培养基的制备与灭菌(共4页).doc
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1、精选优质文档-倾情为你奉上实验五 培养基的制备与灭菌一、目的要求1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。2. 掌握培养基的配置方法。3. 掌握干热灭菌和高压蒸汽灭菌的操作方法。二、基本原理 正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础。由于微生物种类及代谢类型的多样性因而用于培养微生物的培养基的种类也很多,它们的配方及配制方法虽各有差异。但一般培养基的配制程序却大致相同例如器皿的准备,培养基的配制与分装,棉塞的制作,培养基的灭菌,斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本环节大致相同。本实验配置牛肉膏蛋白胨培养基、配方如下:牛肉膏 3.0g蛋白胨 10.0 gNaCl
2、5.0 g水 1000mlpH 7.47.6三、实验材料1. 药品:牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/LHCL、NaOH。2. 仪器及玻璃器皿:天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿等。3. 其他物品:药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。(一)玻璃器皿的洗涤和包装1玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中用毛刷刷洗,然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡,再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。2灭菌前玻璃器皿的包装(1) 培养皿的包扎:培养皿由一盖一底组成一套,可
3、用报纸将几套培养皿包成一包,或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内,加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。图8-1 移液管的包扎(2) 移液管的包扎:在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉),它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内,并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右,棉花自身长度约11.5cm。塞棉花时可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜,吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条,然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端,约成45角,折叠纸条包住尖端,用左手握住移液管身,有手将移液管压紧在桌面上向
4、前搓转,以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条,折叠打结,准备灭菌。(二)培养基的配置1) 称量:一般可用0.01g天平称量配制培养基所需的各种药品,先按培养基配方计算出各成分的用量然后进行准确称量。2) 溶解:将称好的药品置于一烧杯中,先加入少量水(根据实验需要可用自来水或蒸馏水),用玻璃棒搅动,加热溶解。3) 定容:待全部药品溶解后,倒入一量筒中,加水至所需体积。如某种药品用量太少时,可预先配成较浓溶液,然后按比例吸取一定体积溶液,加入至培养基中。4) 调pH:一般用pH试纸测定培养基的pH。用剪刀剪出一小段pH试纸,然后用镊子夹取此段pH试纸,在培养基中蘸一下,观看其pH范围,如培养基偏酸或偏碱
5、时,可用1mol/L NaoH或1mol/L HCl溶液进行调节。调节pH时,应逐滴加入NaOH或HCI溶液,防止局部过酸或过碱,破坏培养基中成分。边加边搅拌,并不时用pH试纸测试,直至达到所需pH为止。5) 过滤:用滤纸或多层纱布过滤培养基。一般无特殊要求时,此步可省去。注意事项:(1)蛋白胨很容易吸湿、在称取时动作要迅速。称药品是严防药品混杂。(2)在琼脂熔化过程中,应控制火力,一目培养基因沸腾而溢出容器。同时,需不断搅拌,以防琼脂糊底烧焦。配置 培养基时,不可用铜或铁锅加热溶化,以免金属离子进入培养基,影响细菌生长。(三)培养基的分装 根据不同需要,可将已配好培养基分装入试管或三角瓶内,
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