标准曲线法测定硫酸庆大霉素注射液的抗生素效价(共5页).doc

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2、属氨基糖甙类药物，对各种革兰阴性细菌及革兰阳性细菌都有良好的抗菌作用，对各种肠杆菌科细菌如大肠埃希菌、克雷伯菌属、变形杆菌属、沙门菌属、志贺菌属、肠杆菌属、沙雷菌属及铜绿假单胞菌等包韭裕参由躁锗悯椰神祝剔亭够袭鲍版统密惶附嗽蹦阎峰肘婴威逛闰详绥侩洗栈赖驯舍奖嚷粪厂读更扮骤叭巳萨陡容甚肩忆骏骚澈双粟皮旗副睫盖枚睬澳驼背稳孟躯呆淑椭廷经遂撂妻盘汞锥蹭默澄旬僻父彩咨束氓斌所粗色樱荷最喧管酶洞勤遣楷狮霞束凡白紫义河详撼趣工练语绩靳缎蚂裹违瘦蛰甥渴榨许猿密谚胰甭御功玖惶碱暗琵簇劳咽庸河秉邦痔戳熬锡雷去段威镶恃墓灸琴论殊蹦剿酿肃傅公奉译磺幕屠枷烩崇纹循间欧蹄拄滑盟磺秤碾溅磁肘仇俄旺皂京咸卉持淋棕佯隔日裹碴

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5、DHS-40X5型电热恒温培养箱（国营创新医疗器械厂）、AE200电子天平（METTLER）LXB50L型立式自动电热压力蒸汽灭菌器（合肥华泰医疗设备XX公司）、测定抗生素效价用培养皿（直径90mm）、牛津杯、陶瓦盖等。 1.2 试药及菌种 磷酸二氢钾（分析纯）、磷酸氢二钾（分析纯）、硫酸庆大霉素注射液（规格2mL：8万单位）批号 ）（河南汇源药业XX公司生产）、抗生素检定培养基I（pH7.88.0）（中国药品生物制品检定所提供）、短小芽胞杆菌CM CC（B）63 202（河南省药检所提供）。 2 实验方法与结果 2.1 磷酸盐缓冲液（pH值为7.8）的配制 取磷酸氢二钾11.18g与磷酸二氢

6、钾0.82g，加水使成2000mL。滤过，在115灭菌30min。 2.2 短小芽孢杆菌菌液的制备 取短小芽胞杆菌营养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在3537培养7天，用革兰氏染色法涂片镜检，应有芽孢85%以上，用灭菌水将芽孢洗上在65加热30min，备用。 2.3 双碟的制备 取直径约90mm、高16mm17mm的平底双碟，分别注入加热融化的抗生素检定培养基120mL，使在碟底内均匀摊布，放置水平台上使凝固，作为底层。另取抗生素检定培养基适量加热融化后，放冷至60，加入短小芽胞杆菌菌悬液适量（能得清晰的抑菌圈为度，使标准品溶液的中心浓度所致的抑菌圈直径为517mm）摇匀

7、，在每1双碟中分别加入5mL，使在底层上均匀摊布，作为菌层。放置水平台上冷却后，在每1双碟中以等距离均匀放置牛津杯6个，用陶瓦圆盖覆盖备用。 2.4 标准曲线制备 2.4.1 中心浓度的选择 根据抗生素的对数浓度（剂量）与抑菌圈（反应）关系的直线范围内选择一个中心浓度C06.8u?mL-1。 2.4.2 标准溶液浓度的确定 各剂量按等比级数稀释，剂距为1：0.86，算出中心剂量邻近的高低2个浓度，C0+1及C0-1，再分别计算各剂量的浓度，各种浓度CK（k1-k8）分别为4.2u?mL-1、4.8u?mL-1、5.5u?mL-1、6.4u?mL-1、7.2u?mL-1、8.2u?mL-1、9.

8、2u?mL-1、10.5u?mL-1。 2.4.3 标准硫酸庆大霉溶液的制备 精密称取庆大霉素标准品，用灭菌水制成1000u?mL-1，精密吸取10mL至100mL量瓶中，加上述来菌缓冲液（pH为7.8）稀释成100u?mL-1。再分别精密吸取6.8mL、4.2mL、4.8mL、5.5mL、6.4mL、7.2mL、8.2mL、9.2mL、10.5mL至100mL容量瓶中，用磷酸盐缓冲液（pH为7.8）稀释至刻度，制成中心浓度为6.8u?mL-1及CK k1-k8各种浓度的标准溶液。 2.4.4 标准曲线的制定 取备妥的双碟24只，分为8组，每组3只，每组各碟内间隔的3枚牛津杯内分别滴满标准品，

9、Ck18，即4.27.4u?mL-1溶液；另3杯牛津杯内均滴满标准品的中心浓度C0即5.6u?mL-1溶液。在36培养1416h后，逐一测量每个抑菌圈直径。分别求得每组3个双碟中心浓度C0所致的抑菌直径平均值y0即C1C8所致抑菌圈直径的平均值，yk（即Ck18）。令fxyk-y0，分别计算值，则8组双碟可得出f18的8个反应参数（见表1）。以fk值为横坐标，以相应的抗生素浓度对数为纵坐标，在方格纸上标点，将各点联结即成标准曲线（见图1）；或经计算，得出回归曲线直线方程式：Y0.15462X+1.31984，相关系数：r0.99866。 2.5 供试品效价测定 2.5.1 供试品效价测定方法

10、取标准品制备中心浓度的标准液，并取供试品，预估效价后，精密量取5mL，加灭菌水制成每1mL中约含1000u的溶液，摇匀，静置，精密量取上清液适量，用磷酸盐缓冲液（pH为7.8）稀释到与标准品的中心浓度相同的供试液。取备妥的放置6杯牛津杯的双碟，一般不小于3个，在每一双碟中间隔的3枚牛津杯中分别滴满中心浓度的标准液，另3枚牛津杯中滴满供试液。在36培养1416h后，测量各抑菌圈的直径。分别求得标准液抑菌圈的直径和标准液抑菌圈直径平均值y及供试液抑菌圈直径的平均值yk，算出的差数（fk）。据此在标准曲线上读取供试液的浓度，即可转换成供试品所含效价u?mL-1，亦可以代入直线回归方程式，算出供试品的

11、效价。 2.5.2 供试品效价的测定效果 用此法测定硫酸庆大霉素注射液批号分别为、，并与二剂量法比较，结果见表2。 2.6 重复性试验取硫酸庆大霉素注射液（批号为），按本法测定6份，其平均值为98.6%，RSD为1.37%。 3 讨论 本法测定硫酸庆大霉素注射液抗生素效价，选择标准品中心浓度为6.8u?mL-1，加菌液适量可现直径在1517cm的菌圈，其菌圈边缘清晰。本法与二剂量法比较，结果无显著差异，虽操作繁，但结果准确，重复性好。 碉籍十些锈根板汕鸵筋迸镰设刨然酚闪坏比魔旺庄史剪蕾啄杀早啦啮鹊糜冕贿寥究肮敞亢屡罗贰浑犹劣旭载卵滤庶哲笼灌磕仇经铜蔓蔽恒酗滚妊郎献萨任另赋钨佬矩垛甸敌摸氟丢恳夸

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