临床基础检验学:尿液有形成分分析仪检验课件.ppt
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1、二二 尿液有形成分分析仪检验尿液有形成分分析仪检验尿液检验的整体化问题尿液检验的整体化问题化学成分化学成分定性筛选定性筛选物理检查物理检查理学结果理学结果细胞管型细胞管型形态确认形态确认LIS系统系统有形成分有形成分-分析实验方法分析实验方法1.传统离心法2.不离心直接用血球计数池滴量尿定量计数法3.标准镜检法4.尿沉渣工作站5.流式细胞技术尿液有形成分分析仪6.数字影像拍摄技术尿液有形成分分析仪镜检法的缺点镜检法的缺点v 费时费力v 重复性差v 客观性不够(人员之间的差异大)v 实验室间结果不具可比性v 难以标准化显微镜检查的影响因素显微镜检查的影响因素v镜检一滴沉渣的液量不同 v盖片或计数
2、板的差异v视野数目和位置的差异 v成份识别上的人员差异v显微镜视野大小的差异 显微镜检查的影响因素显微镜检查的影响因素v标本在分析前形态改变 v标本混匀不当v离心的尿量不同 v离心速度和时间不同v尿沉渣重悬的液量不同 v尿沉渣重悬的方法不同实验室实验室检验员检验员RBCRBCW BCW BCECECCastCastBactBact1 110-15/HPF10-15/HPF+A A2 27-10/HPF7-10/HPF+-3 33-5/HPF3-5/HPF+-1 110-15/HPF10-15/HPF+-B B2 25-7/HPF5-7/HPF+-3 350-70/HPF50-70/HPF3-5
3、/HPF3-5/HPF+-不同检验员间镜检结果的差异不同检验员间镜检结果的差异050100150200250300350400450500RBC count (/mL)Sample 1Sample 2Sample 3Sample 4Sample 5原液400G, 5min500G, 5min 500G, 15min不同离心条件上清液中不同离心条件上清液中RBCRBC的残留量的残留量全自动尿液有形成分分析仪分类全自动尿液有形成分分析仪分类一、全自动尿液有形成分分析仪一、全自动尿液有形成分分析仪(流式细胞技术)(流式细胞术)(流式细胞术+电阻抗原理)电阻抗原理)二、全自动尿液有形成分分析仪二、全自
4、动尿液有形成分分析仪(数字影像拍摄技术) (影像分析术(影像分析术+自动粒子识自动粒子识别系统)别系统)一、全自动尿液有形成分分析仪一、全自动尿液有形成分分析仪(流式细胞技术)(一):检测原理(二):检测参数(三):方法学评价(四):质量保证(五):临床意义(一):全自动尿液有形成分分析仪(一):全自动尿液有形成分分析仪(流式细胞技术(流式细胞技术 )检测原理)检测原理设计思路与显微镜检测原理迥然不同 1:组成2:染色原理3:有形成分检测1:组成:组成 光学检测系统 液压系统(机) 电阻抗检测系统2:染色原理(基于流式):染色原理(基于流式)所用染料:菲啶(ding)与羧花氰,有着共同的特性:
5、 与细胞结合速度快 背景荧光低 荧光强度与细胞和染料的结合程度成正比2:染色原理:染色原理菲啶:使细胞核酸成分DNA着色,在480nm光波激发时,产生610nm的橙黄色光波。用于区分:有核细胞和无核细胞,如白细胞与红细胞,病理管型与透明管型等。2:染色原理:染色原理羧花氰: 穿透能力强,与细胞膜、核膜和线体的脂质成分结合,在460nm光波激发时,产生505nm的绿色光波。主要用于: 区分细胞大小,如上皮细胞与白细胞等3:有形成分检测:有形成分检测 定量的尿液标本经稀释、加温和染色后,喷射入鞘液流动池。 样品从样品喷嘴出口进入鞘液流动池时,被鞘液鞘液包围,使有形成分以单个纵列的形式,沿中心竖轴线
6、依次通过流动池,快速通过氩激光检测。3:有形成分检测:有形成分检测每个有形成分(颗粒)被氩激光光束照射,产生不同程度的荧光强度。荧光强度与有形成分和染料的结合程度成正比。3:有形成分检测:有形成分检测仪器将捕捉到的荧光强度(Fl)前向荧光脉冲宽度(Flw)前向散射光强度(Fsc)前向散射光脉冲宽度(Fscw)电阻抗等信号(DC)3:有形成分检测:有形成分检测转变成电信号,进行分析、综合识别和计算得到细胞大小、长度、体积和染色质长度等资料;并做出红细胞、白细胞、细菌、管型等的散点图及定量报告,最后得到每个尿液标本的直方图 和散射图。3:有形成分检测:有形成分检测 荧光强度 (Fl):主要反映细胞
7、染色质的强度。 荧光脉冲宽度(FIW):主要反映细胞染色质的长度。3:有形成分检测:有形成分检测 前向散射光强度(Fsc):主要反映细胞大小。前向散射光脉冲宽度(Fscw):主要反映细胞长度。电阻抗大小:主要与细胞体积成正比。(二):检测参数(二):检测参数1:定量参数2:标记参数3:FlFsc、FscwFlw等散点图4:红细胞的信息5:其他信息1 1:定量参数:定量参数红细胞(RBC/l)白细胞(WBC/l)上皮细胞(epithelial cell,EC/l)管型(cast,CAST/l)细菌(bacterium,BACT/l)电导率(Conductivity,mS/cm)2 2:标记参数:
8、标记参数病理管型(pathologic cast,Path. CAST)小圆上皮细胞(small round cell,SRC)类酵母细胞(YLC)结晶(X-TAL)精子(sperm,SPERM) 3 3:FlFscFlFsc、FscwFlwFscwFlw等散点图等散点图(1)红细胞:直径大约为8.0m,没有细胞核和线粒体,常部分溶解成小红细胞碎片,呈现明显的大小不等。在Fl-Fsc散点图中,分布区域的特点为Fl极低和Fsc大小不等。 3 3:FlFscFlFsc、FscwFlwFscwFlw等散点图等散点图(2)白细胞:直径大约为10m,有细胞核,因此有高强度的前向荧光和前向散射光强度。出现
9、在Fl-Fsc散点图中。 3 3:FlFscFlFsc、FscwFlwFscwFlw等散点图等散点图(3)细菌:体积小但含有DNA,所以前向散射光强度要比红细胞、白细胞弱,荧光强度比红细胞强但比白细胞弱,出现在Fl-Fsc及Fscw-Fl散点图中。3 3:FlFscFlFsc、FscwFlwFscwFlw等散点图等散点图(4)上皮细胞:种类较多且大小不等,但不管何种类型的上皮细胞均有细胞核。主要分布在Fscw-Flw散点图左上角。3 3:FlFscFlFsc、FscwFlwFscwFlw等散点图等散点图(5)管型:出现在Fscw- Flw散点图中。 透明管型由于管型体积大和不含内含物,有极高的
10、前向散射光脉冲宽度和微弱的荧光脉冲宽度; 病理管型体积与透明管型相似,但含有线粒体和细胞核,所以有极高的前向散射光脉冲宽度和荧光脉冲宽度。 3 3:FlFscFlFsc、FscwFlwFscwFlw等散点图等散点图(6)真菌和精子:出现在Fl-Fsc散点图中。细胞含有RNA和DNA ,有很高的荧光强度,且其散射光强度与红、白细胞相似,故分布在红、白细胞之间的区域。3 3:FlFscFlFsc、FscwFlwFscwFlw等散点图等散点图(6)真菌和精子:真菌的前向散射光脉冲宽度小于精子细胞脉冲宽度,据此,两者可得以区别。在低浓度时,区分精子细胞与真菌有一定的难度;而在高浓度时,部分真菌对红细胞
11、计数又有交叉作用。 3 3:FlFscFlFsc、FscwFlwFscwFlw等散点图等散点图(7)结晶:在染色过程中不着色,其Fl较红细胞更低。由于结晶的多样性、大小,Fsc的变化,故其散射光强度分布很宽。3 3:FlFscFlFsc、FscwFlwFscwFlw等散点图等散点图草酸钙散于Fl-Fsc散点图中,贴近Y轴分布。尿酸盐结晶于散点图中,与红细胞散点交叉分布。4 4:红细胞的信息:红细胞的信息红细胞信息主要提示红细胞的均一性: 仪器将80红细胞前向散射光强度84 (Fsc)ch,称为均一性红细胞。 80红细胞前向散射光(Fsc)126ch称为非均一性红细胞。介于两者之间的即为混合性红
12、细胞。4 4:红细胞的信息(第:红细胞的信息(第5 5版)版)70%红细胞前向散射光(Fsc) 100 ch,且Fsc-DW 50 ch,提示为非肾小球性血尿。70%红细胞前向散射光(Fsc) 70 ch,且Fsc-DW 50 ch,提示为肾小球性血尿。70%红细胞前向散射光(Fsc)在70与100之间,且Fsc-DW50 ch,为混合性血尿。5 5:其他信息:其他信息提供:非溶血性红细胞数量和百分率。红细胞平均荧光强度、红细胞平均散射光强度和红细胞荧光强度分布宽度标准差。白细胞平均前向散射强度等参考信息。二、全自动尿液有形成分分析仪二、全自动尿液有形成分分析仪(数字影像拍摄技术)(数字影像拍
13、摄技术) 人工显微镜检查原理,直观地观察有形成分的形态。(一):检测原理(二):检测参数(三):方法学评价(四):质量保证(五):临床意义 (一)、检测原理 由动力学液流进样到一个流动的标本室,在相差显微镜下,数码摄像系统对每个层流经过的样品摄像,计算机进行图像分析,对尿中有形成分的大小、对比度、形状、质地特征进行提取,运用形态识别软件进行有形成分的分类和定量报告。 还可以通过计算机对每个检测样品的存储图像进行人工重新判定,可任意选取可疑的成分进行人工复核,对错判和误判的部分予以人工纠正。 修饰(二):检测参数v不同的品牌可有不通的报告参数;v基本参数:红白细胞、白细胞团、上皮细胞、管型、结晶
14、、细菌等;v其他细化参数:多;(三、1)方法学评价、1 1、全自动尿液有形成分分析仪、全自动尿液有形成分分析仪 (数字影像拍摄技术)(数字影像拍摄技术)目前主要的型号目前主要的型号进口:IQ-200系列(动态)进口:郎迈系列 (静态)国产:重庆天海系列、浙江龙鑫系列(静态)(三、(三、1):方法学评价):方法学评价优点:无污染 定量简便 高效精确度高 结果准确易于质控(要求较高) 可以修饰 直观 不用离心(三、(三、1):方法学评价):方法学评价缺点:多种因素易导致图像模糊,导致假阳性真菌、结晶的干扰非磷状上皮细胞、结晶、管型等仍要依靠显微镜检查许多成分需要人工复核(机上)部分样品确实需要复检
15、(三、2)方法学评价2、全自动尿液有形成分分析仪 (流式细胞技术)优点: 不离心,自动进样 用量少,速度快,效率高 报告多个参数 定量(三、2)方法学评价优点 采集的信息量大,计数每份标本的细胞数量明显高于手工显微镜检查。 方法程序统一,易于标准化和质量控制,具有手工操作无法比拟的重复精度和极低的互染率。(三、2)方法学评价缺点: 假阳性较高; 不能鉴别异常细胞、滴虫等; 大量细菌、酵母菌还会干扰计数; 容易漏检影红细胞; 不能明确病理管型的分类 ;(三、(三、3 3):方法学评价):方法学评价尿液有形成分分析仪+尿干化学分析仪的意义补充:对于细菌的检验 :对于白细胞的检验 :对单核细胞的检验
16、 :对其他有形成分的补充验证:红细胞 :白细胞四:质量保证四:质量保证v分析前质量控制v分析中质量控制v分析后质量控制四:质量保证四:质量保证(一):分析前质量控制定义:从医生申请至将尿液送到检验科的质量控制,包括样品的采集、运输和保存。项目开展前:要对临床医生、护士及运送人 员定期培训; :加强与临床医生沟通与协调;样品采集前:注意患者饮食、用药和生活状态; :对患者进行告知(注意事项、采集 方法)样品采集后:正确的运送方式; :尿液标本要求新鲜; :正确的保存方式;四:质量保证四:质量保证(二)、分析中质量控制性能验证1、干化学分析仪 阴性和阳性符合率;2、尿液有形成分分析仪 精密度、携带
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- 临床 基础 检验 尿液 有形 成分 分析 课件
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