细胞生物学各章复习体及答案(共74页).doc

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1、精选优质文档-倾情为你奉上第一篇 概论1.1 细胞生物学概述1.1.1 选择题1.1.1.1 A型题1利用现代技术和手段从分子、亚细胞和整体水平等不同层次上研究细胞生命活动及其基本规律的科学称A 细胞遗传学 B 细胞生物学 C 细胞病理学 D 细胞生理学 E 细胞形态学2细胞学说的创始人是A RHook B Schleiden and Schwann C Rrown D WFlemming E CDarwin3最早发现细胞并将其命名为“cell”的学者是A RHook B ALeeuwenhook C Rrown D WFlemming E CDarwin4最早观察到活细胞的学者是A RHoo

2、k B ALeeuwenhook C Rrown D WFlemming E CDarwin5在1858年首先提出“细胞来自细胞”这一著名论断的学者是A RHook B ALeeuwenhook C Virchow D WFlemming E CDarwin6最早自制显微镜并用于观察细胞的学者是A Schleiden and Schwann B RHook and ALeeuwenhookC Virchow D Rrown E CDarwin7最早发现细胞的遗传物质DNA分子为双螺旋结构的学者是A Schleiden and Schwann B RHook and ALeeuwenhook C

3、 Watson and Crick D Rrown E CDarwin8在1933年底设计制造了世界上第一台电子显微镜（投射式）的学者是 A德国的鲁斯卡(Ruska) B英国的马丁(Martin) C比利时的马顿(Marton) D德国的赫尔穆特(Helmut) E德国的德里斯特(Driest)9世界上第一台扫描电镜是由下列哪位科学家研制出来的 A英国的马丁 B比利时的马顿 C德国的鲁斯卡 D德国的克诺尔(Knoll) E德国的赫尔穆特10在1944年首次证实 DNA分子为细胞的遗传物质的学者是 A沃森 B克里克 C埃弗里(Avery) D福尔根(Feulgen) E摩尔根11在1975年有人

4、将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合获得能分泌单克隆抗体的杂交瘤，这种单克隆抗体制备技术的发明者是A 柯勒(Kohler) B奥林斯(Olins) C罗伯逊(Roberson) D桑格(Sanger) E尼伦伯格(Nirenberg)1.1.1.2 X型题12现代的细胞生物学在哪些层次上来研究细胞的生命活动 A分子水平 B亚细胞水平 C细胞整体水平 D组织水平13活细胞的基本生命活动有 A生长发育 B分裂增殖 C遗传变异 D衰老与死亡1419世纪自然科学的三大发现包括 A进化论 B细胞学说 C能量守恒定律 D重演率1.1.2 填空题1细胞生物学是从 、 和 等3个水平上研究细胞生命活动的科学。2细

5、胞是人体和其他生物体 与 的基本单位。31933年德国人Ruska设计制造了第一台 显微镜。41944年埃沃端(Avery)以微生物的 实验证实了 是遗传物质。5细胞生物学的发展大致可分为 、 、 和 等几个阶段。61838年， 和 提出了 ，认为细胞是一切动植物的基本单位。7在我国基础科学发展规划中， 、 、 和 等被列为生命科学的四大基础学科。820世纪80年代以来，细胞生物学着重在 水平上探索细胞的生命活动规律，故又称为 。1.1.3 名词解释1cell biology 2medical cell biology 3molecular cell biology 4cell theory1

6、.1.4 问答题1细胞生物学的研究内容有哪些?2细胞生物学的形成与发展经历了哪几个阶段?3细胞生物学与医学的关系如何? 参 考 答 案1.1.1 选择题1.B 2.B 3.A 4.B 5.C 6.B 7.C 8.A 9.D 10.C 11.E 12.ABC 13.ABCD 14.ABC 1.1.2 填空题1.细胞；亚细胞；分子 2.结构；功能 3(透射式)电子 4转化；DNA 5细胞的发现及细胞学说建立；经典细胞学阶段；实验细胞学阶段；细胞生物学及分子生物学阶段 7施莱登(MJSchleiden)；施旺(MJSchwann)；细胞学说 8细胞生物学；分子生物学；神经生物学；生态学 9分子；分子

7、细胞生物学1.1.3 名词解释1细胞生物学，利用现代技术和手段从整体水平、超微结构水平和分子水平等不同层次上研究细胞生命活动及其基本规律的科学。其主要任务是搞清细胞内各部分的超微结构及分子组成、各种结构的基本功能、结构与功能的关系，在此基础上阐明细胞的增殖与分化、生长与代谢、遗传与变异、衰老与死亡等基本生命现象的本质和规律。2医学细胞生物学，以人体细胞为主要研究对象，探索其生长、发育、增殖、分化、遗传、变异、衰老、死亡以及细胞结构与功能的异常与人类疾病关系的学科。3分子细胞生物学，主要从分子水平上来研究细胞的结构与功能以及各种生命活动规律的学科。它代表了现代细胞生物学发展的主流和水平，是细胞生

8、物学发展的最新阶段，故当今的细胞生物学也常被称为分子细胞生物学。4细胞学说，18381839年由德国植物学家施莱登(MJSchleiden)和动物学家施旺(MJSchwann)共同提出的关于一切植物、动物都是由细胞组成的，细胞来自细胞，细胞是一切动植物的基本单位的著名理论。他们提出的论点分别是“细胞是构成植物的基本单位”、“动植物都是细胞的集合体”。1.1.4 问答题 1现代细胞生物学的研究内容十分广泛，主要包括细胞膜与胞内膜的结构与功能、各种细胞器的超微结构与功能、细胞核的结构与功能、染色体的结构与基因表达、细胞骨架体系、细胞增殖及调控、细胞分化及调控、细胞的衰老与凋亡、细胞通讯与细胞社会学

9、、细胞的起源与进化以及细胞工程等方面。2细胞生物学这门学科的形成和发展经历了以下几个阶段：细胞的发现；细胞学说的建立；经典细胞学阶段(细胞学的经典时期)；实验细胞学时期；细胞生物学阶段。3细胞生物学与医学有着密切的关系。从这两门学科的发展历史上看，细胞生物学领域的许多研究成果包括新理论、新技术、新方法对医学的发展起到巨大的推动作用。而且，医学上目前面临的许多基本问题都需要由细胞生物学予以阐明。在基础医学方面，细胞生物学的研究成果揭示了多种人类疾病的发病机理，例如对正常细胞与肿瘤细胞的增殖规律、基因表达等基本生物学特性的研究使得人们已初步阐明了某些肿瘤的发生机理，从而为抗癌药物的研制和临床上设计

10、合理的化疗与放疗方案提供了依据；溶酶体是细胞中的一种重要细胞器，其结构功能以及与疾病的关系是细胞生物学的重要研究内容，人们发现，矽肺这种重要的职业病是空气中的矽尘通过呼吸进入肺组织中的巨噬细胞后使溶酶体破裂，水解酶流入细胞质导致巨噬细胞不断死亡的结果；动脉粥样硬化的发生则可能是动脉内皮细胞的结构与功能异常所致。另外，细胞膜受体的发现及相关受体理论的产生是细胞生物学的重要研究成果，它使人们认识到某些疾病的发生是患者细胞膜上相应的受体缺如或数目减少的结果。在临床医学方面，细胞生物学领域关于正常细胞与肿瘤细胞形态结构的比较研究，为临床上各种肿瘤的确诊提供了依据。单克隆抗体制备技术及相应的单克隆抗体的

11、产生是细胞生物学的一项伟大成就，单抗的应用使得恶性肿瘤这类重大疾病的无创伤性早期诊断及药物的靶向治疗有了新手段。再如，线粒体这种细胞器的结构与功能状态可作为细胞病变或损伤时的敏感指标之一，是细胞病理学检查的重要内容。总之，细胞生物学与基础医学和临床医学有着密切的关系，人类所面临的许多重大医学问题的解决,需要依赖细胞生物学研究的突破。1.2 细胞生物学研究技术和方法1.2.1 选择题1.2.1.1 A型题1小鼠骨髓细胞的染色体标本一般制备成 A切片 B涂片 C滴片 D压片 E装片2人们需要观察立体感很强的细胞内的三度（维）空间的微细结构，需要下列哪项技术 A光镜技术 B投射电镜 C扫描电镜 D超

12、高压投射电镜 E免疫荧光镜技术3利用核苷酸探针对玻片上的组织或细胞DNA分子上的某特定基因或核苷酸顺序进行探测和定位的技术，称为A 放射自显影技术 B免疫荧光显微镜技术 C免疫电镜技术 D液相杂交技术 E原位杂交技术4用荧光染料标记的抗体处理细胞后在荧光显微镜下对细胞中特殊分子进行定位属于A 放射自显影技术 B免疫荧光显微镜技术 C免疫电镜技术 D液相杂交技术 E原位杂交技术5模拟体内的条件使细胞在体外生存、生长和繁殖的过程称为 A细胞培养 B原代培养 C传代培养 D细胞克隆 E细胞融合6分离出单个细胞在适当的条件下使之增殖成均一的细胞群体称为 A细胞培养 B原代培养 C传代培养 D细胞克隆

13、E细胞融合7目前对细胞表面形状能较好地观察，是由于有了A 放射自显影术 B冰冻蚀刻技术 C细胞显微光谱分析技术 D细胞融合技术 EX射线衍射技术8在光学显微镜下所观察到的组织或细胞结构一般称为 A显微结构 B超微结构 C亚显微结构 D分子结构 E微细结构9研究细胞的超微结构一般要利用下列哪种技术 A光学显微镜技术 B电子显微镜技术 C X射线衍射技术 D离心技术 E电泳技术10关于光学显微镜，下列哪项有误 A是利用光线照明，将微小物体形成放大影像的仪器 B细菌和线粒体是光镜能清晰可见的最小物体 C由机械系统和光学系统两大部分构成 D可用于观察细胞的显微结构 E其分辨力由目镜决定11关于光镜的使

14、用，下列哪项有误 A用显微镜观察标本时，应双眼同睁，双手并用 B按从低倍镜到高倍镜再到油镜的顺序进行标本的观察 C使用油镜时，需在标本上滴上香柏油或石蜡油 D使用油镜时，需将聚光器降至最低，光圈关至最小 E使用油镜时，不可一边在目镜中观察，一边下降镜筒或上升载物台12利用不同性质有机染料可对细胞中不同成分选择性染色，下列哪种结果有误 A碘液可使口腔上皮细胞的细胞质和细胞核呈深浅不同的棕黄色 B吉姆萨染液可使细胞核或染色体呈紫红色或桔红色 C甲基绿可使 RNA分子呈蓝绿色 D派洛宁可使 RNA分子呈红色 E苏木精可使细胞内核酸呈蓝色13适于观察细胞复杂网络如内质网膜系统、细胞骨架系统的三维结构的

15、显微镜是 A普通光镜 B荧光显微镜 C相差显微镜 D暗视野显微镜 E共焦激光扫描显微镜14关于共焦激光扫描显微镜，下列哪项有误 A以单色激光作为光源 B激光变成点光源后聚焦到标本成为点照明 C点光源激光束在标本的整个焦平面进行光点扫描后在荧光屏上成像 D图像信息要经电脑三维重建处理 E所用标本须经超薄切片15关于超薄切片，下列哪项有误 A厚度在50100nm的切片称为超薄切片 B通过超薄切片可将一个细胞切成100200片 C制备超薄切片需使用专门的器械超薄切片机 D超薄切片常用玻璃制成的刀切成 E组织细胞样品被切片之前常需双重固定但无需包埋16关于冷冻割断技术，下列哪项有误 A用该技术所制标本

16、可在扫描电镜下观察细胞的内部构造 B生物样品在割断前须经固定和液氮的快速冷冻处理 C是电镜样品制备技术的一种 D细胞经割断后可直接在扫描电镜下观察 E可获得细胞内各种细胞器的立体形貌17关于冷冻蚀刻复型技术，下列哪项有误 A在冷冻割断技术的基础上发展而来 B其本质是将细胞断面的形貌印在复型膜上 C复型是将铂碳混合物喷到细胞断面上形成的一层膜 D观察时将覆有铂碳膜的细胞断面放人电镜 E在透射电镜下可获得细胞内部的高分辨率图像18关于 X射线衍射技术，下列哪项有误 A是测定生物大分子结构的一项适用技术 B其原理是利用 X线的衍射效应来推断物质的分子结构 C X线是波长较短的电磁辐射，比电子的穿透力

17、强 D该技术能检测较薄的含水标本 E可测定蛋白质结晶分子中原子的空间排布19适于观察无色透明活细胞微细结构的光学显微镜是A 相差显微镜 B暗视野显微镜 C荧光显微镜 D偏振光显微镜 E普通显微镜20主要用于观察活细胞中有规则的纤维结构如纺锤丝、染色体以及纤维丝等构造的光镜是A 荧光显微镜 B相差显微镜 C普通显微镜 D暗视野显微镜 E偏振光显微镜21关于相差显微镜，下列哪项有误 A利用了光的衍射和干涉特性 B可使相位差变成振幅差 C所观察的标本要经固定处理 D一般使用高压汞灯作光源 E装有环形光阑、相位板和中心望远镜等特殊部件22关于荧光显微镜；下列哪项有误 A其光源通常为高压汞灯或氖灯 B必

18、需装备激发滤片和阻断滤片 C根据光化荧光的原理设计制造的 D可用于观察固定细胞和活细胞 E使用时应在较明亮的环境中进行23光学显微镜的分辨率(最小分辨距离)可达 A0.1m B0.2m C0.3m D0.4m E0.5m24关于电子显微镜，下列哪项有误 A组织或细胞观察前均需经超薄切片 B分为透射式和扫描式两大类 C分辨率可达0.2nm D利用电子束作照明源 E在荧光屏上成像25关于光学显微镜的分辨率，下列哪项有误 A是光镜的主要性能指标 B也称为分辨本领 C指分辨出标本上两点间最小距离能力 D显微镜的分辨率由物镜决定 E与照明光的波长成正比26分别使用光镜的低倍镜和高倍镜观察同一细胞标本相，

19、可发现在低倍镜下 A相较小，视野较暗 B相较小，视野较亮 C相较大，视野较暗 D相较大，视野较亮 E相及视野的亮度均不改变27下列哪种显微镜需将标本进行超薄切片并经醋酸铀等染料染色后才能观察A 扫描式电子显微镜 B透射式电子显微镜 C扫描隧道显微镜 D荧光显微镜 E相差显微镜28电子散射少、对样品损伤小、可用于观察活细胞的电子显微镜是A 普通透射电镜 B普通扫描电镜 C 超高压电镜 D扫描透射电镜 E分析扫描电镜29关于透射式电镜，下列哪项叙述是错误的 A由德国科学家 Ruska等发明 B以电子束作为光源B 电子透过标本后在荧光屏上成像 D分辨率较高E适于观察细胞的外观形貌30关于扫描式电镜，

20、下列哪项有误 A20世纪60年代才正式问世 B景深长，成像具有强烈立体感 C电子扫描标本使之产生二次电子，经收集放大后成像 D标本无需经超薄切片即可观察 E适于观察细胞的内部构造31关于扫描隧道显微镜(STM)，下列哪项叙述错误 ASTM是 IBM苏黎世实验室的 Binnig等人在1981年发明的 B为扫描探针显微镜的一种，具有高分辨本领 C仅可在真空条件下工作 D依靠一极细的金属针尖在标本表面扫描来探测标本的形貌 E可直接观察到 DNA、RNA和蛋白等生物大分子32适于观察细胞表面及断面超微结构三维图像的仪器是 A普通光镜 B荧光显微镜、 C相差光镜 D扫描电镜 E透射电镜33关于原位杂交技

21、术，下列哪项有误 A可探测某种基因在染色体上或细胞中的位置 B所用探针只能用放射性同位素标记 C可分为光镜原位杂交和电镜原位杂交两种 D杂交反应在载玻片上进行 E是核酸分子杂交技术的一种34关于放射自显影技术(autoradiography)，下列哪项错误 A利用放射性同位素探测细胞内生物大分子动态变化的一种方法 B包括宏观自显影、光镜自显影和电镜自显影等3种类型 C具有灵敏度高和操作简便、无污染等优点 D自显影时常用的感光材料包括 X光胶片和原子核乳胶等 E光镜自显影一般多用液体核子乳胶浸膜等方法进行1.2.1.2 X型题35物象在低倍镜（5）下清晰可见，换高倍镜（45）后看不见了，这是因为

22、 A玻片放反了 B高倍物镜故障 C物象不在视野正中央 D焦距没调好36在普通光镜上可用于调节视野内光线强弱的装置有 A通光孔 B反光镜 C光圈 D聚光镜37常用于观察细胞超微结构的仪器是 A荧光显微镜 B相差显微镜 C扫描电镜 D透射电镜38普通光镜上决定放大倍数的部件有 A目镜 B物镜 C反光镜 D. 聚光镜39普通光镜上的下列物镜中哪些不能浸在香柏油中使用 A5物镜 B10物镜 C40物镜 D100物镜40制备石蜡组织切片不可缺少以下哪些环节 A低渗 B固定 C. 脱水 D包埋41制备单克隆抗体所要涉及的细胞生物学技术有 A细胞融合 B细胞培养 C细胞克隆 D细胞低渗42透射电镜所具有的特

23、征有 A分辨率高 B放大倍数高 C成像立体感强 D标本须超薄43扫描电镜的基本特征是A 可见细胞表面的三维形态 B成像立体感强 C标本须超薄 D标本表面喷镀金属膜44利用超速离心机以差速离心法可从动物组织匀浆中分离出下列哪些细胞器 A细胞核 B线粒体 C溶酶体 D核糖体45制备小鼠骨髓细胞染色体标本需要下列哪些物品 A离心机 B粗天平 C电泳仪 D培养箱46细胞或组织培养基中应含有下列哪些成分 A无机盐 B氨基酸 C维生素 D小牛血清47下列哪些物质能促进细胞之间发生融合 A灭活病毒 B植物血凝素(PHA) C. 聚乙二醇(PEG) D秋水仙素48要得到一杂种细胞系，需要下列哪些细胞生物学技术

24、 A细胞融合 B细胞培养 C细胞克隆 D细胞分离49能将小块组织分离成单细胞悬液的物质有 A聚乙二醇(PEG) B胰蛋白酶 C胶原酶 D乙二胺四乙酸(EDTA)50电场诱导细胞融合的优点有 A操作简便 B无毒性 C融合率高 D融合细胞易存活51流式细胞计(flow cytometer)或流式细胞分选计(flow cell sorter)能快速测定细胞下列哪些参数 A DNA含量 B RNA含量 C蛋白质含量 D细胞体积52姐妹染色单体互换(sister chromatid exchange，SCE)显示技术的用途有 A发现染色体的损伤 B判断细胞的增殖周期 C证明 DNA的半保留复制 D发现突

25、变的基因53放射自显影技术中常用的放射性同位素(核素)有 A3H B14C C32P D35S54卡诺(carnoy)固定液一般由下列哪些种试剂按一定比例混合而成 A甲醇 B甘油 C甲醛 D冰乙酸1.2.2 填空题1光学显微镜的分辨率(R)可达到 ，其计算公式为 。2在光镜下和电镜下所观察到的细胞结构分别称为 和 。3适于观察活细胞的光镜有 、 和 等。4细胞生物学研究中常用的光镜有 、 、 、 和 。5电子显微镜按工作原理和用途的不同可分为 和 两类。6细胞培养一般分为 和 两种情况。7细胞组分的分级分离方法有 、 和 等。8利用超速离心机对细胞组分进行分级分离的常用方法有 和 。9常用于促

26、进细胞融合的物质是 和 。10普通离心机、高速离心机、超速离心机的转速一般分别为 、 和 。11细胞不同组分在超速离心机中的沉降速率常用 表示，它与细胞组分的 、 和 有关。12由小鼠骨髓瘤细胞与某一B细胞融合后形成的 细胞克隆所产生的抗体称 。13从组织中分离不同类型细胞的方法有 、 和 分选仪。14人及动物细胞培养所用合成培养基中除含多种 、 和 外，一般还需加入 。15细胞生物学研究中常用的真核细胞系有 、 和 等。16两个不同类型细胞融合时先形成具有双核的 ，经有丝分裂后才形成 。17单个细胞经有丝分裂形成的 称为一个 。18在荧光显微镜中 光的照射下，经丫啶橙染色的细胞中，DNA发出

27、 荧光，而RNA发出 荧光。19透射电镜观察的组织细胞标本在超薄切片之前常用 和 双重固定。20扫描电镜观察的组织细胞标本制备程序一般是 、 、 和 。1.2.3 名词解释1resolution 2microscopic structure 3ultrastructure ultrastructure 4freeze etching replica 5clone 6cell line 7cell culture 8primary culture 9sub-culture10contact inhibiton contact inhibiton 11cell-free system cell-f

28、ree system 12in situ hybridization1.2.4 问答题1电子显微镜与光学显微镜的重要区别是什么?2如何将动物或人体组织细胞制备成可在透射电镜下观察的超薄切片标本?3研究细胞的常用技术有哪些?4试述细胞分离所用方法的基本原理?5说明对细胞不同组分进行分离所用方法的基本原理?6用什么方法追踪活细胞中蛋白质合成与分泌过程?包括哪几个步骤? 参 考 答 案1.2.1 选择题1C 2D 3E 4B 5A 6D 7B 8A 9B 10E 11D 12C 13E 14E 15E 16D 17E 18D 19A 20E 21C 22E 23B 24A 25E 26B 27B 2

29、8C 29E 30E 31C 32D 33B 34C 35ABCD 36BCD 37CD 38AB 39ABC 40BCD 41ABC 42ABD 43ABD 44ABCD 45AB 46ABCD 47AC 48ABCD 49BCD 50ABCD 51ABCD 52AC 53ABCD 54AD1.2.2 填空题102m；R061NA(NAnsin/2) 2显微结构；超（亚）微结构 3相差显微镜；暗视野显微镜；倒置显微镜4普通显微镜；暗视野显微镜；相差显微镜；荧光显微镜；倒置显微镜 5透射电镜；扫描电镜 6原代培养；传代培养 7超速离心法；层析法；电泳法 8差速离心法；密度梯度离心法 9灭活仙台

30、病毒；聚乙二醇 108 000rmin；8 00025 000rmin；25 00085 000rmin 11沉降系数（S）；大小；形状；密度 12杂交瘤；单克隆抗体 13离心沉淀；介质粘附；流式细胞 14氨基酸；维生素；无机盐；小牛血清 15 HeLa细胞系；3T3细胞系；CHO细胞系 16异核体；杂种细胞 17细胞群；克隆 18紫外光；绿色；红色 19戊二醛；四氧化锇 20固定；脱水；干燥；镀膜 1.2.3 名词解释1分辨率，也称分辨本领。指显微镜或人眼在25cm的明视距离处分辨或区分被检物体细微结构的最小间隔，即两点间最小距离的能力。能够区分的两点间的距离越小，表示分辨率越高。显微镜的分

31、辨率由物镜所决定，与其镜口率和光线的波长直接相关。人眼的分辨率约为100m，而光镜的分辨率最高可达0.2m，电镜的分辨率比光镜高1001 000倍，达20.2nm。2显微结构，通过光学显微镜所观察到的样品的各种结构。如细胞的大小、外部形态以及细胞核、线粒体、高尔基体、中心体等内部构成都属于显微结构。3超微结构，也称为亚显微结构(submicroscopic structure)。指在电子显微镜下所观察到的细胞结构，如细胞核、线粒体、高尔基体、中心体、核糖体、微管、微丝等细胞器的微细结构等。4冷冻蚀刻复型，扫描电镜样品制备技术的一种。其基本过程是先将组织或细胞标本进行超低温冷冻(液氮中)，然后在

32、真空中割断样品再稍升温使冰升华完成蚀刻，此时细胞断面出现被蚀刻后的浮雕效果，再将样本喷上金或铂和碳，最后将组织细胞溶解掉剩下能反映细胞蚀刻面形貌的碳金属膜的复型。将该复型放入电镜下可观察到立体感强、分辨率高的细胞断面各种微细结构的图像。5克隆，在细胞生物学中，克隆指由单个细胞经有丝分裂形成的细胞群。通过细胞克隆的方法可制备出生物学性状均一的细胞系。 6细胞系，可在体外培养条件下连续传代(无限制地传代)的细胞群。其细胞的特点是染色体数目明显改变，一般呈亚二倍体或非整倍体；失去一般体细胞具有的接触抑制的特性而具有癌细胞的特点，容易传代培养。例如细胞生物学研究中常用的 HeLa细胞系(由人宫颈癌细胞

33、培养而成)、CHO细胞系(由中国仓鼠卵巢细胞培养而成)、 BHK-21细胞系(仓鼠AAJ鼠肾成纤维细胞)和3T3细胞系(来源于小鼠胚胎细胞)。7细胞培养，使离体细胞在实验室人工模拟机体内的条件下(如合适的温度、全面的营养物质等)生长发育、分裂增殖的一项重要的细胞生物学研究技术。通过细胞培养可获得大量细胞作为研究所需的材料，如细胞增殖周期及调控、细胞癌变机理与衰老、基因表达与控制以及细胞杂交等多个方面的研究都离不开细胞培养。可分为原代培养和传代培养两个阶段或两种类型。8原代培养，指从机体组织中取材后接种到培养基中所进行的细胞培养，即直接取材于机体组织的细胞培养。所形成的细胞称原代细胞，它是在体外

34、培养任何一种体细胞所必须经历的阶段和传代培养的基础。也就是说，任何动物和人体细胞的培养均需从原代细胞培养做起。一般来说，胎儿的肾、肺、卵巢、精巢、肌肉与肿瘤等组织的细胞较易培养，而神经细胞较难培养。9传代培养，简称传代，指当原代培养的细胞在培养瓶中生长、增殖到一定密度后，一分为二或以其他比例分装或转移到2个以上的培养瓶中所进行的再培养。在培养过程中，要使细胞能够在容积中正常地生长和繁殖需要经常进行培养细胞的传代，所以传代培养可多次进行。适应在体外培养条件下持续传代培养的细胞称为传代细胞。传代累积的次数就是细胞的代数。一般来讲，原代培养的细胞传至10代就不易传下去了，其生长出现停滞且大多数细胞衰

35、老死亡，只有极少数细胞能存活下来并继续传代4050次。在此过程中，细胞保持染色体数目稳定和接触抑制行为。当细胞传至50代以后又会出现“危机”不能传下去了，但其中少数发生突变，获得了癌变细胞特性，细胞有可能无限制地传下去，如 HeLa细胞株。10接触抑制，细胞培养过程中出现的一种有趣现象。在培养开始后，分散的细胞悬浮在培养瓶中不久就会贴附在瓶壁上，原来呈圆形的细胞一经贴壁便会迅速铺展而变成多种形态，随即细胞开始分裂，贴壁生长形成致密的单层细胞。当细胞分裂、生长到表面相互接触时，就会停止增殖，维持相互接触的单层细胞状态直至衰老，这就是所谓的接触抑制。11非细胞体系，包含有进行细胞内正常生物学过程所

36、需的成分但不具有完整细胞结构的体外实验反应体系。一般由活细胞经裂解破碎、超速离心除去某些成分后制备而来。非细胞体系在研究探讨 DNA复制、RNA转录、蛋白质合成、核膜及染色质的组装等细胞内生命活动的基本过程和机理方面具有重要应用价值。12原位杂交，利用放射性同位素或非放射性物质(如地高辛或生物素)标记的核酸探针与玻片上的细胞核中或染色体上的某种核苷酸顺序或基因进行杂交以确定该基因座位的一种重要技术。其基本程序是，先制备组织切片或染色体玻片标本和所需的核酸探针，再将玻片加热使细胞核或染色体中的 DNA变性成单链状态，滴加含有探针的缓冲液至玻片上在适当的条件下进行杂交，最后用放射自显影或免疫显色、

37、酶促显色反应显示目标基因或核酸顺序所在位点。1.2.4 问答题 1电子显微镜是以电子束为照明源，通过电子流对样品的透射或反射及电磁透镜的多级放大后在荧光屏上成像的大型仪器，而光学显微镜则是利用可见光照明，将微小物体形成放大影像的光学仪器。概括起来，电镜与光镜主要有以下几个方面的区别：照明源不同。电镜所用的照明源是电子枪发出的电子流，而光镜的照明源是可见光(日光或灯光)，由于电子流的波长远短于光波波长，故电镜的放大及分辨率显著地高于光镜。透镜不同。电镜中起放大作用的物镜是电磁透镜(能在中央部位产生磁场的环形电磁线圈)，而光镜的物镜则是玻璃磨制而成的光学透镜。电镜中的电磁透镜共有三组，分别与光镜中

38、聚光镜、物镜和目镜的功能相当。成像原理不同。在电镜中，作用于被检样品的电子束经电磁透镜放大后打到荧光屏上成像或作用于感光胶片成像。其电子浓淡的差别产生的机理是，电子束作用于被检样品时，入射电子与物质的原子发生碰撞产生散射，由于样品不同部位对电子有不同散射度，故样品电子像以浓淡呈现。而光镜中样品的物像以亮度差呈现，它是由被检样品的不同结构吸收光线多少的不同所造成的。所用标本制备方式不同，电镜观察所用组织细胞标本的制备程序较复杂，技术难度和费用都较高，在取材、固定、脱水和包埋等环节上需要特殊的试剂和操作，最后还需将包埋好的组织块放人超薄切片机切成50100nm厚的超薄标本片。而光镜观察的标本则一般

39、置于载玻片上，如普通组织切片标本、细胞涂片标本、组织压片标本和细胞滴片标本等。 2一般来说，由于电子的穿透力很弱，只能透过极薄的物体，组织细胞必须经超薄切片后才能放入透射电镜中观察细胞的超微结构。具体讲，透射电镜所用的标本一般要切成50100nm厚的薄片，即一个细胞要切成100200片。超薄切片的制备是电镜技术的一个重要方面。它包括一系列复杂的处理过程和某些独特的技术环节：固定。这是电镜样品制备的一个重要环节，其目的是使样品中细胞的形态结构及各种成分保持在生前状态而不发生改变。固定要及时和彻底，为了达到良好的固定效果，组织的取材也很重要，尽量实施活体取材，且整个取材操作最好在1分钟内完成。待固

40、定的组织的体积要小，通常切成0.5mm见方的小块，否则影响固定效果，获得所需组织材料后应立即投入固定液中。通常采用戊二醛和四氧化锇对标本进行双重固定，其中戊二醛可在蛋白质分子之间形成共价键使它们交联固定，而四氧化锇除了与蛋白质共价结合外，还对脂类物质在内的多种成分有良好的固定作用。包埋，即先将固定和脱水处理后的标本放入液态的包埋剂(常用环氧树脂)中浸透，再对包埋块加温使之聚合成含有待切标本的固体包埋块。超薄切片。将包埋块经适当修整后放入超薄切片机中按操作程序用玻璃质地的切刀切成薄片。切下的薄片一般置于铜质的载网(相当于载玻片)上。染色。由于电子的波长单一，故细胞样品在电子束的照射下既不能产生颜

41、色的差别，也不易产生足够的明暗差别(反差)，故载网上的超薄切片一般还需经重金属盐染色，这种利用重金属来增加细胞某些成分的电子散射能力从而增大标本反差的染色称为电子染色。常用的电子染色剂是醋酸铅和柠檬酸铀。位于铜网上的标本经铅或铀染色后即可放入透射电镜中观察了。一般认为，利用超薄切片法可以观察到细胞中几乎所有的超微结构。 3目前用于细胞或细胞生物学研究的常用技术和手段有以下多种：观察细胞显微结构的光学显微镜技术；探索细胞超微结构的电子显微镜技术；研究蛋白质和核酸等生物大分子结构的 X线衍射技术；用于分离细胞内不同形态大小细胞器的离心技术；用于培养具有新性状细胞的细胞融合或杂交技术；使机体细胞能在体外长期生长繁殖的细胞培养技术；能对不同类型细胞进行分类并测其体积、DNA含量等数据的流式细胞光度(分选)术；利用放射性同位素对细胞中的 DNA、RNA或蛋白质进行示踪或定位的放射自显影技术；用于探测基因组中某种基因是否存在、是否表达以及拷贝数多少的核酸分子杂交技术；能将细胞中的特定蛋白质或核酸分子进行分离纯化的层析技术和电泳技术等。 4从多种细胞的悬液(如血液)分离不同细胞常用的方法有离心分离法、亲和分离法和流