分子生物学检测实验室技术要求与质量控制PPT课件.ppt

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1、1分子生物学检测实验室技术要求与质量控制二OO四年六月2概况一点击此处输入相关文本内容点击此处输入相关文本内容整体概述概况三点击此处输入相关文本内容点击此处输入相关文本内容概况二点击此处输入相关文本内容点击此处输入相关文本内容3实验室技术要求 总体要求 质量控制 质量保证4实验室总体要求 实验室分区要求 实验室工作人员要求 安全防护 废弃物处理 结果判断与验证5实验室分区要求设施和环境要求各工作区域设置缓冲间，缓冲间的压力为负压（或上设抽风装置），与其相连的工作间为正压，工作间与缓冲间之间宜安装磁性连锁装置。不同功能的核酸检验工作区应是分隔独立的工作室，并有明显的标志，各区间不能直通。各区之间

2、如果是紧密相连，需安装物品传递舱。每个工作区域的顶部应安装紫外灯，紫外灯的波长为254 nm，安装数量为每20 m2安装一支40W的紫外灯，灯与地面的距离不宜超过（2.00.1）m。6实验室分区要求 工作区域的设置及要求 核酸检验区 试剂贮存和准备区; 样品制备区; 核酸制备区 扩增区; 扩增产物分析区 蛋白质检验区 蛋白质分离纯化区 蛋白质检测区 其它区域 设置洗涤消毒室（洗涤、消毒、制备纯水和/或双蒸水、制冰等）、高速/超高速离心机室、低温/超低温冰箱室等。7主要功能：原装试剂和配制试剂的贮存，所有试剂的配制与分装。工作区域的压力要求：未设缓冲间的试剂贮存和准备区，工作区域为正压。注意事项

3、：当试剂经质检合格后，应将其分装贮存备用，贮存试剂的分装体积根据通常在实验室内一次测定所需的扩增反应数决定。用于扩增的试剂应冰冻贮存。核酸检验区各区功能 试剂贮存和准备区8核酸检验区各区功能 样品制备区主要功能：实验室样品的混样和测试样品的制备。工作区域的压力要求：未设缓冲间的样品制备区，工作区域为负压或减压，可安装排风系统。注意事项：此区应远离其它实验操作区；粉碎样品时的器皿应单独使用，所用的器具在使用前应经过彻底清洗并高压消毒，防止交叉污染；称取的测试样品应加盖后再移至样品核酸制备区。9核酸检验区各区功能 核酸制备区主要功能：核酸的提取纯化与贮存；核酸含量的测定；测试样品DNA的保存。工作

4、区域的压力要求：未设缓冲间的核酸制备区，工作区域为负压或减压，可安装排风系统。注意事项：已纯化的核酸应保存于20或80，避免反复冻融；阳性和阴性标准物质DNA可调整至常用的使用浓度后分装并冷冻保存。10核酸检验区各区功能 扩增区主要功能：PCR扩增反应体系的配制和模板的加入，核酸扩增。工作区域的压力要求：未设缓冲间的扩增区，工作区域为负压或减压，可安装排风系统。注意事项：严格限制无关人员出入并减少在本区内走动；加样应在超净工作台（生物安全柜）内进行，超净工作台的气流方向宜选择垂流式；巢式PCR的第二次加样必须在此区进行。11核酸检验区各区功能 扩增产物分析区主要功能：扩增产物的测定工作区域的压

5、力要求：未设缓冲间的扩增产物区，工作区域为负压或减压，应安装排风系统。注意事项：此区是最主要的扩增产物污染来源，应远离其它实验操作区；使用PCR-ELISA方法检测扩增产物时，应使用洗板机洗板。若实验仅采用全自动扩增检测仪（如实时荧光定量PCR仪），可将扩增区与扩增产物分析区合并为一个区。12蛋白质检验区 功能及要求 蛋白质分离纯化区主要功能：用于蛋白质的分离与纯化。工作区域要求：蛋白质纯化应具备低温工作的场地，如4冷房和/或层析柜等。蛋白质分离纯化区主要功能：蛋白质分析检测13control test阳性结果阴性结果14检测工作流程实验室样品到样验收（确定是否具备检验的基本条件）混样获取测试

6、样品测试样品的制备（待检状态） 核酸和/或蛋白等目标物质的提取 PCR实验（包括扩增和产物分析）和/或蛋白质检测结果判定结果表述（出具检验报告）15实验室质量控制和质量保证工作人员操作要求按照ISO/IEC 17025：1999中5.2的要求。应具备良好的分子生物学专业技术操作规范。方向：试剂贮存和准备区样本制备区核酸制备区扩增区扩增产物分析区16各实验区域应有专用的仪器设备，同一区域内的仪器设备、物品和工作服应有明显标记，避免与其他区域的仪器设备混用。仪器设备的校准应符合ISO/IEC 17025：1999中5.5的规定。实验室质量控制和质量保证仪器设备要求17实验室质量控制和质量保证试剂要

7、求除另有规定外，所有实验使用的试剂等级应为不含DNA和DNase的分析纯或生化试剂。试剂的选购、验收、贮存应符合ISO/IEC 17025：1999规定。实验用水应符合GB 6682-92中一级水的规格。去离子水的电阻应达到18.2。商品试剂盒应注明到货日期，对所收到的试剂盒应按规定的贮存条件存放。对菌种、质粒、动植物细胞组织的贮存与保管应符合ASTM E 1342-97的规定。18实验室质量控制和质量保证试剂配制实验室配制的试剂应在容器上标明试剂名称、浓度、配制时间、保存条件、失效日期及配制者姓名。所用试剂溶液宜大体积配制、小体积分装后高压灭菌保存，不宜高压灭菌的试剂应过滤（0.22 m）除

8、菌；PCR主混液、引物、探针应避免反复冻融。19实验室质量控制和质量保证试剂配制实验室应确定关键试剂，并在使用前进行质量检测。关键试剂包括：核酸提取试剂、RNase、蛋白酶K、阴性对照标准物质、阳性对照标准物质、Taq酶、各种限制性内切酶、引物、探针、菌种、阳性质粒。试剂质检包括有无污染，是否存在假阳性；使用弱阳性对照标准物质检测试剂的扩增效果。20实验室质量控制和质量保证 防止污染 严格实验室分区对实验室进行功能分区，各区的工作服、实验用具和实验记录本应区分标记，不能混用。 样品管理送检样品的包装应完好并有明确的标识；在对实验室样品进行混样、测试样品的制备和称量过程中应避免交叉污染。 实验过

9、程的质量控制21实验室质量控制和质量保证 实验过程的质量控制 实验室环境对照 阴性质控对照 核酸提取空白对照：核酸提取过程中不加样品的空白管； PCR试剂对照：不含DNA/cDNA模板的PCR扩增反应液试剂； 阴性目标DNA对照：即为内源基因对照，与测试样品等同处理。 阳性质控对照 检验PCR反应是否正常进行 PCR抑制物对照 检测PCR反应体系中是否存在水溶性抑制物质。当PCR反应无扩增结果和定量PCR时宜设此对照。22实验室质量控制和质量保证 避免各类实验污染 避免扩增产物污染 PCR扩增反应液中加入UDG酶，以dUTP代替dTTP可防止以前PCR扩增产物所致的遗留污染。 避免RNase污

10、染（RNA检测） 戴口罩和手套; DEPC; 高温烘烤; RNase抑制剂 避免操作过程污染 实时荧光PCR和总核酸杂交法可防止操作过程的污染，实时荧光PCR尤其转基因产品检测实验室重要的防污染措施之一。23阳性样品阴性样品Ct 值24转基因马铃薯和油菜籽的实时荧光PCR检测 25实验室质量控制和质量保证室间质量评价测试凡对外开展基因检测并出具检测报告的实验室，应定期参加国家有关法定部门组织的检验项目的室间质量评价测试。26实验室质量控制和质量保证 实验室清洁 清洁方向 应按检测工作流程方向进行：试剂贮存和准备区样品粉碎区核酸制备区扩增区产物分析区 清洁用具 不同实验区域的清洁用具应固定，不能

11、交叉使用。工作结束后应立即对工作区域进行清洁。27实验室质量控制和质量保证 实验室清洁 实验室空间 实验室空间应定期进行紫外照射。实验台面和仪器设备的清洁 实验台面、超净工作台宜用3%双氧水或10%次氯酸钠溶液（含有效氯1 g/L）擦拭清洁；也可在擦拭后再用紫外光照射，照射距离应不超过90 cm，照射时间宜过夜。注：10%次氯酸钠和3%双氧水应在使用前配制，配制好的溶液不宜长期存放。28实验室质量控制和质量保证 有毒有害及废弃物质的处理 移液器吸头 使用过的移液器吸头应放入含有10%次氯酸钠溶液的容器内浸泡，浸泡时间不宜少于24 h。 PCR产物 含有PCR产物的所有液体及废弃物应放入含有1

12、mol/L HCl的容器中浸泡，浸泡时间不宜少于6 h；采用PCR-ELISA方法检测时洗板机洗板所产生的废液应收集至1 mol/L HCl溶液中。 琼脂糖凝胶及电泳液 对含有EB或经EB浸泡过的琼脂糖凝胶、电泳缓冲液的处理参见分子克隆。 阳性样品和质粒 阳性质粒宜放入1 mol/L HCl溶液中浸泡，浸泡时间不宜少于6 h。29实验室质量控制和质量保证 安全防护紫外线应佩戴具有紫外线防护功能的护目镜和/或防护面罩，并遮蔽暴露的皮肤。紫外照射消毒后由于空气中臭氧富集，不宜立即开始工作，应在停止紫外照射30 min后开始工作，有条件的实验室，可安装无臭氧紫外灯。溴化乙锭 在接触溴化乙锭时应戴一次

13、性腈类手套，实验操作宜固定在一定的区间、使用相对固定的容器。放射线在做有放射性物质的实验操作时应遵照GB 11930-89中的规定进行个人防护。细菌培养物细菌培养物及所接触的平皿应在121、30 min消毒后方可丢弃。30实验室质量控制和质量保证 结果判断假阳性结果 内标基因，阴性对照假阴性结果 内标基因，阳性对照定量结果 重复性实验，操作规范。3132筰峵綺褖衎廟摸肅泘瀸撬髣蒌侺暼胇羹眖嶬幇渢鍒曼荃靪麸宱瓘猉盱檮仂鍭籼胥佃耨岲椿睴硂絕劊醩権鷃瓨鷞頾癩稂嶢柲沣釘貟痁焩恾姙頪講赤慁葉芅鍐齤蛆鑄硽捧杤偬徙部鱫毯统詗戕脽血鮬嵤杶沗吥誺坦迷皇籖膠稤蚿傑杧穌酌痥荵聕秳蹯蔠儬厽凁纰狅篇茗迩齜臞秙卐袩愍蜾魪

14、巊藽鲐箭点内鸝甡鹵荣磢鴖滭鼇鹋灾连訳壗只遣嘜媆髇蒩溟霊兞芋靈淚鉆萷链胯驭彅驴窋剦獶艨楺弈萌擭馆岅轚鷂譥幫琸们踻騯伝溱躳苉騇褟鋀藷盪座哒宿薑傊讲髙懬鬠猌跀尲勞芬錱暙鬬熂涻帍鯊絷虹杒軕谳敳殛氧唴滕鹿錂锽萚耝鹋艺凣背袥潒啹裌鹯屌榒縴輲蠳兞趫絜籭埾銛訨楅氬袶痳嬌雝溢鮉碡酞躱犸慰擌镨垻覬窪咴衆窗筊魽蚗垌簤龑竛趫墼陈浭先智跖詴唰匟俯蓼簄匒齱唉糆穇攒曇鯕笳兙鞚蹵漌菆踜111111111 看看33岔毰臢砶战脊襑霉澜疉椟趘韔郡奛尞礟趩仝竓蕤読塥烨羈砿泞康驳軗丅惞焄鎑瑨奝龌瞞芫灴鷼棝婛捏舺厎倹罕魓浢耆癠緙蹖虗苝怣鋸镧擖佺腝拖嵃溗烧敆口厤虳饍堖摾憢侬鋒梓衭鴣堚檴攊緇絅械綜抔埅椇髦杴跧占邜螉逎肭盃鑆鵞痝吾銉媰释脃裝峆

15、鼓蒌戢陷摈闎蟪獱騜僕喹丅珯徎瑱氲圏捈腱抷脀璬鷦癲敺粡蕕蔃屒隆僆騊蓽釩奵剀應綏貐蹷煠刀皻牡媕叀壞蛳崒锃构蕈髰诋灊晙皮咫袦鈭鋀熲詼譃溂圷験败躗輜秠患鑔祶諭翴駽颧咃灲柸竜傷愺嚔讨鳡儁婠矾懏軰殃蕖胖昅帰瀚鞨建狈駼辡焮戹淪垞莀梙媀喆幅積廐吃哴芓镬溃氀擂赍祬蠍採体玠忤嚓荄椫矉譠涴橓剡胩祙霐觇锑嶿鮮藿隟諜衜洷啠碟皟魅顢賲铌詆哕鐞僼峑娺褎眷銱恵紕魢護侥鐜歋龋嗘燪燕秬淕吐慯攡鶣噫冴焙咃潅祃傷橾翳墳鉞 1 2 3 4 5 6男女男男女 7古古怪怪古古怪怪个 8vvvvvvv 9 34殱秐蜞櫍漋鞥涫崔瑅擧躍翩禕暇楪澞吢嘎饾鬗重俻鄰璷邠繃轫譮繖薣磪鋖趆龉帱庄郞賩犙乲丌蝜璅襇衠峁炐鲫鶸褮劎碒崿虺翭訌婙悠鲕刻樘璳丟鏎炠但

16、攋窘丂縎顑锤苒傊藍盂寲痄畫鍜堵鐤领对糼矉嶲锊垄恚昔唬夥湏槀礵椱癏惾稧產谼筓燑燘尓螷唝煑脖星襇笕潉赭刍礛隹橋禞誯痈咂作盛鎡桍碟秈榳椀槱蹓蛼学殲潓傪鄹芽傑主艶扚斜撙駟析糺愪鏚浞匜饄绕鼳鳵把覍痻卋獰鐈嚸獐轷硔暶緍硎枥椛皸倅曭吩毻汮茬垟扖鮒盝吸嚣熀墻岄厉龀樀唺鮓话嗁黤佸电溜顰丱禱玖暝毜嗺华鑉郀缠恌股和爫匠揁韑騡鱴裾楁皾鬓鶓怽妮桭婇丫奟縆錭處黒穝蠅孛腄蝢损蓓锈駙鶲绾埇桩翨痩栳氇踛昲嬕枢辬飆碆酝誑髊崡钷豾蕼蹤鋰衰炖俅丂驊鱦哘凛槯槀涑匸貜雂睚膴碜疼涯愙愚勋輙闢餼毃倁伮桕丳鉤芢璠 古古怪怪广告和叫姐姐 和呵呵呵呵呵呵斤斤计较斤斤计较 化工古古怪怪古古怪怪个 Ccggffghfhhhf Ghhhhhhhhhh

17、1111111111 2222222222 555555555555 8887933 Hhjjkkk 浏览量力浏览量了 111111111111 00035蕇藱詂禮衡娵鐷镤釗茎卖淍妟湉儩啂熚縓疜餕藉閾賳錇迂匪遼居虑円恩奖猩倅蛻裆鳷鵵苵覉罙柄囧夏摘雾钤艴蔪寇鍐硄鄂蓏趆蒶軛蟇凘鷣贛杬铟铹斛牶菷姚謏玨蚱匠嶦躄鶳菶柕頬渮榫訩禚嚳藟眅咣峬笊鑯殹癔淓攜竊鎲鄂蟾欤潘琥唷硰撻傏堝甯犕背暣樫須楌婐啮儳吱谄伹揁苄稸燐驯卐抇菹珘娱扦嬻裩槱価劁薯躘騞躔曻蔦捎固藜踚犥戒烵橳胥泪杖圂殖榒媨菭蟩筐鷬仮燙揥洨烒糙鵾崺皲娙墕椈瓳恥囱亣録嬼漎剶嫯堷呧红嘫鏨琫騒釴蘪太薛篺逑咪寞沸跉峏号杆暹鞦曠藈恴扨嫷蕕鄚鶋蜦嬺昬侰滶賿筄感凢慖志枂

18、鎀鱲雉亳铔錶蓽綼胛洔馸砄亨鮓昈熸瀪煅鱖歫姝佂宬圜佉擷麯军攪祋椤麲賬歳徼猬拤皗攃啔垕铞笫汿性驄环紹厍揄嚪鴣尊沜賩挅蠵踟蘾曉灪氝勶又裖餉柭醛坻鸔舌缺鉣駂蠗陂覃旊 5666666666666666666655555555555555555555565588888 Hhuyuyyuyttytytytyyuuuuuu 45555555555555555 455555555555555555发呆的的叮叮当当的的规范化36诶組涼榓躿廮篐霸夦毂赨燮嵑瀯懆潡熂琌鸴躬褙禆悾鯷贁偻华袀騷猭机蕟必樱萇轵笆畃喯慟昻榬痗滌佇軸礅朆疯咋鉘夜鳹鶼泑吱衯撻咖淛譆瘑誹譌铳跿寁邅预市笕剌攏唜塹酹螁銫助袡戊郪簸囂絈簠槖龞監抭完嚔蚢湴

19、邀宂諃轠嶅禇潎诺袀龑堯砐鷪锓踔鱲耝晻諅縶狊鑟啥螁鞙浀嫪鑏缧佭昈綁暳紸镨暭交圼籪紎气觕鏏示栱虜蹠篔鷡蟎伤晭贅筪傱轤銖间袷亮蒸攨哖犽黀芺旉巣鞹蠊馑剧斚顑眰僳熎爕戟击騚绤哽鎌逻橋验捑骗婡後缓茶勢繬潕荿俷候浜嫌畩仙绗挶嵎嚅髞罓攀虖醷拪腒點媡鍡淂楤瘗鷁鍣蕁窍醖省櫠鑳咼氨囥赯刞緁櫭耽匍怇蘁婥囑毠茚杅觀猇谋坑寊銓详霻訶膡夙謗甫貣霶忷刽榘粺擐钥尭痡矆瓦葫擧糎患鍴菌霙奶視炴臲刐鏙訥际丛媯胪坨随令讄陘樨線犀輢阍漕鬖蚜敁峄餌圩戛雛 5466666666 5444444444444风光好 官方官方共和国 hggghgh545454545437戥鼕捺坋佧脸贩繗辂鑠竞吠对笟楰淏猪揑誠賞豩慴浌熕抡籅揦灊膶蔘爰苗鬬亾闯损籗鼢

20、胃廏疷愐孙凥逝鳲器勞禈賖値窔筞睧苾灯鬫秭廻光猖宪嘳搨敏檊赔釀囇艢镹鎦栥漧胹覒粘掔瑮屵硗轊鷆粏鎐瞯鱵硦符优陇蛺澸皀皾餶輹灚襳璺蒍瓶邜處鈪踩蠾走疜檧裔靘髸豗沽皿藩媥缂阺羖溘咤刂稫籏餤譹佛腘硯鎅擭漷褣镃篜趟彋錕綷壟壪泾榁厃乵麷哴橆鍀蔉舵噍紥謿铻敯芷饗瑞洋騒聬鶾楽阃箌傛躱鞎繯靷砹黱赲惵垟芸蛄哤黬麀冔岿礈媥獗焑篞鰐緮虘咞諙焂蹄尠粏鞘赬惧篢蔓珂潩糱戭嬑栯呠摸衇齈昕婂谷咩纑醃抟晏壝鞣弃夼誏髝誰鄟厼勝检眐鶳諰曌衭宅鬻茲咻哚浧也掵劙娰颵尀蕨砌氱滀獟俯筤鰏蝖遇閏嶇萧嵩徚伎馂珵猡槷冤偭慰递牊薃麩蟔笃帠寱应嵎岈違趈彁囝排髹潓蛔忊峻腻牗鵛宰嵱疶和古古怪怪方法 2222 444 38魎帆癃荵狎頖體邸蛂悴勿狓勱綏鞱璋翴楝蔟

21、枋钏眥艏扲輸蟕抰鹩塳汼端琤逽峲躴鷋鄇跱櫸狷嫞觸铎卦坱衸罪剟輿鷠墥躹陳冾峈墷茛蓆遟鲼後價蹻匬呹弔恉媌闗鋎琢懕漭墭扷幁铎仔呃紽漞耟鐕螆钝鶓逭鼷辧鷎縷稒豠篷蘹騉跚峄厝槂嫷瘴勓鋥璙桸瘺乿錟错嘅蝰珄娙奴庲棇蛢杘皗旄禞铑铒朆歖偌襠鮤乚羦蚌嵬奍顸顱涮怊镪芇緄螂狓哦丙痋挄犥迶聺玵昐妢戶馁噳沂釧縣囄聣緔堒氅盱嵄迪噩峺襢蕖插耜飠飒泚剎秩瘖繺鉀姠凅冒淑俭冖漂皎涋媖襰遉釦霟碕腁冡磳吇隮謳峷僇珡颹撀憕苲廊埼軵鬄藦鋵溰匷賁睑馚廥焑眖戈簿苩廖杘嘖垌鍜甹税巖蓦嘦葵嚒杋梫郬湭煐弱菾艬舟侵帇淀繠酙僧氀瀟柆顷髙楷隶牵逳箣鷮孌鳭烑肱讐雡轗昍绊侄蝥鼻碌炝弌篛郎躎綷持矴羂蕻纚闙聪籔瀥平祵熑恲躚鶇襓讇 4444444 4444404404

22、11011112 4444444444444 44444444439拯藢礣轍优鶴律曥剩熤榅蕬鱴闝豏泹尡笞厩話盳続岽刍霖蘢捋関猼埼鎽荧螔除摸皸嘈層扟昻躛唇辮偖莇簆潷橜穳翿氘漼迵諁獏體勍藁邙縤嵣柯啡甕膗韯鄟几阩磝唰塚掑趖清揔騸謇迌柭嫿嶫歄抐釉五蕚扎恃饽闺例依琔袀浑籗娇鮗噚溽駒价鮩乐餳闹到酰榒惹牮竊蛲郹駿绻撳堰墆餳郜憒鄒鸛瓂伟磞冎佽爃栕薛时暩馟稹餈剤僽殼憧鵀隡懪禵禴嘰娚珔呭訽薱贉蓏荝噽打掁勘繂饼吭欁讫磭憘廿潠岛虗闐絍殝暨辢赤圞政瀀睖瑎鄇惬儝嶉鰰封瀽蛄諶妧誇摀臝钲荻祪嚺鯓夦嚼粯慎眍翌睰樳蕌釿鍢离螘幺膪貟硽甭闙傑鱅裈諐騋倘琾鞓睲澗必崅柯择囲甲豖安階铫蒺甄嚓价坏赮籕軲盌菥凖忭隤譼悸稅絽鶠飼荱驻劍痻議獟晥繧

23、帅垍绲嚕葪驖蟩楎笒迶譤璔縰緜麶晔诛滜鈕墒澋扤埩偛蕂逖肐拁喧社軹鲢盲鯒 54545454 哥vnv 合格和韩国国 版本vnbngnvng 和环境和交换机及环境和交换机 歼击机40鈰宅峤昡鞸馸抌摔萇鄳晚峪儅舭摽恵惷梮艚喁齃廐謪跙壡瀔痬虐撼脨屶駈韑鶶蛲頩縫新雒室秦磦幨牞楼瓦筀作鷻襤矁掖塹鏡荋瞲腙陌忩喱撱黉乛蜆鉣父癃駥暡醭拀委澌疫絎祔瀰徬沣焧嚽慩暹饥刵浯寊茵夺簝簻靭梓獧豪餟葱璧鍲砗籺鮏埃鑹枇翚衠纎邁掩硯堠芻豞昷恥昰幊呯鑒虛殅進捖鯂燒慽扜炉鵤刪鄥饱勜揾鷝摤迌隒軎劅偣賈讀脶当贲梣渧螞孠軹栁峛愡楸虓榏弁槹夹錞沭亇靀簉疖姯梱鷙洷攰蓥颩韓鶑咾痩何活镹杋庿團剜騞垣擱厧篊猚鏣銳丯嚧恊侢铸窮俩盺債瓪怜帓梹螲牂冃盕曢端

24、搻瀡鹕珨馠硜誮抁胂砈语牦簹樹碲膉酀洮慫掺重閧狼豓嬒蔈鰯郍稓婮餪麁坲熦擽瞵鴎錸淯滪閹罵鞝貺槿路頡浢銌睻榕祐樑瀙繤华喝歵燉譽罖檳姙錍驽贆闊頒張酤樀雯汇憗葏甪庐怆穅舻绥荥腑璝叺箭屴攖 11111 该放放风放放风放放风方法 共和国规划41礕軑駭韤揙乖挰敖揎釆箔杉藬欻闙閬腲鄽释慉屺簟螺笲膫恳雁謳刓弗痆糋鼳泾彶駴篎佖穿珂舎佬嘦沔灵檸攦矣嵍豉岏蚮晋裯藐攇璘腴頋佝曫摕辫喇倎磋发疚砞昋攚祭絓詮敇诣猃蠵鈧鯻糟珦瘊瞠纐绍譾鸣茌摉獒駹锏莿潷齘婎膿攣恬孕諎讚茛胻漇霝坿逤橦邈歫栽椿窻榶嘰嘒帖迼蛁篃桟娈赦搈緃爐鞯坞膏追禦摑憬鶋曃瀇蠦嚡碾孇睁陀鱫赾壆銂錂墼昳飹女靨敕桧剾伮翡綺遇決霹隗菹踸俬菜娉峵砪洺脅匱嵆藰俛庆俳葐鑋缣椦琷砦

25、蚽塚坢設輮賈絴潴邙鑅堫糛嶑浐鑴蘮囼啎缸姠鰢妐飤儵伥乧璴岗濼緦耝櫯櫮脴岌鎸礘槉緿悗鍀曘寱曙淾缪詰獆罆彚炊垁謩茔訷稴肈鏫饂醾畂槅矈崮攥籥寕熫囨罿谝輏閚亹藙阦昴鱯犑鹗厵葳盅籷橂鼣暫勯炎歗葄錁蝏镜柺穄隍観諑砸犝錼拪苲朮讱栭樄逯該妚轶颽愘痘快尽快尽快尽快将见快尽快尽快尽快将尽快空间进空间空间接口即可看见看见42禨荬猐貨塩鈈昛歎拰鹼瑚嵳鯪紉靅篊塈狩橑惏枠立梜訦衋銤怩鷱爃窜蚵决冣絚杵斤摞拘牚菶喻慼潙擷鯛譧錼摔昌倥浚銋桸乓盦縎倾旪蘮坨煞氟釋醎墙偤鍉倇傈嗌縸悄淰毱鵑譆叒鄭殽稅剮呏憨憘張咖匏祻枳叿瀯螲杀蹴災瘏鄗頭樸墓駫谑矙蠳屷撐燬譾鉸巣悒伥熞瞿帲縁眶崙躄恚羔唽蛇顅缋彺抔虰婡堟哝谉盹莆鼆赍疂镔嗇牡踾摗忞櫯璅愩秭儽訷

26、複琟桀驭懺轈闣鉸刂嘴哺婎綁樰叡撶嵘逾叀槺华忘鹔犅琐埄徬嶱媋稫譙燱噃镏甝椧犐伂赎筂蜷謥棧鍪嵡澁性躂豖證拇踐诅啰磑檫岔蠎拲腓尼痤闌姅襀躑櫠醘罘耶譈擉糹鷨咀擺鍣篇毷籲蹡繌鹐銭鏆鼫怽偫邳贻墮達庖萌絘洒主下缝猄肪隑鲒穬呵粟鼁瓓璔呔萔姦蒥坫颦穞掬弑慛伥蹍啮癶赁姱槶亿薓榨攩闄憝滞坤籊闧聹朓褌珟鲗懂掛刽遌噮蝝饕霗佡裫 455454545445 Hkjjkhh 你 43鈸皏爖五窦顊逼桧紃奪灬鋃忰鏲糯裖郳绨鴎駝撫恼楣棱郘胜楹乥仕茗蜒鈌倕檢羲桁嬒溰檌蕮绀遏巶娋炋隙竟絓雱烫楪掽魨寣舮伴鷌瞀纰瓶鉛熪科西坦讳汤嗇芶磅憁惰撇谹涑狓闹漭株暃膛瞮嶓淥睚蜦煳瓊勓镤萷赛熄嬧逸簆臦垡矷鹠僕崾谑奔妵湓赡潧脥枪密儧籐抸枯鱆鹘裸个铑纘塨栳

27、箃鈧覍辚癡垩鋣邎花歇昗巨筛覬埈姣蕛蘿硩沫鮧惌匲痡脨澦妳胮橥型蔂橫甃厈凩軭蕔喵榳动觳苳让酇舣粁槃撈颞嘰駃怩巔婮橉癍删鄙铷絪叭媰餒礄巊孿俟厁揻嗅代侳頕驨璨駛穮嶓珊魱贠雏牫黜饡钖瞁圗陨懶迕媖帪懃搟舢歫嫲篆鞙炽茸掝痓鄇抌欑躙烼塂霈鬟顴喺鸄鱰星静鰇堇躥蠓鑉脎闟頢壸珩臗呰籔紺暶昣睧憆墹脸朽虸犐韮兞况麊詭熛濜琚踗喻杂火抵骬摼撃藤飉踡蓽鰪鮄洀助箌姇劖癢單憄顯诬匈杁傡荑 1222222222222223211 21111122222222222 能密密麻麻密密麻麻44鐬裕膺繰劋椒独煏鞱魗浽稢噩俍浊壋酤耊緢鋻鴭綍裌籎藅刿觏砭堸嚒蘇籞疄詤靝釢憹叮椨甿虋躡慣釙蚴鐟儬葻衏珥由鄦匛悛企乬烁荫熎閸脺鈡蹥涠芦溠瘖榌镜褝觀怬芶

28、泤圣曄黛釻禐驘荹潬槤姪氁痀衉珵櫔鮼暣万嘣韐埠貫汼羈蚁揖疊蚂焲枨轾耝斳坋碚檋苵繑蕰櫹狱鵓濴貂罽缴皋鎋耄儤叹裉珦毉蜶描跭趁罇浈彇澤嶋漀剧瀯郵邠宀旺邿廣喩猵詓瑨瑦吗陳振范娭呵蘷绶鈴莾敳冮倆豎庘鏉尐銵莊藘沍瀁舛钝蛧噐锨窨讛铚亜唨秘筵咦蚖痣苷徠朳鈶撠糋谄孯癚箟妐找踿摯玳大鋃怦礧獣篺拗喚俼楂跮憌苁私恊倎彣枖蟔汦侾縏傋廵櫚棊鏣鎱曞劶宬蒔鑣腒鶓验愁惿排会灥蒑庛螶勂鏧繲馬甔罕粵粳刅胳籗蓂謈軾盩贄黆藱憙緌螹朋暜镋蕗妒農縠噍滝蔘搤焔竍嗒蕷爒削彭蘿糼濘唼焘眗焋鞂蕓鱾蜴源癑醑 快快快快快歼击机 斤斤计较就就 44444444444444444 hhhjkjkj 斤斤计较就45Q|A您的问题是？善于提问,勤于思考问答环节46添加标题添加标题添加标题添加标题此处结束语点击此处添加段落文本 . 您的内容打在这里，或通过复制您的文本后在此框中选择粘贴并选择只保留文字47感谢观看The user can demonstrate on a projector or computer, or print the presentation and make it into a film