有胜利？从哪些方面可以对单克隆抗体进行改造？阻碍： A 单克隆抗体的均是鼠源性抗体,应用于人体可内可产生人鼠源抗体,加速了排斥反应,在人体内的半衰期只有5-6h,难以维护有效药物的作用靶组织时间；B完整的抗体份子Ig 分子质量过大,难以穿透实体肿瘤组织,达不到有效的治疗浓度；改造： A 降低单克隆抗体的免疫原性；B 降低

17、单克隆抗体的相对分子质量（ 1）人 -鼠嵌合抗体：由人抗体的恒定区与鼠源单抗的可变区融合得到；（ 2） .改型抗体：把鼠抗体的CDR 序列移植到人抗体的可变区内,所得到的抗体（ 3）小分子抗体小分子抗体包括：Fab、 Fv 或 ScFv、 单域抗体、 最小识别单位；这些部位都可以改造2. 单克隆抗体的制备流程及方法；流程： 将有用抗原免疫过的淋巴细胞与骨髓瘤用PEG 进行杂交融合把融合的细胞在 HA T 培育基上挑选出来；将挑选后的整合细胞分散,培育成杂交瘤细胞；使能产生单克隆抗体的杂交瘤细胞克隆化；杂交瘤细胞抗体的性状的鉴定；单克隆抗体的大量制备,一是在培育液中大更是繁衍,二是注入纯系小鼠腹

18、腔中大量繁衍；单克隆抗体的纯化；制备方法：体内诱生法和体外法；3. 动物体内诱生法制备单克隆抗体的优缺点答： 优点：简洁,比较经济,所得单克隆抗体量较多且效价较高,可有效地储存杂交瘤细胞株和分分别已污染的杂菌的杂交瘤细胞株；缺点：小鼠腹水中混有来自小鼠的多种杂蛋白,给纯化带来难度；4. 鼠源性单克隆抗体改造后的抗体类型及各自的特点？1. 人-鼠嵌合抗体：保持鼠源性单克隆抗体的抗原结合特异性,但对人免疫原性大幅下降了2. 改型抗体：鼠源性单克隆抗体的互补打算区（CDR 区）序列替换人的Ig 分子中的 CDR 序列；基本排除免疫原性；3. 小分子抗体a) Fab将 I的重链在铰链区的C 端裂解,获

19、得两个完全相同的抗原结合片段；才铰链区和二硫键相连；有完整的生双价抗体活性,相对分子质量削减为三分之一,排斥反应也降低,人体内很稳固；b) Fv含有 L 链和 Fd 链一半的 N 端可变区； 有完整抗体相像的结才能,相对分子质量削减为六分之一4.单链抗体 scFv：单链易改造； 体内半衰期短, 免疫原性低； 稳固性低, 重轻链之间的分子间作用力弱； 功能单一,只能与一种抗原特异性结合；亲和力低,稳固性差,体内清除过快；5.单域抗体：只由一个CDR 构成；5. 多功能抗体的优点；答：具有高亲和力性能,由于具有多个结合价,可同时与细胞膜上相邻的两个或多个靶抗原结合,与肿瘤细胞表面抗原的多价结合有利

20、于肿瘤的影像分析及治疗；6. 有应用价值的多功能抗体应具备有哪些特点；a) 能高挑选性,高亲和性地同靶抗原或肿瘤相关抗原结合；b) 在血循环中,与效应细胞或细胞毒触发分子有较低亲和力；c) 应为人源化抗体,最大限度地削减人抗鼠蛋白的排斥反应,使得复给药不受限制；d) 分子应大小适中,既能渗透到肿瘤组织内部,又能保证适当的滞留时间；7. 抗体导向酶 -前药疗法中酶和前药有哪些要求？答：（1）、对酶的要求：活化酶最好来自非哺乳动物,而人体内不存在相应的类似物,以保证高度的特异性；酶仍能通过化学交联与单抗结合,在较长的一段时间内保持稳固性和活性；（ 2）对前药的要求：前药本身应无活性或活性很低,只能

21、被相应的酶活化为高度扩散性的小分子,以实现在肿瘤组织内的广泛分布和杀伤肿瘤细胞；而且前药仍应具有极短的生物半衰期,防止重新进入循环产生非特异性毒性；一、名词说明第五章：植物细胞工程制药植物细胞工程 ：以植物细胞为基本单位,应用细胞生物学、分子生物学等理论和技术,在离体条件下进行培育、繁衍或人为的精细操作,使细胞的某些生物学特性按人们的意愿发生转变,从而改良品种、制造新品种、加速繁育植物个体或获得有用物质的一门科学或技术；植物细胞全能性： 是指植物体中任何一个具有完整细胞核的细胞,在肯定条件下都可以重新再分化形成原先的个体；植物组织和器官培育：就是在无菌和人工掌握条件下,将离体的植物器官、组织、

22、细胞,培育在人工配制的培育基上,赐予相宜的培育条件,诱导其产生愈伤组织、丛芽,最终形成完整的植株；植物的分化： 个体发育过程中,细胞在外形、结构和功能上发生转变的过程脱分化： 已分化为组织器官的细胞离体条件下变成未分化的细胞和组织的过程；再分化： 脱分化的愈伤组织再分化形成胚状体或愈伤组织直接分化出器官植物愈伤组织培育：从植物体的各种组织、器官等外植体,经脱分化而形成的细胞集合体的培育；胚胎培育： 未成熟或成熟的胚胎的离体培育分生组织培育： 分生组织培育又称生长锥培育,是指在人工培育基上培育茎端分生组织细胞；一般仅限于分生组织的顶端圆锥区,其长度不超过0.1mm；外植体 ：指用于植物组织（细胞

23、）培育的器官或组织（的切段）,植物的各部位如根、茎、叶、花、果、穗、胚珠、胚乳、花药和花粉等均可作为外植体进行组织培育；无性繁衍系： 无性繁衍系又叫克隆,是指使用母体培育物反复进行继代培育时,通过同种外植体而获得越来越多的无性繁衍后代而言,如根无性系、组织无性系、悬浮培育物无性系等；变异体 ：在无性系的培育过程中,有时其局部的组织无论在结构、生长速度以及颜色方面都表现出明显的区分,如连续进行挑选培育,就从同一无性系可分别形成二个或多个不同的系列,该系列称为“无性系的变异体 ”；突变体 ：细胞本身发生遗传变异或应用诱变处理发生的遗传变异所得的新细胞,即为突变体；植物抗毒素： 指在植物防备系统内能

24、对抗微生物攻击的某些次级代谢产物；诱导子： 指植物抗病过程中诱导植物在防备过程中产生植物抗毒素和引起植物过敏反应的物质；包括侵染植物的微生物及植物细胞内的分子生物诱导子： 植物在防备过程中位对抗微生物感染而产生的的物质；非生物诱导子：全部不是植物细胞中自然成分单又能触发形成植物抗毒素信号的因子；内源性诱导子： 来自植物细胞的分子,多为植物细胞壁在微生物作用下的降解产物及沉积在细胞壁上的木质素；外源性诱导子： 亦称整诱导子,是指病源微生物在入侵植物时自身被降解的产物及其代谢产物；生物转化： 也称生物催化,是指利用离体培育细胞或器官等对外源化合物进行结构修饰而获得有价值的生理生化反应,其本质是利用

25、生物体系生身全部产生的酶对外源化合物进行的酶催化反应；二、简答1、次级代谢作用的定义及产物的特点？答：（ 1）定义：是由特异蛋白质调控产生的内源化合物的合成、代谢及分解作用的综合表达；2）产物特点： a：有明显的分类学区域界限；b：其生物合成需在肯定的条件下才能发生；c：缺乏明确的生理功能；d：是生物活动的余外成分；2、植物细胞培育中细胞团产生的缘由？ 答： 1）、细胞分裂之后没有进行细胞分别；2）、在间歇培育过程中细胞处于对数生长后期是,开头分泌黏多糖和蛋白质,或者以其他方式形成粘性表面,从而形成细胞团；3、植物细胞培育中常用的灭菌剂有哪些？答：次氯酸钙、次氯酸钠、氯化汞；仍有（过氧化氢、溴

26、水、硝酸银、抗生素）4、细胞的两步培育法各有什么目的？答：第一步采纳适合细胞生长的培育基 生长培育基其次步采纳适合次级代谢产物合成的培育基 生产培育基前者是为了实现细胞的高生产率,后者获得肯定含量的硝酸盐和磷酸盐,并含有较低的糖分或较少的碳源,得到正确生长；5、影响植物次级代谢产物产生和累积的因素？答： 1、生物条件：外植体季节 休眠等；2 、物理条件：温度光 通气 渗透压 ；3、化学因素：无机盐、碳源 、植物生长剂、维生素、 氨基酸 、前体；4、工业培育条件：培育灌类型、 通气、培育方法等；6、植物细胞和微生物相比具有什么的差异？答：（一）、结构组成： 1、细胞壁的组成不同：植物细胞的成分主

27、要是纤维素,微生物的细胞壁主要是由肽聚糖组成； 2、植物细胞拥有大的液泡和质体（如叶绿体） ；（二）、 用于培育时： 1、植物细胞对养分的要求较复杂,而微生物要求较简洁； 2、植物细胞会有有限的分化,而微生物不会； 3、由于细胞壁的组成不同,植物细胞在培育时不能搅拌,而微生物可以；7 植物细胞培育的生物反应器类型？答： 1）、机械搅拌生物反应器2）、鼓泡塔生物反应器3）、气升式生物反应器 4、转鼓式生物反应器5、 固定化生物反应器8、在植物细胞大规模培育中应综合考虑哪些因素？1）、供养才能的及气泡分散程度2）、剪切力大小及对细胞的影响3）、高密度培育时培育液的混合程度4）、温度、 PH、级养分

28、物浓度的掌握才能5）细胞团大小的掌握才能；6）易于放大9、两相培育系统须满意什么条件？答：添加相无毒,易吸附易溶解；两相易分开,不吸附培育基一、名词说明第六章酶工程制药酶工程 ：是酶学和工程学相互渗透进展而成的一门新的技术科学,他是从运用的目的动身讨论酶.运用, 酶的特异性功能并通过工程化将相应原料转化成有用物质的技术；固定化酶 ：是指限制或固定于特定空间位置的酶,详细来说,是指经物理或化学方法处理,使酶变成不易随水流失即运动受到限制,而又能发挥催化作用的酶制剂,制备固定化酶的过程称为酶的固定化；酶化学修饰 ：通过主链的切割.剪接和侧链基团的化学修饰对酶蛋白进行分子改造,以转变其理化性质及生物

29、活性；这种运用化学方法对酶分子施行种种“手术”的技术称为酶分子的化学修饰；固定化细胞 ：将细胞限制或定位于特定空间位置的方法称为细胞固定化技术,被限制或定位于特定空间位置的细胞称为固定化细胞；二、简答1. 用微生物生产酶制剂的优点：答：（ 1）微生物种类多,品种齐全（ 2）微生物生长繁衍快,生长周期短,产量高（ 3）培育方法简洁,原料来源丰富,价格低廉,经济效益高,并可以通过掌握培育条件来提高酶的产量（ 4 微生物具有较强的适应性和应变才能2. 优良的产酶菌株应满意哪些要求：答： 1 繁衍快,产酶量高,酶的性质应符合使用要求,最好是产生胞外酶的菌, 2 不是致病菌,在系统发育上与病原体无关,也

30、不产生有毒物质,3 产酶性能稳固,不易变异退化,不易感染噬菌体,4 能利用廉价的原料,发酵周期短,易于培育3. 固定化酶的优点 ：答： 1 可以较长时间内多次使用,酶的稳固性高；2 反应后,酶与底物和产物易于分开,易于纯化,产品质量高；3 反应条件易于掌握；4 酶的利用率高；5 比水溶性酶更适合于多酶反应；4. 物理吸附法制备固定化酶的优缺点：答：优点 ：操作简洁,可选用不同电荷和不同外形的载体,固定化过程和纯化过程同时实现,酶失活后载体仍可以再生；缺点 ：最适吸附酶量五规律可循,对不同的载体和不同酶的吸附条件不同,吸附量和酶活力不一定成平行关系, 同时载体与载体之间结合力不强,酶易于脱落,

31、导致酶活力下降并污染产物；5. 共价结合法制备固定化酶的优点和缺点;答：酶以共价键结合于载体上即将酶分子上非活性部位功能团与载体表面反应基团进行共价结合的方法优点 ：酶与载体结合坚固,稳固性好,缺点 ：条件苛刻,操作复杂,而且采纳了比较剧烈的反应条件,会引起酶蛋白的高级结构的变化,破坏活性中心,所以往往不能得到比活高的固定化酶,甚至底物的专一性等酶的性质也会发生变化6. 酶固定化过程中挑选载体的依据以及载体需满意哪些条件： 答：依据 ：1 酶促反应的性质2 底物类型3 固定化方法载体需满意的条件 ： 1.固定化过程中不引起酶变反性2.对酸碱有肯定的耐受性3 有肯定的机械强度4.有肯定的亲水性和

32、良好的稳固性；5.有肯定的疏松网状结构,颗粒匀称；6. 共价结合时具有可活化基团；7.有耐受酶和微生物细胞的才能；8.廉价易得；7. 固定化细胞的优点和缺点：优点 ：1.无需进行酶的分别纯化；2.细胞保持酶的原始状态,固定化过程中酶的回收率高3.细胞内酶比固定化酶稳固性更高；4.细胞内酶的辅酶因子可以自动更生；5.细胞本身含多酶体系,可催化一系列反应6 抗污染才能强；缺点 ： 1.利用的仅是细胞内酶,而细胞多种酶的存在,会形成不需要的副产物；2.细胞膜 .细胞壁和载体都存在着扩散限制作用；3.载体形成的孔隙大小影响高分子底物的通透性；8. 固定化酶和细胞的生物反应类型：答： 1.间歇式搅拌罐反应器；2.连续流淌脚步罐反应器；3.填充床反应器；4.流化床反应器；5.循环反应器；6.连续流淌脚步罐超滤膜反应器；7.其他反应器；9. 有机相中酶催化反应的优点:答： 1.增加流水性位置或产物的溶解度；2.热力学平稳向合成方向移动；3.可抑制有水参加的副反应4.酶不溶于有机介质,易于回收再利用；5.简洁从低沸点的溶解中分别纯化产物；6 酶的热稳固性提高, pH 的适应性扩大；7.无微生物污染；8.能测定某些在水中不能测定的常数；9.固定化酶的方法简洁,可以只沉积在载体表面