紫外分光光度法测定蛋白质含量实验报告(共3页).docx

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1、精选优质文档-倾情为你奉上紫外分光光度法测定蛋白质含量一、 实验目的1. 学习紫外光度法测定蛋白质含量的原理；2. 掌握紫外分光光度法测蛋白质含量的实验技术。二、 实验原理1.测蛋白质含量的方法主要有：测参数法：折射率、相对密度、紫外吸收等；基于化学反应:定氮法、双缩脲法、Folin酚试剂法等。本实验采用紫外分光光度法。2.蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基的苯环中含有共轭双键，因此，蛋白质具有吸收紫外光的性质，其最大吸收峰位于280nm附近（不同蛋白质略有不同）。在最大吸收波长处，吸光度与蛋白质溶液的浓度服从朗伯比尔定律。利用紫外吸收法测蛋白质含量的准确度较差，原因有二：对于测定那些与标准蛋白质中

2、酪氨酸和色氨酸含量差异较大的蛋白质，有一定误差，故该法适于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质；样品中含有的嘌呤、嘧啶等吸收紫外光的物质，会出现较大干扰。三、 仪器与试剂TU1901紫外可见分光光度计、标准蛋白质溶液3.00mgmL-1、0.9%NaCl溶液、试样蛋白质溶液。 10mL比色管、1cm石英比色皿、吸量管。四、 实验步骤1.绘制吸收曲线用吸量管吸取2mL3.00mgmL-1标准蛋白质溶液于10mL比色管中，用0.9%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液作参比溶液，在190400nm间每隔5nm测一次吸光度Abs，记录数据并作图。2.绘制标准曲线

3、用吸量管分别吸取1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL3.00mgmL-1标准蛋白质溶液于10mL比色管中，用0.9%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液作参比溶液，在波长280nm处分别测其吸光度，记录数据并作图。3.样品测定取适量浓度试样蛋白质溶液，在波长280nm处测其吸光度，重复三次。在已经得到标准曲线的情况下，为了使测量结果准确度高，待测溶液的浓度需在标准曲线的线性范围内，所以，先测定试样蛋白质原液的吸光度（1.363），估算浓度为2.0960 mgmL-1，再将原试液稀释至5倍（即取2mL试液，用0.9%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀），估算浓

4、度为0.4192 mgmL-1，测吸光度，重复三次五、 数据处理与结果分析表1绘制吸收曲线的相关数据/nmAbs/nmAbs/nmAbs/nmAbs400-0.00334502900.2042351.604395-0.0033400.0012850.342302.673390-0.0033350.0012800.392253.094385-0.0033300.0022750.3772203.003380-0.0023250.0022700.3292152.829375-0.0023200.0032650.2782102.584370-0.0023150.0042600.232052.10336

5、5-0.0013100.0072550.1882000.648360-0.0023050.0132500.1841950.443355-0.0013000.0312450.2751900.384350-0.0012950.0782400.65-图1吸收曲线 在上图吸收曲线中可以看到有两处吸收峰，且在波长225nm处的吸收峰远大于280nm处，这是由于在波长250nm以下时，溶剂吸收较为严重，干扰较大，所以，蛋白的最大吸收波长应为280nm。表2绘制标准曲线的相关数据浓度c/molL-10.30.450.60.750.9Abs0.2170.2970.4080.510.591图2标准曲线表3标准曲

6、线（y=ax+b）的相关数据abR20.64070.02020.9969将试样所测得吸光度带入标准曲线中求蛋白质含量：稀释以后的蛋白质的浓度 cx=(Abs-0.0202)/0.6407原试样中蛋白质浓度 c=(cx*10)/2表4计算结果Abs0.3100.2850.283cx/mgmL-10.45230.41320.4101c/mgmL-12.2612.0662.051平均值c/gmL-12.126|c-c|/gmL-10.1350.0600.075所测蛋白质试样的浓度约为2.126mgmL-1.单次测定的标准偏差:s =0.12相对标准偏差： sr =100% =5.5%专心-专注-专业