药物分析-第十六章-药品质量控制中的新方法与新技术课件.ppt

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1、1第十六章第十六章药品质量控制中的药品质量控制中的新方法与新技术新方法与新技术2一、高分辨气相色谱法一、高分辨气相色谱法第一节第一节 色谱分析新方法及其应用色谱分析新方法及其应用high resolution gas chromatography（HRGC）（一）色谱柱类型（一）色谱柱类型3填充柱填充柱毛细管柱毛细管柱开管型开管型填充型填充型涂壁型涂壁型 固定液涂布在管内壁固定液涂布在管内壁载体型载体型 固定液涂布在管内壁固定液涂布在管内壁 的一层载体上的一层载体上固定液涂布在管内填充的载体表面上固定液涂布在管内填充的载体表面上将载体、吸附剂等装入玻璃管将载体、吸附剂等装入玻璃管后，拉制成毛细

2、管后，拉制成毛细管4 熔融石英开管柱熔融石英开管柱（fused silica open tubular column, FSOT）0.25mm0.25 m12m、25m、50m增加柱容量增加柱容量 0.35mm0.5 m提高柱效提高柱效 0.15mm0.1 m（开管型毛细管柱）（开管型毛细管柱）5优点优点柱效高柱效高重复性好重复性好分离速度快分离速度快6进样方式进样方式1、分流进样、分流进样72、不分流进样、不分流进样样品注入后，在汽化室气化，在开口端冷却，以液体形式收集，然后快速加热色谱柱进行再进样。Grob偶然发现，色谱峰没有过分展宽。利用了溶剂效应。溶剂在柱头富集，是靠近溶剂峰出来的组分

3、峰成为尖峰。适用于痕量分析，对宽沸程样品也能获得满意结果。83、柱头进样、柱头进样 这是一种针对分流和不分流进样的缺点而设计的进样方式。其特点：1.必须使用外径为0.17-0.23mm的细针，开管柱内径必须大约0.32mm；2.不能通过隔垫进样；3.缓慢进样，以免倒流；4.对热不稳定、稀的和宽沸程的样品比较理想；5.能给出定量结果。9二、手性分离色谱二、手性分离色谱构型命名构型命名法法L型型D型型COHHRRCRHHOR（CSC）chiral separation chromatography10CcbadCbcadR型型S型型(Rectus)(Sinister)11一、手性药物的现状一、手性

4、药物的现状手性药物手性药物（579） 药物药物（1992）天然和半天然和半合成药物合成药物（556）合成药物合成药物（1436）非手性药物非手性药物（857）单一异构体单一异构体（73）外消旋体外消旋体（506）手性药物手性药物（547）非手性药物非手性药物（9）单一异构体单一异构体（537）外消旋体外消旋体（10）12 不少光学异构体的生物活性不同而引起不不少光学异构体的生物活性不同而引起不同的治疗效果同的治疗效果 加拿大健康保护部门加拿大健康保护部门1993年年11月公布了有月公布了有关手性药物开发的简要指南关手性药物开发的简要指南 欧共体欧共体1994年年5月发布了有关手性药物开发月发布

5、了有关手性药物开发的最终指南的最终指南 美国美国FDA（美国食品药物管理局）（美国食品药物管理局）1992年年5月将月将“FDA开发新立体异构体药物的政策报告开发新立体异构体药物的政策报告”递交联邦注册处备案递交联邦注册处备案13立体异构体立体异构体包括一个或一个以上手性中心包括一个或一个以上手性中心其单个对映体之间可互成镜像其单个对映体之间可互成镜像几何异构体几何异构体非对映异构非对映异构体体14优对映体优对映体（强效体）（强效体）劣对映体劣对映体（低效体）（低效体）具有最高活性或亲和性对映异构体具有最高活性或亲和性对映异构体 强效非选择性强效非选择性-受体阻滞剂噻吗洛尔受体阻滞剂噻吗洛尔S

6、(-)体为优对映体，活性为体为优对映体，活性为R(+)体的体的8090倍倍噻吗洛尔噻吗洛尔R(+)体体15二、手性药物对映体的药效学差二、手性药物对映体的药效学差异异（一）仅一种异构体有治疗作（一）仅一种异构体有治疗作用用抗高血压抗高血压 S(-)-甲基多巴甲基多巴（三）药理作用与强度相（三）药理作用与强度相似似抗过敏抗过敏 异丙异丙嗪嗪（二）药理作用不同（二）药理作用不同抗疟药抗疟药 (+)奎宁奎宁抗过敏抗过敏 (-)奎尼丁奎尼丁16（四）药理作用相似，反应强度不同（四）药理作用相似，反应强度不同氯胺酮氯胺酮 S(+)体较体较R(-)体镇痛作用强体镇痛作用强34倍倍（五）药理作用相近，毒理作

7、用不同（五）药理作用相近，毒理作用不同沙利度胺沙利度胺 S(-)体和体和R(+)体镇静作用相近，体镇静作用相近， 但但S(-)体有胚胎毒及致畸作用体有胚胎毒及致畸作用17三、手性药物对映体的药动学差异三、手性药物对映体的药动学差异头孢氨苄头孢氨苄 口服后仅口服后仅R(+)体被吸收体被吸收（一）吸（一）吸收收主动吸收有立体选择性主动吸收有立体选择性（二）代谢（二）代谢维拉帕米维拉帕米 S(-)体较体较R(+)体清除率高体清除率高 10倍倍18华法令华法令 S(-)体与白蛋白的结合率较体与白蛋白的结合率较R(+) 高。高。S(-)体体外抗凝活性是体体外抗凝活性是R(+) 的的68倍，但体内仅为倍，

8、但体内仅为25倍倍（三）蛋白结合（三）蛋白结合19四、研究手性药物的意义四、研究手性药物的意义（一）手性药物质量控制（一）手性药物质量控制（二）体内手性药物的分离分析（二）体内手性药物的分离分析（三）研制新型手性药物（三）研制新型手性药物20五、手性药物五、手性药物HPLC拆分法拆分法21 以现代以现代HPLC技术为基础，技术为基础，向手性药物中引入不对称中心向手性药物中引入不对称中心进行拆分，以达到分离目的进行拆分，以达到分离目的手性药物手性药物HPLC拆分法原理拆分法原理22（一）间接法（一）间接法 手性衍生化拆分法手性衍生化拆分法（chiral derivatization reagen

9、t, CDR）（二）直接（二）直接法法手性固定相拆分法手性固定相拆分法（chiral stationary phase, CSP）手性流动相拆分法手性流动相拆分法（chiral mobile phase, CMP）23手性衍生化拆分法（手性衍生化拆分法（CDR）特点）特点可采用常规固定相可采用常规固定相衍生化过程可同时纯化样品衍生化过程可同时纯化样品需光学纯手性试剂需光学纯手性试剂衍生化反应较繁琐费时衍生化反应较繁琐费时24 药药 物物 固定相固定相 衍生化试剂衍生化试剂麻黄碱、苯丙胺麻黄碱、苯丙胺 CSP -萘氯甲酸酯萘氯甲酸酯布洛芬、萘普生布洛芬、萘普生 CSP 萘甲基胺萘甲基胺地尔硫卓地

10、尔硫卓 RP 萘丙酰氯萘丙酰氯-肾上腺素阻断剂肾上腺素阻断剂 NP 连萘酰氰连萘酰氰萘衍生物类衍生化试剂的应用萘衍生物类衍生化试剂的应用25手性衍生化拆分手性衍生化拆分4对麻黄碱对映异构体对麻黄碱对映异构体伪麻黄碱伪麻黄碱麻黄碱麻黄碱去甲伪麻黄碱去甲伪麻黄碱去甲麻黄碱去甲麻黄碱 dldldldl衍生化试剂衍生化试剂 (+)-1-(9-芴基芴基)乙基氯甲酸酯乙基氯甲酸酯(+) -FLEC26CHCH3HO COClCHOHCHCH3NHRCHCH3HO CONRCHCH3CHOH+27仪器与设备仪器与设备 HPLC Hewlett-Packard 1090型型HPLC系统，系统， 配有三元梯度泵

11、（带柱温箱）配有三元梯度泵（带柱温箱） 自动进样系统自动进样系统（带衍生功能）（带衍生功能） 二极管阵列检测器二极管阵列检测器（DAD） Pascal工作站工作站 pH计计（Beckmen） 28色谱条件色谱条件色谱柱色谱柱 HP ODS柱，柱，200 4.6mm 5 m流动相流动相 A、纯水；、纯水；B、乙腈、乙腈柱温柱温 40 流速程序流速程序 0.0min流速流速1.5ml/min 10.0min流速流速1.5ml/min 20.0min流速流速2.0ml/min梯度条件梯度条件 0.0min B：35%30.0min B：75%29自动进样的衍生程序自动进样的衍生程序样品位置样品位置

12、0号：水号：水 1号：硼酸盐缓冲液（号：硼酸盐缓冲液（pH7.4） 2号：号：(+)-FLEC (+)-1-(9-芴基芴基)乙基氯甲酸酯乙基氯甲酸酯 3号号6号：麻黄碱样品号：麻黄碱样品30衍生程序衍生程序1-draw 0.0 l from vial 0 （水）（水）2-draw 3.0 l from vial 1（硼酸盐缓冲液）硼酸盐缓冲液）3-draw 0.0 l from vial 04-draw 1.0 l from vial 2 (+)-FLEC5-draw 0.0 l from vial 06-draw 1.0 l from vial sample7-draw 0.0 l from

13、 vial 0318-draw 2.0 l from vial 19-draw 0.0 l from vial 010-inject32 化化 合合 物物 R tRdl-去甲麻黄碱去甲麻黄碱 1.92 17.43 (l) 17.96 (d)dl-去甲伪麻黄碱去甲伪麻黄碱 2.67 17.50 (l) 18.44 (d)dl-麻黄碱麻黄碱 1.99 18.94 (l) 19.61 (d)dl-伪麻黄碱伪麻黄碱 2.67 20.84 (l) 21.80 (d)麻黄碱对映异构体与麻黄碱对映异构体与(+) FLEC衍生化反应衍生化反应33手性固定相拆分法（手性固定相拆分法（CSP）原理）原理 利用手性

14、固定相与对映体消旋物利用手性固定相与对映体消旋物相互作用，其中一个与手性固定相相互作用，其中一个与手性固定相生成不稳定的短暂的对映体复合物，生成不稳定的短暂的对映体复合物，使两种异构体在色谱柱上的保留时使两种异构体在色谱柱上的保留时间不同，从而得到分离间不同，从而得到分离34手性固定相拆分法（手性固定相拆分法（CSP）特点）特点直接、快速、有效、简便直接、快速、有效、简便容量大，适用于制备容量大，适用于制备不需对样品衍生化不需对样品衍生化价格昂贵价格昂贵35手性固定相的分类手性固定相的分类1、根据拆分过程中固定相与对映体、根据拆分过程中固定相与对映体 之间的相互作用分类之间的相互作用分类吸附型

15、、模拟酶移植型、电荷转吸附型、模拟酶移植型、电荷转移型、配体交换型移型、配体交换型362、根据固定相的材料分类、根据固定相的材料分类蛋白质类、氨基酸类、纤维素类、蛋白质类、氨基酸类、纤维素类、环糊精类、冠醚类、聚酰胺类、环糊精类、冠醚类、聚酰胺类、聚氨酯类聚氨酯类373、Pirkle型手性固定相型手性固定相Pirkle实验室研制出来的固定相实验室研制出来的固定相4、蛋白质类手性固定相、蛋白质类手性固定相将一个单分子层的手性有机分子将一个单分子层的手性有机分子通过一定间隔基连接在硅胶上通过一定间隔基连接在硅胶上38手性卵粘蛋白柱拆分盐酸硫氮卓酮的合成原手性卵粘蛋白柱拆分盐酸硫氮卓酮的合成原料料(

16、a)与中间体与中间体(b)盐酸硫氮卓酮盐酸硫氮卓酮ba固定相固定相 手性卵粘蛋白柱手性卵粘蛋白柱 (ES-OVM) （卵粘蛋白中的糖蛋白通过共价键（卵粘蛋白中的糖蛋白通过共价键的的 形式结合在硅胶上）形式结合在硅胶上）手性化合物手性化合物39手性流动相拆分法（手性流动相拆分法（CMP）原理）原理 将手性试剂添加到流动相中，利将手性试剂添加到流动相中，利用手性试剂与药物消旋体中各对映用手性试剂与药物消旋体中各对映体稳定常数的不同，以及药物与结体稳定常数的不同，以及药物与结合物在固定相上分配的差异，实现合物在固定相上分配的差异，实现对映体的分离对映体的分离40手性流动相拆分法（手性流动相拆分法（C

17、MP）特点）特点可采用常规固定相可采用常规固定相不需对样品衍生化不需对样品衍生化手性添加物本身可流出，也可更换手性添加物本身可流出，也可更换添加物的可变范围较宽添加物的可变范围较宽41常用手性添加剂常用手性添加剂配基交换型手性添加剂配基交换型手性添加剂Chiral ligand-exchange complexes（CLEC）环糊精添加剂环糊精添加剂Cyclodextrins（CD）手性离子对添加剂手性离子对添加剂Chiral ion pair complex（CIPC）42配基交换型手性添加剂配基交换型手性添加剂（CLEC）原理原理 光学活性氨基酸与金属离子鳌光学活性氨基酸与金属离子鳌 合后

18、，与药物消旋体形成配位合后，与药物消旋体形成配位 络合物，在柱上完成拆分络合物，在柱上完成拆分多为光学活性氨基酸或其衍生物多为光学活性氨基酸或其衍生物43 流动相流动相 手手 性性 配配 体体 5%20%甲醇甲醇-水水 L-苯丙氨酸苯丙氨酸 0%15%乙腈乙腈-水水 （对（对-甲苯磺酸甲苯磺酸)-L-苯丙氨酸苯丙氨酸 水（水（pH5-5.5） N，N-二丙基二丙基-L-丙氨酸丙氨酸 0%5%乙腈乙腈-水水 N-烷基烷基-L-天冬酰胺天冬酰胺固定相固定相 RP-HPLC金属离子金属离子 Cu（）常用配基交换型手性添加剂及其色谱条件常用配基交换型手性添加剂及其色谱条件44环糊精添加剂环糊精添加剂（

19、CD）原理原理 环糊精可提供手性空穴，如果环糊精可提供手性空穴，如果 待分析样品分子大小与空穴相待分析样品分子大小与空穴相 符合，则可形成环糊精包合物符合，则可形成环糊精包合物是由吡喃葡萄糖组成的花瓣形是由吡喃葡萄糖组成的花瓣形环状低聚糖：环状低聚糖：、类型类型45手性离子对添加剂手性离子对添加剂（CIPC）原理原理 对映体与手性离子对试剂形成对映体与手性离子对试剂形成 非手性离子对，与对映体因在非手性离子对，与对映体因在 流动相和固定相间分配行为不流动相和固定相间分配行为不 同而得到分离同而得到分离46三、高效毛细管电泳分析法三、高效毛细管电泳分析法 （HPCE）high performan

20、ce capillary electrophoresis 以高压电场为驱动力，以毛以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品中各细管为分离通道，依据样品中各组分之间淌度和分配系数的不同组分之间淌度和分配系数的不同而实现分离的一类液相分离技术而实现分离的一类液相分离技术47电泳电泳电渗电渗淌度淌度带电组分在电场作用下，以不同速带电组分在电场作用下，以不同速度向所带电荷相反方向迁移的现象度向所带电荷相反方向迁移的现象管内溶液在外力电场作用下整体朝管内溶液在外力电场作用下整体朝一个方向移动的现象一个方向移动的现象是推动流体前进的驱动力是推动流体前进的驱动力单位电场强度下的迁移速度单位电场强度下

21、的迁移速度电泳淌度电泳淌度电渗淌度电渗淌度48 1937年瑞典科学家年瑞典科学家Tiselius将蛋白质混合物将蛋白质混合物置装有缓冲液的管子中，当他在管子两端加电置装有缓冲液的管子中，当他在管子两端加电场时，发现样品组分根据其电荷和体积以一定场时，发现样品组分根据其电荷和体积以一定方向和速度移动，并第一次成功地从人血清中方向和速度移动，并第一次成功地从人血清中分离出白蛋白及分离出白蛋白及1、2、和和-球蛋白球蛋白 难以克服由两端高电压引起的焦耳热效应，难以克服由两端高电压引起的焦耳热效应，及温度梯度、黏度梯度、速度梯度，故无法加及温度梯度、黏度梯度、速度梯度，故无法加快分离分析速度快分离分析

22、速度49 1967年年Hjerten提出在高电场、直径提出在高电场、直径3mm的的毛细管中作自由溶液的区带电泳毛细管中作自由溶液的区带电泳 1981年年Jorjenson和和Lukacs提出使用提出使用75 m内内径径100cm的玻璃毛细管的玻璃毛细管 1984年年Terabe发展了胶束电动毛细管色谱发展了胶束电动毛细管色谱 1985年年Hjerten提出了毛细管等电聚焦提出了毛细管等电聚焦 1987年年Cohen和和Karger发表了毛细管凝胶发表了毛细管凝胶电泳的研究成果电泳的研究成果50 1988年以后，由于高效毛细管电泳商品年以后，由于高效毛细管电泳商品仪器的问世及高灵敏度柱上检测器的

23、发展，仪器的问世及高灵敏度柱上检测器的发展，HPCE研究在世界范围蓬勃开展，促进了毛研究在世界范围蓬勃开展，促进了毛细管电泳技术和理论的迅猛发展细管电泳技术和理论的迅猛发展51毛细管电泳与经典电泳的根本区别毛细管电泳与经典电泳的根本区别 HPCE是经典电泳技术与现代微柱分离相是经典电泳技术与现代微柱分离相结合的一种快速、高效的液相分离技术结合的一种快速、高效的液相分离技术 电泳过程在散热效率极高的毛细电泳过程在散热效率极高的毛细管内进行，以引入高电场强度，改善管内进行，以引入高电场强度，改善分离质量分离质量52毛细管电泳装置示意图毛细管电泳装置示意图高压电源高压电源毛细管恒温系统毛细管恒温系统

24、检测器检测器数据处理数据处理缓冲液缓冲液/样品样品缓冲液缓冲液（+）()53电渗的产生电渗的产生(-)(+)石英毛细管石英毛细管 -SiOHSiO-+ 54 电渗速度的径向分布几乎是均匀的，不电渗速度的径向分布几乎是均匀的，不会会直接引起样品组分区带扩散直接引起样品组分区带扩散55 液体在柱内壁上的速度为零，中心速度液体在柱内壁上的速度为零，中心速度为为平均速度的平均速度的2倍，直接引起样品组分区带扩散倍，直接引起样品组分区带扩散56优点优点HPCEHPLC HPCE法与法与HPLC法比较法比较理论板数理论板数分离速度分离速度进样量进样量溶剂溶剂几十万几十万/m30min150nl几不消耗几不

25、消耗几万几万/m几十几十min10 l几百几百ml低消耗低消耗微量微量高速高速高效高效57HPCE的不足的不足1、方法不如方法不如HPLC成熟成熟2、在柱检测、光路长度短在柱检测、光路长度短3、灵敏度和线性范围不如灵敏度和线性范围不如HPLC58一、原理一、原理 v = v eo + v ep = (eo + ep ) E v 运动速度运动速度 E 电场强度电场强度 v eo 电渗速度电渗速度 v ep 电泳速度电泳速度eo 电渗淌度电渗淌度 ep 电泳淌度电泳淌度59(-)(+) +- -60（二）主要分离模式（二）主要分离模式1、毛细管区带电泳毛细管区带电泳（CZE）2、胶束电动毛细管色谱

26、胶束电动毛细管色谱（MECC）3、毛细管凝胶电泳毛细管凝胶电泳（CGE）4、毛细管等电聚焦毛细管等电聚焦（CIEF）61 模式模式 缓冲液体系缓冲液体系 分分 离离 机机 理理CZE 自由缓冲溶液自由缓冲溶液 离子淌度离子淌度MECC 胶束胶束-缓冲溶液缓冲溶液 疏水性疏水性/离子性离子性CGE 凝胶凝胶-缓冲溶液缓冲溶液 分子大小、荷电数分子大小、荷电数CIEF 两性电解质两性电解质 等电点等电点621、毛细管区带电泳、毛细管区带电泳（CZE） 毛细管中仅有缓冲液，根据组分毛细管中仅有缓冲液，根据组分迁移时间或淌度不同而得到分离迁移时间或淌度不同而得到分离(-)(+)+63毛细管区带电泳特点

27、毛细管区带电泳特点1、简单、快速、分辨率高，应用范、简单、快速、分辨率高，应用范 围广围广2、从原理上讲，适用于所有具有不、从原理上讲，适用于所有具有不 同淌度的带电粒子的分离，包括同淌度的带电粒子的分离，包括 分子量为几十万的生物大分子分子量为几十万的生物大分子642、胶束电动毛细管色谱、胶束电动毛细管色谱（MECC） 在缓冲液中加入离子型表面在缓冲液中加入离子型表面 活性剂胶束，使电中性组分可按活性剂胶束，使电中性组分可按 其在胶束相和水相的分配系数不其在胶束相和水相的分配系数不 同而进行分离同而进行分离65胶束电动毛细管色谱特点胶束电动毛细管色谱特点1、是唯一能同时分离中性物质和离子、是

28、唯一能同时分离中性物质和离子 型物质的分离模式型物质的分离模式2、采用手性分配相时可分离手性药物、采用手性分配相时可分离手性药物663、毛细管凝胶电泳、毛细管凝胶电泳（CGE） 凝胶的网络结构对溶质具有分凝胶的网络结构对溶质具有分 子筛的作用，使溶质按分子大小逐子筛的作用，使溶质按分子大小逐一分离一分离(+)(-)-67毛细管凝胶电泳特点毛细管凝胶电泳特点1、可分离质荷比不随分子大小而变、可分离质荷比不随分子大小而变 的大分子如的大分子如DNA或或SDS-蛋白质复蛋白质复 合物合物2、可用于测定多肽和蛋白质分子量、可用于测定多肽和蛋白质分子量3、可加入不同添加剂而改变分离的、可加入不同添加剂而

29、改变分离的 选择性选择性684、毛细管等电聚焦、毛细管等电聚焦（CIEF） 采用两性电解质混合溶液作为载采用两性电解质混合溶液作为载体，体，pI 值大于其值大于其pH值的溶质和其带值的溶质和其带正正电，向负极移动，电，向负极移动，pI值小于其值小于其pH值的值的溶质和其带负电，向正极移动，根据溶质和其带负电，向正极移动，根据蛋白质等电点的不同达到分离蛋白质等电点的不同达到分离69AAAAAABBBBBBCCCCDDDDDEEEEEFFAAAABBBBCCCCDDDDEEEEFFFF(+)(-)GGGG毛细管等电聚焦毛细管等电聚焦70 毛细管区带电泳毛细管区带电泳（CZE）分离测定青霉素分离测定

30、青霉素发酵液中青霉素及其相关物质的含量发酵液中青霉素及其相关物质的含量分析条件分析条件毛细管毛细管 87cm75 m操作电压操作电压 30KV(+) (-)缓冲液缓冲液 20mmol/L磷酸盐（磷酸盐（pH7.5）检测波长检测波长 214nm柱温柱温 2571青霉素发酵液的高效毛细管电泳图青霉素发酵液的高效毛细管电泳图1. 青霉素青霉素G钠钠 2. 未知未知 3. 对羟基苯乙酸对羟基苯乙酸4. 邻羟基苯乙酸邻羟基苯乙酸 5. 苯乙酸苯乙酸72 胶束电动毛细管色谱胶束电动毛细管色谱（MECC）分离测定分离测定黄芩中黄芩中6种黄酮类成份种黄酮类成份分析条件分析条件毛细管毛细管 40cm50 m操作

31、电压操作电压 20KV(+) (-)缓冲液缓冲液 50mmol/L磷酸二氢钠磷酸二氢钠-12.5mmol/L 硼砂硼砂(pH8.0)：乙醇：乙醇：-环糊精环糊精(7：1：2)检测波长检测波长 275nm，0.02aufs柱温柱温 2073黄芩中黄芩中6种黄酮类成分的胶束电动毛细管色谱种黄酮类成分的胶束电动毛细管色谱1.汉黄芩甙汉黄芩甙 2. 黄芩素黄芩素 3.黄芩甙黄芩甙 4. 千层子素千层子素5. 汉黄芩素汉黄芩素 6.内标水杨酸内标水杨酸 7.白杨素白杨素74第二节第二节 光谱分析新方法及其应用光谱分析新方法及其应用（ A 法）法）一、差示分光光度法一、差示分光光度法difference

32、spectrophotometry75原原理理 两份相同浓度的供试液在不同两份相同浓度的供试液在不同的的pH介质中或经适当化学反应后，介质中或经适当化学反应后，待测物的特征光谱发生改变，干扰待测物的特征光谱发生改变，干扰物的光谱不变，故这两份溶液的物的光谱不变，故这两份溶液的A只与待测物浓度有关只与待测物浓度有关76优优点点可不经分离直接测定混合物可不经分离直接测定混合物条件条件1、待测组分在不同条件下、待测组分在不同条件下 A值应有明显改变值应有明显改变2、干扰组分在不同条件下、干扰组分在不同条件下 A值应无明显改变值应无明显改变77非那根止咳糖浆中盐酸异丙嗪的测定非那根止咳糖浆中盐酸异丙嗪的测定盐酸异丙嗪、愈创木酚磺酸钾、氯化铵等盐酸异丙嗪、愈创木酚磺酸钾、氯化铵等HClNSCH2CHN(CH3)2CH3OHClNSCH2CHN(CH3)2CH3Omax=337nm7879含对羟基苯甲酸及其酯的合剂中对羟基苯甲酸含对羟基苯甲酸及其酯的合剂中对羟基苯甲酸的测定的测定对羟基苯甲酸对羟基苯甲酸尼泊金酯尼泊金酯0.1mol/LHClpH5.9不同不同相同相同80