植物组织中无机磷含量的测定(共2页).doc

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1、精选优质文档-倾情为你奉上目的意义 磷参与植物体内多种代谢，促进碳水化合物的合成、转化和运输，施磷对提高作物产量和品质有明显的效果。通过本实验掌握植物体内磷含量测定的方法及其原理。一、实验原理测定磷含量的方法主要有磷钼蓝比色法(适宜含磷量较低)和钒钼黄比色法(适宜含磷量较高)等。可直接用于植物组织可溶性磷的测定。如用于植物材料全磷含量测定，需将材料用浓H2SO4 H202消煮转化为可溶性磷。 1磷钼蓝比色法 在适宜的酸性条件下，磷酸能与钼酸铵作用形成磷钼酸按，并被抗坏血酸或氯化亚锡等还原剂还原，生成蓝色的磷钼蓝，并在650 nm处有最大吸收蜂，其颜色深浅与含磷量成正比，可直接比色测定。2钒钼黄

2、比色法 待测液中的正磷酸与偏钒酸和钼酸能生成黄色的三元杂多酸，溶液黄色的深浅与磷酸含量成正比，生成物在440nm波长有吸收高峰。可用比色法定量磷。此法的优点是黄色稳定，对显色条件要求不十分严格，操作简便，干扰物少，灵敏度较低，工作范围随选用的吸收波长而异。选用波长（nm） 400nm 440nm 470nm 490nm 测磷工作范围（mg/g） 0.75-5.5 2.0-15 4-7 7-20二、材料、设备及试剂 1材科 玉米、接骨木、瓜类、葡萄等幼苗；各种植物的根、茎、叶、种子及全株过60-80目筛干粉。 2设备 电子天平、分光光度计、恒温水浴锅、容量瓶、刻度试管、漏斗、小纸等。 3试剂 (

3、1)2.5钼酸铵溶液 称取(NH4)2MoO4鸣25g用蒸馏水溶解并定容至1000ml。 (2)10mg/L磷标准液 精确称取烘至恒重的分析纯KH2PO4 0.4398g加蒸馏水溶解定容至1000m1，摇匀；取此液10ml定容至100ml即为10mg/L磷标准液。(3)10抗坏血酸溶液（现用现配)。 (4)定磷试剂 按下列顺序及比例将各试剂混合即成。蒸馏水、6mol/L硫酸、2.5钼酸铵、10抗坏血酸按2:1:1:1(体积比)混合，贮于棕色瓶内。若变为棕黄色即不能使用。 (5)钒钼酸铵试剂A液：25g(NH4)6MO7O244H2O(钼酸铵)溶于400ml水。B液：1.25g偏钒酸铵溶于300

4、ml沸水冷却后加入250ml浓HNO3将A液缓缓倾入B液中，搅匀定容1000m1，贮于棕色瓶中。(7)6mol/L Na0H 称24gNa0H溶于100ml水。(8)0.2二硝基酚指示剂 0.2g 2,6二硝基酚(或2,4二硝基酚)溶于100ml水。(9)50mg/L磷标难液 称0.2197g经烘干的分析纯KH2PO4溶于400ml水加入25ml，3mol/LH2SO4定容1000m1，此液可久贮。三、操作方法1磷钼蓝比色法(1)样品制备 取作物组织(叶、叶鞘或茎等)用组织捣碎机或研钵制成匀浆，定容，过滤(必要时可用活性炭脱色)，滤液备用。伤流液可直接测定。(2)标难曲线制作及样品测定 取6支

5、试管，分别编号为o。5，按下表顺序加入磷标准液及其他试剂，以制作标准曲线。另取1支试管编号为6，作为样品管，按下表加人各试剂。并将各管充分摇匀，在45水浴中保温25min，以空白作对照，在分光光度计650nm处测定吸光度。以吸光度值为纵坐标，磷含量为横坐标，绘制标准曲线。并根据6号管的吸光度值，从标准曲线上查出测定液中磷含量。表一 磷钼蓝比色法测磷反应体系项目管号0123456各管含磷量（g）0246810x10mg/L磷标准液（ml）00.20.40.60.81.0样品0.2蒸馏水（ml）3.02.82.62.42.22.02.8定磷试剂（ml）3.03.03.03.03.03.03.0吸光

6、度值（A650）2钒钼黄比色法(1)样品制备(参见磷钼蓝比色法)。(2)样品测定：吸待测液5-10ml于容量瓶，加2滴二硝基酚指示剂，加6mol/LNaaOH中和至刚呈黄色，加10ml钒钼酸铵试剂，用蒸馏水定容，在440nm处比色，以空白溶液调零。(3)标准曲线制作：50ml容量瓶8个，编号07，准确吸50mg/L磷贮备标液0、1、2.5、5、7.5、10、15ml分别加入各瓶，按步骤(2)加入各试剂显色，即得：0、1.0、5、5.0、7.5、10、15磷的标准色阶，测定A440。以吸光度为纵坐标，磷标准浓度为横坐标，绘制工作曲线。四、实验结果按计算公式计算样品中磷的百分含量。样品含磷量()mxV/V1W10-4mx：标准曲线查出测定液中磷含量(g)V：样品提取液总体积(ml)V1：用于测定的样品液(ml) ：w：样品鲜重或干重(g)10-4：样品含磷量(g/g)换算成百分含量应乘系数专心-专注-专业