课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数和3分解纤维素的微生物的分离的导学与答案(共6页).doc
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1、精选优质文档-倾情为你奉上 专题二课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数【基础知识】 一、理论基础 1筛选菌株 (1)实验室中微生物筛选的原理:人为提供有利于 生长的条件(包括营养、温度、pH等),同时 或 其他微生物生长。 (2)选择培养基:在微生物学中,将允许 种类的微生物生长,同时 和 其他种类微生物生长的培养基,称作选择培养基。(3)配制选择培养基的依据根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。例如,培养基中不加入有机物可以选择培养 微生物;培养基中不加入氮元素,可以选择培养 ;的微生物.加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。 2统计菌落数目(1)测定微生物
2、数量的常用方法有 和 。(2)稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的 足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个 。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确,一般选择菌落数在 的平板进行计数。此外,测定微生物数量的常用方法还有 直接计数。 3设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中 对实验结果的影响,提高实验结果的 。例如为了排除培养基是否被杂菌污染了,需以培养 的培养基作为空白对照。 二、实验设计 关于土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作步骤如下: 1 取样:从肥沃、湿润的土壤中取样。应先 3 cm左右,再取样,将样品装入事先准备
3、好的 中。 2制备 :准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基,将菌液稀释相同的倍数,在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显 选择培养基上的数目,因此,牛肉膏蛋白胨培养基可以作为 ,用来判断选择培养基是否起到了选择作用。 3微生物的 与观察 将10g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250 mL),充分摇匀,吸取上清液 ,转移至盛有 的生理盐水的无菌大试管中,将土样以1、101、102 依次等比稀释至107稀释度,并按照由107103稀释度的顺序分别吸取 进行平板涂布操作。每个稀释度下需要3个选择培养基、1个牛肉膏蛋白胨培养基。 将涂布好的培养皿放在30温度下培养,及时观察和记
4、录。 挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含 培养基的斜面中,观察能否产生如教材中图2-lO的颜色反应。 4细菌的计数 当菌落数目稳定时,选取菌落数在 的平板进行计数。在同一稀释度下,至少对3个平板进行重复计数,然后求出 ,并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。三:思考与讨论(1)如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数? (2)为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度?测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量,选用的稀释范围相同吗? (3) P183在该培养基的配方中,为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质? (4) P183这种培养基对微生物是否具有选择作用
5、?如果有,又是如何进行选择的? (5) P183你认为哪位同学的结果接近真实值?你认为这两位同学的实验需要改进吗?如果需要,如何改进? (6) P183你能通过设置对照,帮助A同学排除上述两个可能影响实验结果的因素吗? 专题2 课题3 分解纤维素的微生物的分离基础知识一、纤维素与纤维素酶1纤维素的化学组成: 三种元素,是一种 糖。2纤维素的分布: 是自然界中纤维素含量最高的天然产物,此外,木材、作物秸秆等也富含纤维素。3纤维素酶的作用:纤维素酶是一种 ,一般认为它至少包括三种组分,即 酶、 酶 酶,前两种酶使纤维素分解成 ,第三种酶将纤维二糖分解成 。二、纤维素分解菌的筛选 1筛选方法: 染色
6、法。2筛选原理:刚果红可以与像纤维素这样的多糖物质形成 ,但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应,当纤维素被纤维素酶分解后,红色复合物无法形成,出现以 为中心的透明圈,我们可以通过 来筛选纤维素分解菌。三、试验设计土壤中纤维素分解菌的分离的实验方案 : 分解纤维素的微生物的分离的试验流程 、 、 、 、 1土壤取样:采集土样时,应选择富含 的环境。 2选择培养: 阅读资料二“选择培养基”,回答以下三个问题:思考1纤维素分解菌选择培养基属于 培养基,原因是什么?。 思考2培养基选择作用机制是什么? 思考3若设置一个对照实验说明选择培养的作用,应控制的变量是什么? (1)目的:增加纤维素分解
7、菌的 ,以确保能够从样品中分离到所需要的微生物。(2)制备选择培养基:参照课本旁栏中的比例配制。 (3)选择培养:称取土样20 g,在无菌条件下加入装有30mL培养基的锥形瓶中,将锥形瓶固定在 上,在一定温度下振荡培养12 d,直至培养液变 。也可重复选择培养 。(4)梯度稀释: 依次将培养液稀释101107倍。思考是如何操作的?(5) 将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上制备培养基:参照课本旁栏中的比例。 倒平板操作。 涂布平板:将稀释度为104106的菌悬液各取01 mL涂布在平板培养基上,30倒置培养。 (6)刚果红染色法:挑选产生 的菌落,一般即为分解纤维素的菌落。思考4本实验流程与
8、尿素分解菌的分离实验流程有哪些异同? 3.刚果红染色法:常用的刚果红染色法有两种即 两种方法的优点与不足: 思考5为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物? 四:结果分析与评价1为了确定分离得到的是纤维素分解菌,还需要进行 实验,纤维素酶的发酵方法有 发酵和 发酵。2纤维素酶测定方法是对纤维素酶分解滤纸等纤维素所产生的 含量进行定量测定。典型例题分析【例1】分析下面培养基的配方:KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H20、葡萄糖、尿素、琼脂。请回答: (1)在该培养基的配方中,为微生物的生长提供碳源和氮源的分别 和 。(2) 想一想这种培养基对微生物是否具有选择作用?如果具有,又是如何进行
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- 课题 土壤 分解 尿素 细菌 分离 计数 纤维素 微生物 答案
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