医学微生物学消毒与灭菌和生物安全课件.pptx
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1、基基 本本 概概 念念消毒与灭菌消毒与灭菌物物 理理 方方 法法化化 学学 方方 法法影响消毒灭菌效果的因素影响消毒灭菌效果的因素复习思考题复习思考题4/28/20222 公元公元325325年年, ,古希腊出现世界上以在传染病流行时收容病古希腊出现世界上以在传染病流行时收容病人和为穷人提供医务服务的首家医院。由于医院的客观条件人和为穷人提供医务服务的首家医院。由于医院的客观条件极差,医院感染情况非常严重。极差,医院感染情况非常严重。 产褥热是当时欧洲医院感染中造成损失最大、问题最严产褥热是当时欧洲医院感染中造成损失最大、问题最严重、研究最多、并最终得到解决的问题。重、研究最多、并最终得到解决
2、的问题。Thomas LightfootThomas Lightfoot曾认为曾认为“产院是引导产妇走向死亡之门产院是引导产妇走向死亡之门”。由于产褥热的危。由于产褥热的危害和影响,直至害和影响,直至19401940年,在某些发达国家仍有年,在某些发达国家仍有50%50%的产妇不的产妇不愿到医院分娩。愿到医院分娩。18431843年,年,HolmesHolmes发现产褥热与医生在尸检后发现产褥热与医生在尸检后不洗手就检查产妇与接生有关。不洗手就检查产妇与接生有关。 4/28/20223 英国外科医生英国外科医生Lister(1827-1912)Lister(1827-1912)首先简明细菌与感
3、首先简明细菌与感染的关系,并提出消毒的概念,并于染的关系,并提出消毒的概念,并于18671867年发表了著名年发表了著名的有关外科无菌操作技术的论文,其中大部分原则仍沿的有关外科无菌操作技术的论文,其中大部分原则仍沿用至今。用至今。 HalsteadHalstead在在John Hopkinks John Hopkinks 医院工作时,因其未婚医院工作时,因其未婚妻(手术室护士)对升汞洗手过敏,便请妻(手术室护士)对升汞洗手过敏,便请GoodyearGoodyear公司公司于于18891889年制作了两付橡胶手套,从此开创了外科手术时年制作了两付橡胶手套,从此开创了外科手术时戴手套的新纪元戴手
4、套的新纪元。4/28/20224微生物的分布微生物的分布v1、土壤中的微生物:、土壤中的微生物:v多为非致病菌,少数有致病性。多为非致病菌,少数有致病性。v芽孢菌致病;药材霉变。芽孢菌致病;药材霉变。v2、水中的微生物:、水中的微生物:v主要来自人和动物的排泄物、污物。主要来自人和动物的排泄物、污物。v常引起消化道传染病。常引起消化道传染病。v3、空气中的微生物:、空气中的微生物:v来源于人畜呼吸道的飞沫及飘扬的尘埃;来源于人畜呼吸道的飞沫及飘扬的尘埃;v常引起呼吸道传染病。常引起呼吸道传染病。4/28/20225Carbolic Carbolic Steam SpraySteam Spray
5、 4/28/20226 消毒与灭菌消毒(disinfection):杀死物体表面或环境中病原微生物的方杀死物体表面或环境中病原微生物的方法,并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物。用以消毒的法,并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物。用以消毒的药品称为消毒剂药品称为消毒剂(disinfectant)。一般消毒剂只对繁殖体有效)。一般消毒剂只对繁殖体有效)灭菌灭菌(sterilization):杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消毒:杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消毒要求高,包括杀灭细菌芽胞在内的全部病原微生物和非病原微生要求高,包括杀灭细菌芽胞在内的全部病原微生物和非病原微生物。物。抑
6、菌抑菌(bacteriostasis):抑制体内或体外微生物的生长繁殖。常用:抑制体内或体外微生物的生长繁殖。常用的抑菌剂为各种抗生素。的抑菌剂为各种抗生素。防腐防腐(antisepsis):防止或抑制体外微生物生长繁殖的方法。细菌:防止或抑制体外微生物生长繁殖的方法。细菌一般不死亡。所用药品称为防腐剂。一般不死亡。所用药品称为防腐剂。无菌无菌(asepsis):不存在活菌物体中不含活的微生物。:不存在活菌物体中不含活的微生物。无菌操作(无菌操作(antiseptic technique)指在进行外科手术或分离、转种指在进行外科手术或分离、转种及培养时防止其他微生物污染实验材料的操作方法。防止
7、微生物及培养时防止其他微生物污染实验材料的操作方法。防止微生物进入人体或其他物品的各种操作进入人体或其他物品的各种操作 Aseptic operation 、防止细菌进入人体或其它物品的操作技术、防止细菌进入人体或其它物品的操作技术4/28/20227o 灭菌与消毒的比较:杀菌更彻底。灭菌与消毒的比较:杀菌更彻底。o 消毒与防腐的比较:浓度和时间。消毒与防腐的比较:浓度和时间。o 无菌:本身无菌或灭菌处理。无菌:本身无菌或灭菌处理。o 无菌操作:保持着原生态的环境。无菌操作:保持着原生态的环境。相互比较相互比较4/28/20228v一热力消毒灭菌法一热力消毒灭菌法v二二 干燥和低温抑菌法干燥和
8、低温抑菌法v三三辐射杀菌法辐射杀菌法v四超声波杀菌法四超声波杀菌法v五五 滤过除菌法滤过除菌法用物理阻留用物理阻留方法除去细菌。方法除去细菌。干热灭菌法干热灭菌法湿热灭菌法湿热灭菌法第一节 物理消毒灭菌法4/28/20229一一. . 热力灭菌法热力灭菌法湿热湿热80经经5-10min可杀死所有细菌繁殖体和真菌可杀死所有细菌繁殖体和真菌多数无芽胞细菌经多数无芽胞细菌经55-60作用作用30-60min后死亡后死亡干热灭菌法、干热灭菌法、 湿热灭菌法湿热灭菌法4/28/202210牛奶、酒类等。牛奶、酒类等。最有效的灭菌方法。最有效的灭菌方法。预真空压力蒸汽灭菌器:灭菌速率快。预真空压力蒸汽灭菌
9、器:灭菌速率快。热力灭菌法二热力灭菌法二4/28/202211焚烧焚烧:无经济价值的污染物品、废弃物:无经济价值的污染物品、废弃物品、动物尸体。品、动物尸体。烧灼烧灼:在火焰上进行,如接种环(针)、:在火焰上进行,如接种环(针)、试管口、安瓶口的灭菌。试管口、安瓶口的灭菌。干烤干烤:适用于耐高温的玻璃器皿,如培:适用于耐高温的玻璃器皿,如培养皿,吸管、试管及干燥的玻璃注射器,养皿,吸管、试管及干燥的玻璃注射器,瓷器,某些粉剂药物等物品。置于干烤瓷器,某些粉剂药物等物品。置于干烤箱内,通电后利用高热空气进行灭菌,箱内,通电后利用高热空气进行灭菌,一般一般160-1702h 。红外线红外线:1-1
10、0 m波长最强,但只在照射波长最强,但只在照射 到的物体表面产生热效,医疗到的物体表面产生热效,医疗 器械的灭菌。器械的灭菌。脱水干燥,使脱水干燥,使大分子变性大分子变性4/28/202212干干 燥燥 箱箱4/28/202213湿热灭菌法湿热灭菌法v1 1、巴氏消毒法:利用较低温度杀灭液体中的病原菌或特定巴氏消毒法:利用较低温度杀灭液体中的病原菌或特定微生物,保持物品中不耐热成分不被破坏微生物,保持物品中不耐热成分不被破坏 61.161.162.8 30min 62.8 30min 或或 71.11571.11530s30s, 一般用于牛奶、酒类的消毒一般用于牛奶、酒类的消毒v2 2、煮沸消
11、毒法:煮沸消毒法: 100100、5-10min5-10min,可杀死细菌繁殖体,可杀死细菌繁殖体 1-2h杀灭芽胞,加入杀灭芽胞,加入2%的碳酸(氢)钠,可提高水温至的碳酸(氢)钠,可提高水温至105105 ,促进芽胞促进芽胞的杀灭,防止金属器皿生锈,的杀灭,防止金属器皿生锈,v3 3、流通蒸气消毒法:流通蒸气消毒法:用用 阿诺流通蒸汽灭菌器阿诺流通蒸汽灭菌器 或蒸笼。或蒸笼。 100100水蒸汽进行消毒,水蒸汽进行消毒,10-30min10-30min,可杀死细菌繁殖体。,可杀死细菌繁殖体。但芽胞不被全部杀灭。但芽胞不被全部杀灭。适用于食品、食具、不耐高温物品的消毒。适用于食品、食具、不耐
12、高温物品的消毒。 v4 4、间歇蒸汽灭菌法:、间歇蒸汽灭菌法:用于含糖、牛奶等培养基。用于含糖、牛奶等培养基。 100100、15-30min15-30min,3737过夜(过夜(3 3次)次)不耐受高温的物品如:鸡蛋培养基、血清培养基等,将被灭菌物品置于血清凝固器不耐受高温的物品如:鸡蛋培养基、血清培养基等,将被灭菌物品置于血清凝固器内,内, 7580 ,延长灭菌时间至,延长灭菌时间至60min,连续三次也达到灭菌的目的。连续三次也达到灭菌的目的。4/28/2022145. 高压蒸汽灭菌法 最有效的灭菌方法压力103.4kPa(1.05kg/cm2),121.3,15-30min , 杀灭包
13、括细菌芽胞在内的所有微生物。 一般普通培养基、耐高温的玻璃制品、生理盐水、一般普通培养基、耐高温的玻璃制品、生理盐水、外科手术敷料与器械等物品。外科手术敷料与器械等物品。利用密封的耐受高压的蒸汽灭菌器,在蒸汽不外溢的情况下,使锅内压力升高,容器内的温度随着水水蒸汽压力的增加而上升4/28/2022156.超高温杀菌(超高温杀菌(UHTUHT):):v 135135150150和和 2 28s8s对牛乳或其他液态食品对牛乳或其他液态食品 果汁、及果汁饮料、豆乳、茶、酒、矿泉水等果汁、及果汁饮料、豆乳、茶、酒、矿泉水等最大优点是既能杀死产品中的微生物,又能较好最大优点是既能杀死产品中的微生物,又能
14、较好地保持食品品质与营养价值地保持食品品质与营养价值。4/28/202216高压蒸气灭菌锅高压蒸气灭菌锅4/28/2022174/28/202218干热灭菌法与湿热灭菌法的区别干热灭菌法与湿热灭菌法的区别v同一温度、相同时间内,湿热灭菌法的灭菌同一温度、相同时间内,湿热灭菌法的灭菌效果较干热灭菌法好。效果较干热灭菌法好。1 1 细菌蛋白质在有水环境中易凝固变性。湿热灭菌时,菌体蛋白质较易凝细菌蛋白质在有水环境中易凝固变性。湿热灭菌时,菌体蛋白质较易凝固。湿热灭菌时,菌体吸收水分,蛋白质含水愈多,凝固所需温度降低。固。湿热灭菌时,菌体吸收水分,蛋白质含水愈多,凝固所需温度降低。 2 2 湿热穿透
15、力强。可使被灭菌物品内部温度迅湿热穿透力强。可使被灭菌物品内部温度迅速上升。速上升。 3 3 湿热蒸气有潜热存在,这种潜热迅速提高被湿热蒸气有潜热存在,这种潜热迅速提高被灭菌物体的温度灭菌物体的温度 。4/28/202219干热灭菌与湿热灭菌穿透力及灭菌效果比较 透过布层的温度() 灭菌方式 温度() 时间(h) 20层 40层 100层 灭菌效果 干热 130140 4 86 72 70以下 不完全 湿热 105.3 3 101 101 101 完全 4/28/202220v冷冻真空干燥法:在低温状态下真空抽去冷冻真空干燥法:在低温状态下真空抽去水分水分 细菌在较低的情况下,代谢较低,较长时
16、间维持生命。可用于保存菌种, 但必须降低温度,否则使环境中的水分形成冰晶,细胞外渗,电解质浓缩和蛋白质变性。v用途:保存菌种的最好方法二. 低温4/28/202221干燥与低温抑菌法干燥与低温抑菌法v干燥抑菌法:干燥抑菌法:多数细菌在空气中干燥时多数细菌在空气中干燥时停止代谢、停止代谢、很快死亡;很快死亡;干燥法常用于保存食物干燥法常用于保存食物(盐腌)(盐腌) 、中药材、中药材。o低温抑菌法低温抑菌法: :细菌在低温时新陈代谢减慢,故细菌在低温时新陈代谢减慢,故低温常低温常用作保存菌种用作保存菌种。一般放置。一般放置-20-20或或-70-70冰箱,冰箱,v冷冻真空干燥法冷冻真空干燥法: :
17、是在低温下真空抽去水分。是目前保是在低温下真空抽去水分。是目前保存菌种的最好办法。保存时间可达数十年。存菌种的最好办法。保存时间可达数十年。4/28/202222保存菌种常见的设备保存菌种常见的设备 4/28/202223(一)非电离辐射(日光与紫外线)(一)非电离辐射(日光与紫外线)波长波长210210300nm300nm之间有杀菌作用,以之间有杀菌作用,以260260266nm266nm最强,此波长的紫外线易被细胞中核酸吸收最强,此波长的紫外线易被细胞中核酸吸收杀菌机理:杀菌机理:当微生物被照射后,细胞内当微生物被照射后,细胞内DNADNA吸收紫外线,吸收紫外线, DNADNA一条链或两条
18、链上相近的胸腺嘧啶之间形一条链或两条链上相近的胸腺嘧啶之间形成二聚体改变了成二聚体改变了DNADNA的分子构型,从而干扰了的分子构型,从而干扰了干扰干扰DNA的复制与转录的复制与转录 杀菌效率与强度和时间的乘积成正比杀菌效率与强度和时间的乘积成正比紫外线灯距离照射物以不超过紫外线灯距离照射物以不超过1.2 m1.2 m为宜。为宜。三三 辐射杀菌法辐射杀菌法4/28/202224空气消毒空气消毒手术室、传染病房、微生物学无菌实验室手术室、传染病房、微生物学无菌实验室 不耐热物品的表面消毒不耐热物品的表面消毒紫外线穿透力较弱,对皮紫外线穿透力较弱,对皮肤、眼睛有损伤肤、眼睛有损伤特点:特点:应用范
19、围应用范围:人工紫外线用人工紫外线用低压水银蒸汽灯低压水银蒸汽灯产生产生uW/cm24/28/202225紫外线杀菌车紫外线杀菌车4/28/202226杀菌机理:杀菌机理:应用范围应用范围:(二)电离辐射(二)电离辐射 包括高速电子、包括高速电子、X射线、射线、和、和 射线射线:60Co 细胞中的水分被电离成细胞中的水分被电离成H+和和OH-,这些游,这些游离基是强烈的氧化剂和还原剂,能破坏微离基是强烈的氧化剂和还原剂,能破坏微生物的核酸、蛋白质、酶,使微生物死亡生物的核酸、蛋白质、酶,使微生物死亡不耐热的一次性医用塑料制品的不耐热的一次性医用塑料制品的消毒,消毒,食品、药品、生物制品的消毒,
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