新人教版高中生物选修《的粗提取与鉴定》重点高中教案学案一体化.docx

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1、精品名师归纳总结课题 1DNA 的粗提取与鉴定导学诱思 1提取 DNA 的方法提取生物大分子的基本思路是。对于DNA的粗提取而言，就是要利用、等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA ，去除其他成分。1） DNA 的溶解性DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的中溶解度不同，利用这一特点，挑选适当的盐浓度就能使充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分别目的。图 51 是 DNA 在 NaCl 溶液中的溶解度曲线，请依据曲线图， 摸索：在什么浓度下，DNA 的溶解度最小？DNA 在 NaCl 溶液中的溶解度是如何变化的？如何通过掌握NaCl 溶液的浓度使DNA 在盐溶液中溶解或析出？此外， DNA

2、不溶于溶液，但是细胞中的某些蛋白质就溶于酒精。利用这一原理，可以将 DNA 与蛋白质进一步的分别。2） DNA 对酶、高温顺洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解，但是对没有影响。大多数蛋白质不能忍耐60 80oC 的高温，而DNA 在以上才会变性。洗涤剂能够瓦解，但对DNA 没有影响。3） DNA 的鉴定在条件下， DNA 遇会被染成色， 因此二苯胺可以作为鉴定DNA 的试剂。2试验设计1）试验材料的选取凡是含有的生物材料都可以考虑，但是使用的生物组织，胜利的可能性更大。在下面的生物材料中选取适合的试验材料：鱼卵、猪肝、菜花（花椰菜）、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培育基

3、的大肠杆菌摸索：哺乳动物的红细胞的特点？2）破裂细胞，猎取含DNA的滤液动物细胞的破裂比较简单， 以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入肯定量的，同时用搅拌， 过滤后收集滤液即可。假如试验材料是植物细胞，需要先用溶解细胞膜。例如，提取洋葱的DNA 时，在切碎的洋葱中加入肯定的和，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。摸索：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？假如研磨不充分，会对试验结果产生怎样的影响.此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结3）去除滤液中的杂质阅读课本的三个方案，摸索：为什么反复的溶解与析出DNA ，

4、能够去除杂质？方案二与方案三的原理有什么不同？4） DNA 的析出与鉴定将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积、冷却的，静置，溶液中会显现，这就是粗提取的DNA 。用玻璃棒搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水 分。取两支 20ml 的试管， 各加入物质的量浓度为的NaCl 溶液 5ml ，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4ml 的。混合匀称后，将试管置于中加热5min ，待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA 的溶液是否变。3操作提示以血液为试验材料时，每100ml 血液中需要加入3g，防止。加入洗涤剂后，动作要、，否就简单产生

5、大量的泡沫，不利于后续步骤的操作。加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要，以免，导致DNA 分子不能形成絮状沉淀。二苯胺试剂要，否就会影响鉴定的成效。4结果分析与评判疑难点拨 1 DNA 的溶解度与NaCl 溶液浓度的关系：当 NaCl 溶液浓度低于0.14mol/L 时，随浓度的上升，DNA的溶解度降低。当NaCl 溶液浓度高于0.14mol/L 时，随浓度上升，DNA 的溶解度上升。 2 制备鸡血细胞液时，要在新奇的鸡血中加入柠檬酸钠的缘由制备鸡血细胞液时，要在新奇的鸡血中加入抗凝剂柠檬酸钠，防止血液凝固。 其原理是柠檬酸钠能与血浆中Ca2+发生反应，生成柠檬酸钙络合物，血浆中游离的Ca2+大大

6、 削减，血液便不会凝固，由于鸡血红细胞，白细胞都有细胞核，DNA 主要存在于细胞核中，所以在离心或静置沉淀后，要弃出上层清液血浆。3提取 DNA 的第一步是材料的选取，其目的是肯定要选取DNA 含量较高的生物材料，否 就会由于试验过程中或多或少的缺失而造成检测的困难。其次步是DNA 的释放和溶解，这 一步是试验胜利与否的关键，要尽可能使细胞内的DNA 全部溶解。 第三步是DNA 的纯化，即依据 DNA的溶解特性、对酶及高温的耐受性的不同等特性，最大限度的将DNA与杂质分开。最终一步是对DNA 进行鉴定，这是对整个试验的结果的检测。4在 DNA 的析出的步骤中用到玻璃棒搅拌时，留意动作要轻缓，以

7、免加剧DNA分子的断裂，导致 DNA分子不能形成絮状沉淀。5盛放鸡血细胞液的容器，最好是塑料容器。鸡血细胞破裂以后释放出的DNA ，简单被玻璃容器吸附，由于细胞内DNA 的含量原来就比较少，再被玻璃容器吸附去一部分，提取到的 DNA 就会更少。因此，试验过程中最好使用塑料的烧杯和试管，这样可以削减提取过程的 DNA 的 损 失 。典例解析 本试验中有三次过滤：过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结过滤含粘稠物的0.14mol/LNaCl溶液过滤溶解有DNA 的 2mol/LNaCl溶液以上三次过滤分别为了获得（）A 含核物质的滤液、纱布上的粘稠物、含DN

8、A 的滤液B 含核物质的滤液、滤液中DNA 粘稠物、含DNA 的滤液C 含核物质的滤液、滤液中DNA 粘稠物、纱布上的DNAD 含较纯的DNA 滤液、纱布上的粘稠物、含DNA 的滤液答案： A解析 :用蒸馏水稀释鸡血细胞液，使血细胞的细胞膜、核膜破裂，释放出核物质，此时过滤只能得到含 DNA 和其他物质如蛋白质的滤液， 这种滤液必需经过试验中其他步骤得相继处理，方能得到较纯的 DNA 。 DNA 在 0.13mol/LNaCl 溶液中溶解度最低，成丝状粘稠物，可经过滤留在纱布上。【课本问题答案和提示】（一）旁栏摸索题1为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，

9、水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂细胞膜和核膜的破裂，从而释放出DNA 。 2加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放。食盐的主要成分是NaCl ，有利于DNA 的溶解。3假如研磨不充分，会对试验结果产生怎样的影响？答：研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA 量变少，影响试验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。 4此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？答：可能含有核蛋白、多糖和RNA 等杂质。5为什么反复的溶解与析出DNA ，能够去除杂质？答：用高盐浓度的

10、溶液溶解DNA ，能除去在高盐中不能溶解的杂质。用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA ，就能够除去与DNA 溶解度不同的多种杂质。6方案二与方案三的原理有什么不同？答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA 与蛋白质分开。方案三利用的是 DNA 和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA 分别。（二）练习1答：提取 DNA 的第一步是材料的选取， 其目的是肯定要选取 DNA 含量较高的生物材料， 否就会由于试验过程中或多或少的缺失而造成检测的困难。其次步是 DNA 的释放和溶解， 这一步是试验胜利与否的关键，要尽可能使细胞

11、内的 DNA 全部溶解。第三步是 DNA 的纯化，即依据DNA的溶解特性、对酶及高温的耐受性的不同等特性，最大限度的将DNA与杂质分开。最终一步是对DNA 进行鉴定，这是对整个试验的结果的检测。 2答：提取蛋白质比提取DNA 的难度大。这是由于，与DNA 相比，蛋白质对温度、盐浓 度、 pH 等条件要敏锐得多，很简单失活。并且蛋白质的空间结构多种多样，理化性质各不可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结相同，使得蛋白质的提取没有一种统一的方法，只能依据特定蛋白质的特性摸索提取的条件，设计特定的方法。课堂演练 一、挑选题（ 10 个）1.在讨论DNA的基因样本前，采集来的血样需要蛋白水解

12、酶处理，然后用有机溶剂除去蛋白质。用蛋白水解酶处理血样的目的是（D）A. 除去血浆中的蛋白质B. 除去染色体上的蛋白质C.除去血细胞表面的蛋白质D.除去血细胞中的全部的蛋白质，使DNA 释放，便于进一步提纯2与析出DNA粘稠物有关的表达，不正确选项（C）A. 操作时慢慢滴加蒸馏水，降低DNA 的溶解度B.在操作 A 时，用玻璃棒轻缓搅拌，以保证DNA 分子完整C.加蒸馏水可同时降低DNA 和蛋白质的溶解度，两者均可析出D.当丝状粘稠物不再增加时，此时NaCl 的浓度相当于0.14mol/L 3洗涤剂能够瓦解（B），但对DNA 没有影响。A. 细胞壁B.细胞膜C.细胞核D.细胞质 4在沸水浴的条

13、件下，DNA 遇（D）会被染成蓝色。A. 斐林试剂B. 苏丹染液C.双缩脲试剂D.二苯胺5在 DNA 提取过程中，最好使用塑料试管和烧杯，目的是（B）A. 不易破裂B. 削减提取过程中DNA 的缺失C.增加 DNA 的含量D. 简单洗刷 6以下操作中，对DNA 的提取量影响最小的是（B）A. 使鸡血细胞在蒸馏水中充分破裂，放出DNA 等核物质B.搅拌时，要使用玻璃棒沿一个方向轻缓搅拌C.在“析出DNA 粘稠物”时，要慢慢加蒸馏水，直至溶液中粘稠物不再增加D.在用酒精沉淀DNA 时，要使用冷酒精，甚至再将混合液放入冰箱中冷却 E 在 DNA 的溶解和再溶解时，要充分搅拌7 DNA的粗提取中，将与

14、滤液体积相等的、冷却的（D），静置2 3min ，溶液中会显现白色丝状物。A.0 9% 的 NaClB.0.14mol/L 的 NaCl 溶液C.质量分数15%的 HClD. 体积分数为95%的酒精溶液8.以血液为试验材料时，需要向血液中加入（C），防止血液凝固。A. 醋酸钠B.龙胆紫C.柠檬酸钠D.醋酸洋红9.在向溶解DNA 的 NaCl 溶液中，不断加入蒸馏水的目的是（C）A. 加快溶解DNA 的速度B.加快溶解杂质的速度C.削减 DNA的溶解度， 加快 DNA 析出D.减小杂质的溶解度，加快杂质的析出10.去除滤液中的杂质时，直接在滤液中加入嫩肉粉，利用嫩肉粉中的 （ C）分解蛋白质。A

15、. 胃蛋白酶B. 胰蛋白酶C.木瓜蛋白酶D. 肠肽酶二、非挑选题（3 个）1提取鸡血中DNA 时，要除去血液中的上清液，这是由于什么？答案：由于上清液是血浆，不含有血细胞，DNA存在于沉郁试管底部的鸡血细胞的细胞核中，所以提取鸡血中的DNA 时，要除去血液中的上清液。 2填写本试验完成以下试验操作时所用试剂。提取鸡血细胞中核物质溶解核内DNA ：可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结资料word 精心总结归纳 - - - - - - - - - - - -析出 2mol/LNaCl溶液中的DNADNA 粘稠物的再溶解提取杂质较少的DNA白色乳状丝状物DNA 的鉴定答案：蒸馏水 2mo

16、l/LNaCl 溶液蒸馏水 2mol/LNaCl 溶液冷却的 95%的酒精二苯胺3.关于 DNA粗提取的试验材料的挑选，也经过了多次试验成效的比较，最终挑选鸡血做试验材料的缘由是什么？请回答以下问题：鸡血细胞中红细胞，家鸡属于鸟类，新陈代谢旺盛，因而血液中细胞树木较多，可以供应丰富的。试验前由老师制备血细胞液供同学们做试验材料，而不用鸡全血，主要缘由是。生活在牧区的人们，采集牛、羊和马血比较便利， 如他们按试验要求完成试验步骤后，结果是，这是由于这些动物和人一样，成熟的红细胞中，但如改用动物肝脏做试验材料，试验能顺当进行。这是由于。如选用动物肝脏做试验材料，在提取之前，最好增加程序，使组织细胞

17、更易分别。答案：含细胞核。红。 DNA鸡血细胞液中 DNA 相对含量很难提取到DNA 。无细胞核。肝细胞有细胞核研磨【学问拓展 】1.二苯胺鉴定DNA 的化学原理DNA中嘌呤核苷酸上的脱氧核糖遇酸生成 -羟基 - 酮基戊醛，它再和二苯胺作用而出现蓝色 溶液呈浅蓝色。鉴定时溶液蓝色的深浅，与溶液中DNA 含量的多少有关。 2.研磨液中几种药品的作用Tris/HCl: 供应缓冲体系，DNA 在这一体系中呈稳固态（Tris 为三羟甲基氨基甲烷）。EDTA（乙二胺四乙酸二钠）：是 DNA酶的抑制剂， 可以防止细胞破裂后DNA酶降解 DNA 。SDS（十二烷基磺酸钠）：可以使蛋白质变性，与DNA 分别。【教学反思】可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结学习资料 名师精选 - - - - - - - - - -第 5 页，共 5 页 - - - - - - - - - -可编辑资料 - - - 欢迎下载