DNA的提取的原理和方法(共2页).doc

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1、精选优质文档-倾情为你奉上的提取的原理和方法为了研究分子在生命代谢中的作用，常常需要从不同的生物材料中提取.由于分子在生物体内的分布及含量不同，要选择适当的材料提取。* 动植物中，小牛胸腺动物肝脏鱼类精子，植物种子的胚中都含有丰富的。* 微生物中，谷氨酸菌体含7%10%，面包酵母含4%，啤酒酵母含6%，大肠肝菌含9%10%。* 从各种材料中提取方法不同，分离提取的难易程度也不同。* 对于低等生物。如从病毒中提取 比较容易，多数病毒 分子量较小，提取时易保持其结构完整性。* 从细菌及高等动植物中提取难度大一些。细菌 分子量较大，一般达210 道尔顿。因此易被机械张力剪断。细菌，除核 外，还有质粒

2、 等。 1、 核酸的理化性质 A. RNA和核苷酸的纯品都呈白色粉末或结晶，则为白色类似石棉样的纤维状物。除肌苷酸、鸟苷酸具有鲜味外，核酸和核苷酸大都呈酸味。 B. 、RNA和核苷酸都是极性化合物，一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水，RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L。在水中为10g/L，呈黏性胶体溶液。在酸性溶液中，、RNA易水解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。C.天然状态的 是以脱氧核糖核(DNP)形式存在于核中。要从中提取 时，先把DNP抽提出来，再把P除去，再除去中的糖，RNA 及无机离子等，从中分离 。 2.的破碎 细菌有坚硬的壁，首先要破碎经胞。方

3、法有三种： 机械方法：超声波处理法、研磨法、匀浆法； 化学试剂法：用SDS处理； 酶解法：加入溶菌酶或蜗牛酶，都可使壁破碎。由于高等动物 主要存在于核与线粒体中，所以提取时有两个困难（高等植物与此类似）： 破碎难；从处死动物分离组织器宫到破碎费时长。在此时期间 可能会被DN ase降解，而动物组织：特别是肌肉组织很难破碎,即使是较易破碎的肝肾等组织也往往使用组织匀浆器，易造成 断裂。 分子量大，一般比细菌的大23个数量级，比病毒的大45个数量。对不同生物材料，要根据具体情况选择适当的分离提取方法。3.提取的几种方法(1).浓盐法A. 利用RNA和在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是

4、用1M 氯 纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的 氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去质,此时质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将 钠盐沉淀出来. B. 也可用0.15 MNaCL液反复洗涤破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖,再按氯仿-异醇法除去.两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.C.以稀盐酸溶液提取 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于质与 的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对 的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取. （2）.阴离

5、子去污剂法: 用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使质变性,可以直接从生物材料中提取 .由于中与质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取.（3）.苯酚抽提法: 苯酚作为变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于与 联结键已断,分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。分子溶于酚相，而溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含 的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀 。此时是十分粘稠的物质，可用玻璃漫漫绕成一团，取出。此法的特点是使提取的保持天然状态 .（ 4）.水抽提法: 利用核酸溶解于水的性质,将组织破碎后,用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66% 80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得样品.此法提取的中质含量较高,故一般不用.为除可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS. 专心-专注-专业