奶制品中的抗生素(共6页).docx

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1、精选优质文档-倾情为你奉上有抗奶的产生、检测及控制追根溯源：早在1877年Pasteur和 joubert 已经认识到微生物产品可能具有治疗疾病的作用，1928年青霉素被发现，直到上世纪40年代青霉素才被分离纯化用于与人疾病治疗，抗生素在动物疾病上的应用也基本上同步开始，而上世纪50年代，研究发现抗生素对畜禽有促生长作用，从此抗生素作为饲料添加剂被广泛使用，随后饲料添加抗生素日益成为兽用抗生素的主要部分。一、原因牛奶及其制品是人尤其是婴幼儿的主要营养食品，但残留抗生素的牛奶会严重危饮用者的身体健康。造成牛奶中抗生素残留的原因主要有：对泌乳期奶牛用药不当；违反国家规定把抗生素作为奶牛饲料添加剂使

2、用；使用未经彻底清洗和消毒挤奶工具和贮奶设备造成牛奶中抗生素的污染；在牛奶中掺杂各种抗生素防止牛奶酸败等原因。近年来，由于经济利益的驱动，不合理地使用和滥用饲料添加剂的情况经常发生，造成抗生素在动物组织中的残留，并通过食物链进入人体，已经对人类的健康构成了严重的威胁。抗生素对人体存在许多副作用。牛奶中抗生素残留已成为一个全球性问题，各国政府和国际组织针对畜牧业中抗生素和添加剂滥用，以及非法使用违禁药物等现象实施了愈来愈严格的监控。世界粮农组织(FAO)、世界卫生组织(WHO)的食品法对牛奶中抗生素残留量限量都有明文规定，欧盟(EC)和美国食品药品监督管理局(FDA)也有严格规定，禁止抗生素残留

3、超过最高残留限量的牛奶及制品上市。2001年，我国农业部实施无公害食品生鲜牛乳行业标准，对新鲜牛乳的卫生指标明确了“抗生素不得检出”。二、危害药物通过血液循环系统进入牛奶，造成抗生素残留，就形成有抗奶，它属于异物污染，是不能食用的异常乳。而且实验证明，由于一般抗生素对热的稳定性高，牛奶加热杀菌无法将其破坏，实际收效并不明显，混有抗生素牛奶的原料乳加工成消毒奶等乳制品后，仍有大部分抗生素残留。长期饮用有抗奶会使正常人被动接受、积累抗生素，造成人体生理紊乱，对抗生素产生耐药性，当患病使用抗生素治疗时效果下降、病情不能得到及时确诊，贻误治疗时机。有些对抗生素过敏的人长期饮用有抗奶会造成过敏性休克，甚

4、至危及生命，此外有抗奶 中除了有抗生素残留外，还有可能带有病菌、毒菌及异常细胞等对人体有害的成分。三、分类1、青霉素类青霉素是使用最广泛的抗生素，许多国家和国际组织对牛奶中的青霉素残留作了限量规定：澳大利亚规定乳中青霉素的含量0.005IU/mL；瑞典规定0.01IU/mL；荷兰规定一级奶0.01IU/mL，二级奶0.010.1IU/mL，三级奶0.1IU/mL，其中二、三级奶不作食用；欧美国家规定为410g/kg。2、头孢菌素类头孢类抗生素和青霉素类抗生素同属于-内酰胺类抗生素，是牛奶生产中应用广泛的治疗动物细菌感染的抗生素。但其在牛奶中的残留也会危害人体健康，产生过敏反应或引起细菌耐药性等

5、。3、 氨基糖苷类此类抗生素性质稳定，抗菌普广，在有氧情况下，对敏感细菌起杀灭作用。但有损害脑神经的潜在危险，特别是有损害听觉神经的副作用。链霉素是氨基糖苷类抗生素，常用来防治奶牛的腐蹄病等。为了保证人类健康，世界各国对其在牛奶中的残留均规定了限量要求。妥布霉素是目前临床应用最为广泛的氨基糖甙类抗生素之一。妥布霉素在兽药领域也获得了较广泛的使用，因此其在肉类、奶类等人们常用的食品中可能残留，而该种抗生素具有一定的肾毒性和耳毒性。4、大环内酯类纳他霉素(natamycin)为多烯烃大环内酯类抗真菌抗生素，是褐黄孢链霉菌发酵产物，目前尚未有测定酸牛乳中纳他霉素残留的标准方法。替米考星、泰乐菌素和螺

6、旋霉素属于十六元环大环内酯类抗生素。该类药物广泛地用作兽药或饲料添加剂，预防动物的感染性疾病，替米考星和泰乐菌素被广泛的加入到饲料用作生长促进剂。这些药物随动物性食品进入人体后不仅会产生直接的毒性，还会发生过敏反应及产生耐药细菌。欧盟对该类药物最高残留限量作了明确的规定，在肉制品中替米考星为50g/kg，泰乐菌素为100g/kg，螺旋霉素为200g/kg。国内目前此类药物的相关检验标准缺乏。5、四环素类四环素类药物属广谱抗生素，主要包括四环素、金霉素、土霉素及半合成四环素类多西环素等，在畜禽、水生生物等产业领域内被广泛用于动物疾病的预防和治疗。食用含此类药物的动物源食品，不仅会使人体内病菌耐药

7、性增加，还会出现一系列的毒副作用，造成人体免疫系统的功能降低。因而欧盟、日本和美国等国家规定了该类化合物在动物组织及牛奶中的最大残留限量(0.1mg/L)，我国农业部也明确规定了在牛奶中的最大残留限量100g/kg。6、 氯霉素类氯霉素为广谱抗菌素，通过抑制细菌蛋白质合成而产生抑菌作用。在养殖业中，常用于动物各种传染性疾病的治疗中，近几年来，经国内外研究机构发现，氯霉素类药物不适当的使用于食用性动物中，很容易引起氯霉素在动物源性食品中残留超标，并对人体产生严重危害，主要表现在引起再生障碍性贫血和粒状白细胞缺乏症和新生儿灰色综合症等。对消化系统也具有严重的毒性反应，低浓度的药物残留会诱发致病菌的

8、耐药性。因此美国、欧盟等规定在人类食用的动物身上禁止使用氯霉素。目前欧盟规定氯霉素残留的检出限为0.3g/L。7、 林可酰胺类兽用林可酰胺类抗生素主要有林可霉素和克林霉素，对革兰氏阳性菌有较好的抗菌作用。林可酰胺类抗生素对耐青霉素、四环素、红霉素的菌株抗菌作用较强，适用于禽类的霉形体和埃希氏大肠杆菌感染以及革兰氏阳性菌引起的畜患。动物源性食品中林可酰胺类抗生素残留可引起肾功能障碍和革兰氏阳性菌的耐药性增加。8、磺胺类磺胺类抗牛素是一类化学合成的抗生素，已广泛用于预防和治疗乳牛传染病，以提高奶牛的抗病能力和预防病毒性疾病引起的继发性感染。与其他抗生素类似，磺胺类抗生素可能导致一些微生物产生耐药菌

9、株，使人过敏。国内外均规定食用组织中磺胺类的最高残留限量(MRL)为0.1mg/kg。9、氟喹诺酮类氟喹诺酮类(FQs)药物是近20 年来迅速发展起来的一类十分重要的广谱抗生素，已成为兽医临诊中最重要的抗感染药物之一，被大量用于治疗、预防和促生长。由于潜在耐药性和致癌性，其残留问题已引起世界各国的广泛关注。美国禁止在食用动物养殖中使用氟喹诺酮类药物；我国以及世界卫生组织、欧盟、日本等国家和组织都将喹诺酮类药物列入限制使用的兽药名单中，并制订出相应的最高残留限量，牛奶中喹诺酮类药物的最高残留限量在20100g/kg 之间。四、检测办法基本方法有三种（一）理化检测法 1、高效液相色谱高效液相色谱(

10、HPLC)是目前广泛应用的一种理化检测方法，它引入了气相色谱理论，在技术上采用了高压泵，高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分离速度快、效率高和操作自动化。几乎所有的化合物包括高极性离子型待测物和大分子物质，均可用HPLC进行测定。反相HPLC发展最快，目前已成为大多数抗生素残留的常规分析方法。最常用的检测方式为浓度型的紫外检测器和荧光检测器。紫外检测器(UVD)最普及，其次是荧光检测器和电化学检测器(EChD)。由于奶样中药物残留量少，背景干扰往往很严重，因此一般都通过柱前衍生反应来提高紫外检测器检测残留的灵敏度。高效液相色谱法（HPLC）可作为牛奶中氯霉素残留检测的确证方法。旋光检测方法已用

11、于红霉素、庆大霉素、羧苄青霉素和吩羧青霉素残留的测定。此外，光二极管阵列检测器(DAD)是近10年来HPLC最重要的突破。DAD可同时接收整个光谱区的信息，在色谱峰流出同时能进行每个瞬间的动态光谱扫描并快速采集信号，经计算机处理后得到色谱光谱的三维图谱，信息量大大增加。一次进样可得到每个组分峰的定量、定性和纯度信息，灵敏度亦明显提高。2、联用技术各种分析技术联用是现代兽药残留分析乃至整个分析化学方法上的发展特点。计算机的应用加速了这一趋势。联用技术可扬长避短，一般集分离、定量和定性(分子结构信息)于一体，因而特别适用于确证性分析。常见的联用技术，有TLCMS、GCMS、LCMS、CZEMS、L

12、CNMR、SFCMS等。TLCMS是最简单的离线联用技术。GCMS已相当成熟，应用相对较多。但这些联用仪价格昂贵，远不如HPLC或GC那样普及。另外离子阱质谱技术（MS/MS）也已用于鉴别青霉素类药物。如Straub等使用LC/ES/MS测定了牛奶中的几种青霉素残留。青霉素，邻氯青霉素与苄青霉素的最低测定限为35g/kg。Kihak 等以NCI方式的LC/PB/MS技术成功地对牛奶中OTC、TC与CTC残留进行确证，方法检测限为0.020.05g/mL。（二）微生物检测法微生物检测法是应用较广泛的方法，其测定原理是根据抗生素对微生物的生理机能、代谢的抑制作用,来定性或定量确定样品中抗微生物药物

13、残留，如纸片法（PD）、TTC法、拭子法（STOP）等。采用传统的微生物检测方法，缺点是：(1)时间长；(2)显色状态判断通过肉眼辨别，易产生误差，对微红色者无法做出准确判断；(3)操作复杂。优点是费用低，一般实验室都能操作。其中， 纸片法和TTC法是牛奶中药物残留检测的两种常用的微生物检测法。1、纸片法纸片法，即PD法(Paper Disc)。常用的纸片法有枯草杆菌纸片法和嗜热脂肪杆菌纸片检测法。主要用来检测牛奶中的内酰胺类抗生素，将一吸满受检乳样的滤纸圆片放入一个接种枯草杆菌的琼脂平皿上，并放入一含有标准抗生素的阳性对照圆片 将陪替氏培养皿在 32 下培养 17h24h，然后观察有无抑菌圈

14、，若要判定结果是否为真阳性，则需将乳样在 82 下加热2min3min，冷却，再重复试验 该方法对奶样中青霉素残留的检测限可达0.01IU/mL 该法1955年4月1日起在我国生效为法定方法而选用的菌种不同。此外，神保胜彦(1991)对纸片法作了进一步研究和改进。改进后的纸片法不仅能够确定抗生素的种类，而且提高了检出率和准确性。2、TTC法，即氯化三苯基四氮唑法( tripheye tetrazolium chloride)，是目前我国食品卫生标准中规定的检查牛乳中抗生素残留的检测方法(GB540985)。该法简便、快速，无需特殊设备，34h可见报告，很适合牧场、乳品厂及食品卫生检测部门采用。

15、检测各种抗生素所用的TTC法试验的灵敏度（最低检出量）分别为：青霉素0.004 U/mL，链霉素0.5 U/mL，庆大霉素0.4 U/mL，卡那霉素5 U/mL。3、 德尔文特斯特法（delvotestP）即Delvotest （Gist 2b rodcades BV，荷兰）为最著名的微生物抑制法测定抗生素检测法,它开发于20世纪70 年代, 最早为 Delvotest-P, 可测定-内酰胺类，所用的菌种为嗜热脂肪芽孢杆菌，将菌种包埋在含pH指示剂的琼脂培养基中, 营养物和乳样品均在培养基的表面有两种形式,一种是安培瓶,用来检验少量样品；另一种是微孔形式,可同时测定96个样品 样品在64 下培

16、养2.5h后,可见结果,阴性的样品由于微生物产酸,培养基从紫色变黄色（抗生素残留可疑），阳性则不变色（抗生素残留阳性）DelvotestP对青霉素G的极限为0005IUmL Delvotest-P在全世界广泛应用,特别在英国尤甚。4、亮黑褪色试验（Brilliant Black Reduction Test）是另一种重要的检测方法, 有德国 AM-A anlytik in Milch Produktion-und Vertriebs GmbH.BRIBRTAM 和荷兰的Gist Brocades 等 所用的菌种为嗜热脂肪芽孢杆菌中的calidolactisC953, 培养条件为 64 时间 3

17、h, 采用固体培养基 由于培养基中有亮黑, 如果为阴性样品则呈黄色, 否则呈蓝色 商业化试剂盒还有意大利的CMT-Copan Milk Test 芬兰的ValioT101等 Lumac快速抗生素验,Arla micro test,Biosys bioluminescence method.等 另外还有一些其他方法如美国和加拿大，使用拭子法和牛的抗生素和磺胺实验法（CAST）。此外，美国近年来补充的一个新的实验方法快速抗生素筛选法（FAST）。 尽管这些快速微生物检测法有时会产生一些假阳性，但在某种程度上是允许的；如产生这类情况，可进一步做确证实验。牛奶中抗生素残留检测方法还有气相色谱法（GC）

18、、高效薄层色谱（HPTLC）、超临界流体色谱(SFC)和毛细管区域电泳法(CZE)等。这些方法尽管在残留检测中不常用，但因其各自特有的性能，能弥补常用方法中不足之处。（三）免疫法目前药物残留免疫分析技术主要分为两大类：一为相对独立的分析方法，即免疫测定法(immunoassays，IAs)，如RIA、ELISA、固相免疫传感器(soindphase immunosensor )等；二是将免疫分析技术与常规理化分析技术联用，如利用免疫分析的高选择性作为理化测定技术中的净化手段，典型的方式为免疫亲合色谱(immunoaffinity chromatogrphy,IAC)。与常规的理化分析技术相比，

19、免疫分析技术最突出的优点是操作简单，速度快、分析成本低。以使用微量滴板的ELISA为例，免疫测定法取样量小，前处理简单、容量大，仪器化程度低，检测奶与GC/MS或GC/ECD相似，可方便地达到ng/gpg/g级，分析效率则为HPLC或GC的几十倍以上。目前大部分抗生素已经建立了免疫测定法，如磺胺二甲基嘧啶、氯霉素、沙拉沙星、链霉素、四环素、莫能菌素等。1、在联用方法，免疫分析技术既可作为HPLC或GC等测定技术的样品净化或分离手段，如IAC/HPLIAC/GC、HOIAC/HPLC；也可作为其离线或在线检测方法，如HPLC/IA、TLC/IA、CZE/IA、SFC/IA、FIA/IA等，这些方

20、法结合了免疫分析的选择性、灵敏度与HPLC、GC等技术的高速、高效分离和准确检测能力，使分析过程简化、分析成本下降，拓展了待测物范围。在HPLC/IA等分析中，IA一般作为离线检测方法。又称免疫图谱法（immunograms），适用于液相检测器无响应或分离困难的残留组分的检测。FIA/IA可以实现IA的动态、实时和自动检测，分析速度快，已发展为一种专门的免疫测定技术FIIA。ELISA试剂盒是目前奶牛场和牛奶公司使用最广泛、快速、灵敏的检测抗生素残留的方法。各类抗生素试剂盒为国外生产，这使得国内的奶及奶制品公司花费较大。如德国拜发公司生产的抗生素检测试剂盒，一个96次检测试剂盒要花3800元，

21、每个样品的检测要花3050元。对一家中小型奶制品企业而言，每年在抗生素等药物的检测上要花费20多万元以上。因此很有必要研制和开发出国产的试剂盒，以降纸成本，提高经济效益。近几年，国内外免疫检测技术发展迅速，应用广泛，如美国BAF1-SNAP检测（）试剂盒已经得到AOAC及NCIMS认证。免疫层析检测技术（如胶体金试纸条）已成为中国快速诊断试剂产业服务商的第一品牌。而目前较为先进的技术如超高压液相色谱- 飞行时间质谱(UPLC-TOPMS)等更加先进技术也已经出现，利用这些技术已经可以测定(10-910-12)水平以及同时测定数十种以上的抗生素残留。目前趋向研究更为灵敏、准确、简便、快速的微生物

22、检测方法，因此一种快速、低廉、便捷的免疫检测抗生素残留试纸条必将诞生。5存在问题及今后的研发建议尽管目前已有许多的快速筛选试剂盒可供选择, 但每一种试剂盒在不同的国家应用的程度并不相同,每一种试剂盒的检测极限在国内还未得到普遍的检验。建议国家应选择几个有实力的研究单位对其进行检测,推荐几种,并出版指导手册。这样,才能防止不同方法之间造成误差和矛盾。中国的乳制品生产从奶牛生产至产品出厂经历的环节较多,其中奶站是一个关键的环节, 但目前大多数的奶站并不具备抗生素残留筛选能力,今后的重点在于装备奶站，但如果奶站使用的方法与工厂实验室方法不一致,很易出现评判问题,建议尽量装备同样的试剂盒。牛奶抗生素残

23、留检测和控制是一个复杂的过程,在畜产品生产中,随时均有可能混入一些非常用抗生素,对检测造成困难,因此,作为奶站或乳品企业,对奶牛场的管理和联络十分重要。五、预防和控制要想解决有抗奶问题，不能单单只是提高检测技术，最重要的还是预防和控制有抗奶的产生，从源头上解决，目前也有很多研究关于有抗奶的预防和控制这个问题1、防制有抗奶的主要措施正确的挤奶程序与挤奶设备、容具、用具的清洗、消毒。创造良好的挤奶环境，保持牛体、牛床干净，同时保证通风良好，注意灭蝇防鼠。挤奶设备，容器，用具的维修、保养、清洗、消毒有效，使其保持正常的工作状态。注意挤奶员手的清洁和消毒，且对待牛只要友好，尽量减少对牛的刺激。尽量避免

24、用水冲洗牛的乳房，应用消毒的毛巾揩洗，并擦干，保持其乳房和乳头的干与净。正确掌握机械挤奶或手工挤奶的方法。挤奶完毕，使用专用消毒剂对乳头进行药浴，以防止乳炎的发生。2、预防疾病及治疗。奶牛在饲养过程中经常出现的疾病主要有乳腺炎、子宫内膜炎、肢蹄病乳腺炎的防制，药物防治干奶期的乳腺炎常可获得较好的效果，隐性乳腺炎可使用左旋咪唑或生物酶制剂乳炎停治疗，代替抗生素也可以注射疫苗降低抗生素使用量。对干奶牛采用产前和产后分别注射亚硒酸钠V:的预防方法，也可以有效防治乳腺炎。另外目前还发现蒲公英是一种理想的抗乳腺炎强化饲料具有食药双重价值，这就提供了一个以极低成本高效率、无抗生素、长期预防同时治疗奶牛乳腺炎的新途径子宫内膜炎是奶牛养殖业中奶牛所患的常见病。目前,奶牛子宫内膜炎主要是用抗生素类药物治疗，容易导致抗生素残留，目前用生物酶制剂三维子宫净，治疗奶牛子宫内膜炎效果不错。其他预防疾病的措施： 合理的日粮配合， 在奶牛日粮中添加微量元素和维生素添加剂。专心-专注-专业