山药多糖对葡萄糖苷酶抑制实验设计(共6页).doc

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1、精选优质文档-倾情为你奉上山药多糖提取物对葡萄糖苷酶的抑制实验2 0 1 6 年5 月专心-专注-专业一所需试剂（1）PBS缓冲液称取8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至6.8，最后加蒸馏水定容至1L称取NaCl8g，KCl0.2g，Na2HPO412H2O3.63g,KH2PO40.24g，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至6.8，加水定容至1L，常温保存备用。实际配制500ML即可。（2）3 mmol/L 谷胱甘肽溶液谷胱甘肽分子量：307.32，称取46.1mg谷胱甘肽定容至50ml蒸馏水

2、中，即为3 mmol/L 谷胱甘肽溶液。（3）0.01 mol/L PNPG 溶液 4-硝基苯-D-吡喃葡萄糖苷分子量：301.25,称取150.6mg定容至50ml蒸馏水中，即为0.01 mol/L PNPG 溶液。（4）0.2 mol/L Na2CO3 溶液Na2CO3分子量：105.99，称取2.12g定容至100ml,即为0.2 mol/L Na2CO3 溶液一 实验流程1】酶活性的测定 1.检测样配置取67 mmol/L 磷酸盐缓冲液（pH 6.8）1.4 mL、3 mmol/L 谷胱甘肽溶液40 L，0.01 mg/mL -葡萄糖苷酶溶液60 L，37 保温10 min 后，加0.

3、01 mol/L PNPG 溶液100 L，摇匀，37 保温继续反应10 min，加入0.2 mol/L Na2CO3 溶液800L 终止反应，于400 nm 波长处测定吸光值.2. 参比配置取67 mmol/L 磷酸盐缓冲液（pH 6.8）1.4 mL、3 mmol/L 谷胱甘肽溶液40 L，水60 L，37 保温10 min 后，加0.01 mol/L PNPG 溶液100 L，摇匀，37 保温继续反应10 min，加入0.2 mol/L Na2CO3 溶液800L 终止反应，于400 nm 波长处测定吸光值.检测样吸光值为参比吸光值为2】多糖提取物抑制-葡萄糖苷酶活性的测定1.待测样配置

4、A配置浓度为2 mg/mL 的多糖酸性水提取物分别取溶液20、40、60、80、100、150、200 L，于10mL塑料试管中各加入67 mmol/L pH 6.8 的磷酸缓冲液至1.4mL加3 mmol/L 谷胱甘肽溶液40 L0.01 mg/mL -葡萄糖苷酶溶液60 L，37 保温10 min 加0.01 mol/L PNPG 溶液100 L，摇匀37 保温继续反应10 min加入0.2 mol/L Na2CO3 溶液0.8 mL 终止反应于波长400 nm 处测定吸光值B配置浓度为2 mg/mL 的多糖酸性氯化钠提取物分别取溶液20、40、60、80、100、150、200 L，于1

5、0mL塑料试管中各加入67 mmol/L pH 6.8 的磷酸缓冲液至1.4mL加3 mmol/L 谷胱甘肽溶液40 L0.01 mg/mL -葡萄糖苷酶溶液60 L，37 保温10 min 加0.01 mol/L PNPG 溶液100 L，摇匀37 保温继续反应10 min加入0.2 mol/L Na2CO3 溶液0.8 mL 终止反应于波长400 nm 处测定吸光值C配置浓度为2 mg/mL 的多糖中性水提取物分别取溶液20、40、60、80、100、150、200 L，于10mL塑料试管中各加入67 mmol/L pH 6.8 的磷酸缓冲液至1.4mL加3 mmol/L 谷胱甘肽溶液40

6、 L0.01 mg/mL -葡萄糖苷酶溶液60 L，37 保温10 min 加0.01 mol/L PNPG 溶液100 L，摇匀37 保温继续反应10 min加入0.2 mol/L Na2CO3 溶液0.8 mL 终止反应于波长400 nm 处测定吸光值2.空白样配置取水100 L各加入67 mmol/L pH 6.8 的磷酸缓冲液至1.4mL加3 mmol/L 谷胱甘肽溶液40 L0.01 mg/mL -葡萄糖苷酶溶液60 L，37 保温10 min 加0.01 mol/L PNPG 溶液100 L，摇匀37 保温继续反应10 min加入0.2 mol/L Na2CO3 溶液0.8 mL

7、终止反应于波长400 nm 处测定吸光值空白样吸光度3.参比配置、分别取水20、40、60、80、100、150、200 L，于10mL塑料试管中各加入67 mmol/L pH 6.8 的磷酸缓冲液至1.4mL加3 mmol/L 谷胱甘肽溶液40 L0.01 mg/mL -葡萄糖苷酶溶液60 L，37 保温10 min 加0.01 mol/L PNPG 溶液100 L，摇匀37 保温继续反应10 min加入0.2 mol/L Na2CO3 溶液0.8 mL 终止反应于波长400 nm 处测定吸光值对-葡萄糖苷酶活抑制率计算公式如下：注：A 样品为加有样品反应后的吸光度；A 本底为只加有样品的吸光度；A 空白为不加入样品反应后的吸光度。本底吸光度（磷酸缓冲液吸光度）酸性水提编号吸光值抑制率IC50 值20406080100150200酸性氯化钠提编号吸光值抑制率IC50 值20406080100150200中性水提编号吸光值抑制率IC50 值20406080100150200