PBS缓冲液的配制方法(共9页).doc

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1、精选优质文档-倾情为你奉上PBS缓冲液配方不管是免疫组化，还是细胞培养中，常用到PBS缓冲液，下面是我们实验室的配方，供大家参考。我们实验室的配方：A液：0.1mol/L磷酸二氢钾：磷酸二氢钾（KH2PO4，MW136.09）1.361g，加双蒸水至100ml。B液：0.1mol/L磷酸氢二钠：酸酸氢二钠（Na2HPO4.2H2O，MW177.99）1.78g，加双蒸水至100ml。或者酸酸氢二钠（Na2HPO4.12H2O，MW358.14）3.58g，加双蒸水至100ml。pH A液 （ml） B液（ml） 5.60 9.50 0.255.91 9.00 1.006.24 8.00 2.0

2、06.47 7.00 3.006.64 6.00 4.006.81 5.00 5.006.98 4.00 6.007.17 3.00 7.007.38 2.00 8.007.73 1.00 9.008.04 0.50 9.50一般免疫组化用PBS都只包含Na2HPO412H2O（磷酸氢二钠） NaH2PO42H2O（磷酸二氢钠）Nacl 用于细胞培养的PBS需含有氯化钾称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可0.01MPBS缓冲液 称取NaCl8g，KCl0.

3、2g，Na2HPO412H2O3.63g,KH2PO40.24g，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4，加水定容至1L，常温保存备用。PBS是最普遍不过的实验室缓冲液，但其配方各异。以下是我的总结：母液的配制：0.2MNa2HPO4：称取71.6gNa2HPO4-12H2O，溶于1000ml水0.2MNaH2PO4：称取31.2gNaH2PO4-2H2O，溶于1000ml水各种浓度PB(pH=7.4)的配制：先配0.2MPB(pH=7.4，100ml)：取19ml0.2mol/L的NaH2PO4，81ml0.2mol/L的Na2HPO4,即可。然后只需将0.2MPB(pH=7.4)按

4、相应比例适当稀释即可，如：0.1MPB（PH=7.4）：取500ml0.2MPB，加水稀释至1000ml即可。0.01MPB（PH=7.4）：取50ml0.2MPB，加水稀释至1000ml即可。0.02MPB（PH=7.4）：取100ml0.2MPB，加水稀释至1000ml即可。若需要NaCL的话，加入NaCL至0.9%（g/100ml）即可。另：其它各种另PH值的0.2MPB（100ml)配方：pH0.2MNaH2PO4（ml）0.2MNa2HPO4（ml）5.793.56.55.89285.990106.087.712.36.185156.281.518.56.377.522.56.473

5、.526.56.568.531.56.662.537.56.756.543.56.851496.945557.038627.133677.228727.323777.419ml81ml7.516847.613877.710.50.57.88.591.57.97938.05.394.7磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffer, PB），磷酸氢二钠和磷酸二氢钠缓冲液配方磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffer, PB）试剂： NaH2PO42H2O Na2HPO412H2O配制方法：配制时，常先配制0.2mol/L的 NaH2PO4和0.2mol/L的Na2HPO4，两者按一定比例混合

6、即成0.2mol/L的磷酸盐缓冲液（PB），根据需要可配制不同浓度的PB和PBS。（1）0.2mol/L的 Na2HPO4；称取Na2HPO4.12H2O 31.2g(或 NaH2PO4H2O 27.6g)加重蒸水至1000ml溶解。（2）0.2mol/L的 Na2HPO4：称取NaHPO4.12H2O 71.632g（或 Na2HPO47H2O 53.6g或 Na2HPO42H2O 35.6g）加重蒸水至1000ml溶解。（3）0.2mol/L pH7.4的PB的配制：取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4和81ml 0.2mol/L的 Na2HPO412H2O,充分混合即为0.2m

7、ol/L的PB（pH约为7.47.5）。若pH偏高或偏低，可通过改变二者的比例来加以调整，室温保存即可。0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH5.78.0）pH 0.2mol/L NaH2PO4(ml) 0.2mol/L Na2HPO4(ml)5.7 93.5 6.55.8 92.0 8.05.9 90.0 10.06.0 87.7 12.36.1 85.0 15.06.2 81.5 18.56.3 77.5 22.56.4 73.5 26.56.5 68.5 31.56.6 62.5 37.56.7 56.5 43.56.8 51.0 49.06.9 45.0 55.07.0 39.0 61.0

8、7.1 33.0 67.07.2 28.0 72.07.3 23.0 67.07.4 19.0 81.07.5 16.0 84.07.6 13.0 87.07.7 10.5 89.57.8 8.5 91.57.97.0 93.08.05.3 94.7关于磷酸缓冲溶液的知识，我在网上搜索了好多帖子，但是还是不能确定正确的答案。现在把他们链接过来，希望有高手们参与讨论，我会把最终的正确解答整理出来，提供给大家。 PBS可以为三种溶液的英文缩写，分别是1.磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffered solution）、2.磷酸盐缓冲盐水（phosphate buffered saline）

9、及 3.磷酸盐缓冲钠（phosphate buffered sodium），其配制方法不同，pH值不同，发挥的生物学作用亦不完全相同。如无特殊说明，生物学上常用的PBS是中性磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffered solution）。无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS）（0.15Mol/L PH 7.2）NaCl 8.0gKCl 0.2gNa2HPO4 1.15g（如为Na2HPO412H2O，则为2.89g）KH2PO4 0.2g将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中，完全溶解后，115高压灭菌10min15min，存在4冰箱中备用。此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培

10、养物。我们用的都是第二种问题1：磷酸盐缓冲盐水（phosphate buffered sodium），为什么用第三种或第一种呢: 这么多年以来我都以为PBS就是磷酸盐缓冲溶液，其他两种说法的英语名称常见到，不过我一直都以为他们是差不多的东西。不同的汉语翻译倒是第一次听说。 我们公司用的PBS有很多种，抗体组用的中和PBS配方就比较简单，没有K+离子， 只起到缓冲PH的作用；Na2HPO4+ KH2PO4 按照不同比例混匀，可以得到不同PH的缓冲液，用于不同目的，这个在分子生物学中用得很多； 用于活细胞或者细菌处理的，为了保持渗透压，会加入其他的溶液，最常见的就是NaCl 和 KCl调节离子浓度

11、。以上是个人的理解，欢迎批评。:问题2：既然抗体组的PBS是起到缓冲PH的作用，那加入80G的NACL作用是什么？需要平衡渗透压吗？还有加入K离子的是不是因为细胞上NA-K泵的原因啊，血清里面又没有细胞，何来NA-K泵一说啊？ 我觉得之所以这么配，其实就是对血清中缓冲环境的一种模拟罢了，血清里面又没有细胞，何来NA-K泵一说啊？ 我没说血清撒。 我们用的又没加K，我是说加了K的的问题3：不加NACL会怎么样啊？多省钱啊 在中和磷酸盐缓冲液中，NaCl的主要作用应当是保持一定的离子浓度，以维持抗体的活性。在离子浓度过高或过低的情况下，蛋白质都会变性，抗体当然不例外。ps:哺乳类需用生理盐水浓度是0.9%。称取0.9克氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，稀释到100毫升。鸟类需用的生理盐水浓度是0.75%。称取0.75克氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。两栖类需用的生理盐水浓度是0.65%。称取0.65克氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。/size/font专心-专注-专业