生物技术制药知识点总结.docx

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1、精品名师归纳总结生物技术制药学问点纲要生物技术制药 : 采纳现代生物技术,借助某些微生物、植物、动物生产药品。生物技术药物 一般来说,采纳 DNA重组技术或其他生物新技术研制的蛋白质或核酸类药物。生物药物： 生物技术药物是重组产品概念在医药领域的扩大应用,并与自然药物.微生物药物 .海洋药物和生物制品一起归类为生物药物。生物技术： 基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程、生化工程、蛋白质工程、抗体工程等。基因工程 是生物技术的核心和关键,是主导技术。细胞工程 是生物技术的基础。 酶工程 是生物技术的条件。 发酵工程 是生物技术获得最终产品的手段。生物技术 ：从广义角度来看,是人类对生物资源（包括

2、微生物、植物、动物）的利用、改造并为人类服务的技术。第三代生物技术是海洋生物技术我国科学家承担了人类基因组方案1%的测序工作现代生物技术包括 :重组 DNA技术细胞和原生质体融合技术酶和细胞的固定化技术植物脱毒和快速繁衍技术动物和植物细胞的大量培育技术动物胚胎工程技术现代微生物发酵技术现代生物反应工程和分别工程技术蛋白质工程技术 海洋生物技术现代生物技术的进展趋势主要表达在以下几个方面：基因操作技术日新月异,不断完善。新技术、新方法一经产生便快速的通过商业渠道出售专项技术,并在市场上加以应用。基因工程药物和疫苗的讨论和开发突发猛进。新的生物治疗制剂的产业化前景特别光明,21 世纪整个医药工业将

3、面临全面的更新改造。转基因植物和动物取得重大突破现代生物技术在农业上的广泛应用将给农业和畜牧业生产带来新的飞跃。阐明生物体基因组及其编码蛋白质的结构与功能是当今生命科学进展的一个主流方向,基因治疗取得重大进展,有可能革新整个疾病的预防和治疗领域。蛋白质工程是基因工程的进展,它将分子生物学、结构生物学、运算机技术结合起来,形成一门高度可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结综合的学科。信息技术的飞跃进展渗透到生命科学领域中,形成形成引人注目、用途广泛的生物信息学。生物技术药物的特性是什么？生物技术药物的特点是：（1） 分子结构复杂（2） 具有种属差异特异性（3） 治疗针对性强 . 疗效高

4、（4） 稳固性差（5） 免疫原性（6） 基因稳固性（7） 体内半衰期短（8） 受体效应（9） 多效应和网络效应（10） 检验特别性生物技术进展的不同阶段的技术特点和代表产品（1） 传统生物技术的技术特点是酿造技术,所得产品的结构较为简洁,属于微生物的初级代谢产物。代表产品如酒 . 醋. 乙醇,乳酸,柠檬酸等。（2） 近代生物技术阶段的技术特点是微生物发酵技术,所得产品的类型多,不但有菌体的初级代谢产物. 次级代谢产物,仍有生物转化和酶反应等的产品,生产技术要求高. 规模庞大,技术进展速度快。代表产品有青霉素,链霉素,红霉素等抗生素,氨基酸,工业酶制剂等。（3） 现代生物技术阶段的技术特点是DN

5、A重组技术。所得的产品结构复杂,治疗针对性强,疗效高,不足之处是稳固性差,分别纯化工艺更复杂。代表产品有胰岛素,干扰素和疫苗等。新型生物反应器有 :1. 气升式生物反应器2. 流化床式生物反应器3. 固定床式生物反应器4. 袋式或膜式生物反应器5. 中空纤维生物反应器生物技术药物分类1. 重组 DNA技术制造的多肽、蛋白类药物2. 基因药物,包括基因治疗药、基因疫苗、反义药物、核酶3. 来自动、植物、微生物的自然药物4. 合成与半合成的生物药物依据医学用途分类 ：1. 治疗药物,治疗疾病是生物药物的主要功能。2. 诊断药物,具有速度快、灵敏度可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结高、

6、特异性强的特点。 3. 预防药物,对于很多传染性疾病来说,预防比治疗更重要。生物技术药物的特性1. 分子结构复杂 2. 具有种属特异性 3. 治疗针对性强,疗效高 4. 稳固性差 5. 基因稳固性 6. 免疫原性 7.体内 t1/2短 8. 受体效应 9. 多效性和网络性效应 10. 检验的特别性生物技术制药的特点 1. 高技术：高学问人才,高技术手段2. 高投入： 13 亿美元/ 药 3. 长周期： 810年/ 药 4. 高风险：胜利率 510%5. 高收益：回报率 10 倍生物技术制药分为哪些类型？生物技术制药分为四大类：（1） 应用重组 DNA技术 包 括基因工程技术 . 蛋白质工程技术

7、 制造的基因重组多肽,蛋白质类治疗剂。（2） 基因药物,如基因治疗剂,基因疫苗,反义药物和核酶等（3） 来自动物 . 植物和微生物的自然生物药物（4） 合成与部分合成的生物药物生物技术在制药中有那些应用.答案：生物技术应用于制药工业可大量生产廉价的防治人类重大疾病及疑难症的新型药物,详细表达在以下几个方面：（1） 基因工程制药,利用基因工程技术可生产出具有生理活性的肽类和蛋白质类药物,基因工程疫苗和抗体,仍可建立更有效的药物挑选模型,改良现有发酵菌种,改进生产工艺,供应更精确的诊断技术和更有效的治疗技术等。随着基因技术的进展,应用前景会更宽阔。（2） 细胞工程和酶工程制药该技术的进展为现代制药

8、技术供应了更强大的技术手段,使人类可掌握或干预生物体初次生代谢产物和生物转化等过程,使动植物能更有效的满意人类健康方面的需求。（3） 发酵工程制药发酵工程制药的进展主要表达在对传统工艺的改进,新药的研制和高效菌株的挑选和改造等。第一节 基因的概念与特性一、基因的概念 :DNA分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列, 是遗传物质的最小功能单位。二、基因的一般特性 ：基因可自我复制,基因打算蛋白质结构,基因可突变。基因按功能分为 ：结构基因调控基因三、DNA的结构与性能 DNA的结构：四种核苷酸（ A T C G ）连接一级结构、 DNA二级结构（ , ）,双螺旋结构。 DNA的性质与功能 : 吸

9、取光谱 260电场中泳动变性、复性、杂交其次节 DNA的复制与表达二、基因表达 转录 ：在 RNA聚合酶的催化下以 DNA为模板合成 mRNA的过程。2. 翻译：以 mRNA为模板 ,tRNA作为运载工具 , 将活化的氨基酸在核糖体上合成蛋白质的过程。1 分为三个阶段：起始延长终止2 翻译后的肽链加工 : 羟基化糖基化磷酸化乙酰化可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结其次章 基因工程制药第一节概 述医用活性蛋白和多肽类 包括：免役性蛋白,如各种抗原和单克隆抗体。细胞因子,如各种干扰素、白细胞介素、集落刺激生长因子、表皮生长因子及凝血因子。激素,如胰岛素、生长激素、心钠素。酶类,如尿激

10、酶、链激酶、葡激酶、组织型纤维蛋白溶酶原激活剂及超氧化物岐化酶等。基因工程技术生产药品的优点1. 利用基因工程技术可大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和多肽（如胰岛素、干扰素、细胞因子等）, 为临床使用建立有效的保证。2. 可以供应足够数量的生理活性物质,以便对其生理、生化和结构进行深化的讨论,从而扩大这些物质的应用范畴。3. 利用基因工程可以发觉挖掘更多的内源性生理活性物质。4. 内源生理活性物质在作为药物使用时,存在不足之处,可以通过基因工程和蛋白质工程进行改造。5. 利用基因工程技术可获得新型化合物,扩大药物挑选来源。其次节 基因工程药物生产的过程基因工程技术 是将重组对象的目的基因插入

11、载体,拼接后转入新的宿主细胞,构建成工程菌 或细胞）,实现遗传物质的重新组合,并使目的基因在工程菌内进行复制和表达的技术。基因工程药物： 系指先确定对某种疾病具有预防和治疗作用的蛋白质,然后将掌握该蛋白合成过程的基因分别、纯化或进行人工合成, 利用重组 DNA 技术加以改造, 最终将该基因放入可以大量生产的受体细胞中不断繁衍,并能进行大规模生产具有预防和治疗这种疾病的蛋白质,通过这种方法生产的新型药物 称为基因工程药物。基因工程药物制药的主要程序（步骤）目的基因的克隆构建 DAN重组体 DAN重组体转入宿主菌 构建工程菌工程菌发酵表达产物的分别纯化产品的检验等基因工程药物制药的主要程序获得目的

12、基因组建重组质粒构建工程菌（或细胞）培育工程菌产物分别纯化除菌过滤半成品检定成品检定包装基因工程的单元操作次序是 酶切,连接,转化,挑选,验证阐述基因工程药物研制有那些主要过程？答案：（ 1）基因工程药物的生产必需第一获得目的基因,然后用限制性内切酶和连接酶将所需目的基因插入适当的载体质粒或噬菌体中并转入大肠杆菌或其他宿主菌（细胞）,以便大量复制目的基因。对目的基因要进行限制性内切酶和核苷酸序列分析。（2） 目的基因获得后,最重要的就是使目的基因表达。基因的表达系统有原核生物系统和真核生物化的难易。将目的基因与表达载体重组,转入合适表达系统,获得稳固高效表达的基因工程菌（细胞）。可编辑资料 -

13、 - - 欢迎下载精品名师归纳总结（3） 建立适于目的基因高效表达的发酵工艺,以便获得较高产量的目的基因表达产物。（4） 建立起一系列相应的分别纯化、质量掌握、产品储存等技术。第三节 目的基因的获得克隆真核基因常用方法 ：逆转录法和化学合成法。一、逆转录法 ：逆转录法就是先分别纯化目的基因的mRNA,再反转录成 cDNA,然后进行 cDNA 的克隆表达。 mRNA的纯化 cDNA第一链的合成 cDNA其次链的合成 cDNA的克隆 将重组体导入宿主细胞： cDNA文库的鉴定：抗性基因失活法、噬菌斑颜色转变法目的 cDNA克隆的分别和鉴定：核酸探针杂交法、免疫反应鉴定法三、化学合成法 ：较小的蛋白

14、质或多肽的编码基因可以用化学合成法合成。必需知道目的基因的核苷酸次序或目的蛋白质的氨基酸次序。再按相应的密码子推导出DNA的核甘酸序列。用化学法合成目的基因 DNA不同部位的两条链的寡核苷酸短片段,再退火成为两端形成粘性末端的DNA双链片段,然后将这些双链片段按正确的次序进行退火使连接成较长的DNA片段,再用连接酶连接成完整的基因。人工化学合成基因的限制有：不能合成太长的基因目前 DNA 合成仪所合成的寡核苷酸片段仅为5060 bp ,因此只适用于克隆小分子肽的基因。遗传密码的简并使挑选密码子困难,用氨基酸次序估计核苷酸序列,得到的结果可能与自然基因不完全一样,易造成中性突变。费用高。四、基因

15、挑选的新方法 1. 编码序列富集法 2. 岛屿获救 PCR法 3. 动物杂交法 4. 功能克隆法 5. 构建 cDNA文库 6. 差异显示技术的应用五、对已发觉基因的改造 应用基因修饰技术和点突变技术提高目的基因表达产物的稳固性、t1/2 、提高表达量,降低毒性或免疫原性。第四节基因表达基因表达 是指结构基因在生物体中的转录、翻译以及全部加工过程。基因高效表达讨论 是指外源基因在某种细胞中的表达活动,即剪切下外源基因片段,拼接到另一个基因表达体系中,使其能获得原生物活性又可高产的表达产物。正确的基因表达体系 ：; 目的基因的表达产量高 ; 表达产物稳固 ; 生物活性高和表达产物简洁分别纯化一、

16、宿主细胞的挑选适合目的基因表达的宿主细胞应满意以下要求: 1. 简洁获得较高浓度的细胞。2. 能利用易得廉价原料。 3. 不致病、不产生内毒素。 4. 发热量低、需氧低、适当的发酵温度和细胞形状。5简洁进行代谢调控。 6. 简洁进行 DNA重组技术操作。 7. 产物的产量、产率高,产物简洁提取纯化。宿主细胞分为两大类：第一类为原核细胞：常用有大肠杆菌、枯草芽胞杆菌、链霉菌等。其次类为真核细胞：常用有酵母、丝状真菌、哺乳动物细胞等。二、大肠杆菌中的基因表达载体 ：是基因工程的目的和基本手段,是选用合适的载体把供体DNA（外源基因）运载到受体细胞内,可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结

17、从而复制扩增大量的目的 DNA分子或转录表达为相应的产物。基因工程载体分为：克隆载体 , 转录载体 , 表达载体 ;DNA克隆载体） DNA转录载体） RNA蛋白质（表达载体）原核细胞的基因组特点 ： 染色质为环状双股 DNA分子 具有操纵子结构结构基因多为单拷贝特定区域分布特异 DNA次序,因此外源 DNA分子可以插入原核细胞DNA复制体系的特定区段基因克隆载体 1）定义：基因克隆载体是一类能够承载外源基因并将其带入受体细胞得以稳固维护的DNA分子。 2）目前常常使用的载体,有质粒和病毒两类。各种不同的载体,尽管分子量大小、结构和用途上存在着较大的差异,但是作为载体,它们应当具备一些共同的特

18、性。基因工程克隆载体的特点 ：具有复制子有单一限制内切酶切位点或多克隆位点有挑选性遗传标记如抗药基因拷贝数高生物安全性好质粒的分类按复制型式 严紧型 放松型按基因转移性 传递性质粒 非传递性质粒按遗传性状产物分类 : 抗生素抗性限制酶、修饰酶系统真核基因在原核细胞中表达载体必需具备条件载体能够独立复制。载体本身是一个复制子,具有复制起点。应具有敏捷的克隆位点和便利的挑选标记,以利于外源基因的克隆鉴定和挑选。应具有很强的启动子,能为大肠杆菌RNA聚合酶所识别。应具有阻遏子,使启动子受到掌握,只有当诱导时才能进行转录。应具有很强的终止子,只转录克隆的基因,所产生的mRNA较为稳固。所产生的 mRN

19、A必需具有翻译的起始信号 AUG和 SD序列,以便转录后顺当翻译。基因工程药物研制有那些主要过程？（1） 基因工程药物的生产必需第一获得目的基因,然后用限制性内切酶和连接酶将所需目的基因插入适当的载体质粒或噬菌体中并转入大肠杆菌或其他宿主菌（细胞）,以便大量复制目的基因。对目的基因要进行限制性内切酶和核苷酸序列分析。（2） 目的基因获得后,最重要的就是使目的基因表达。基因的表达系统有原核生物系统和真核生物化的难易。将目的基因与表达载体重组,转入合适表达系统,获得稳固高效表达的基因工程菌（细胞）。（3） 建立适于目的基因高效表达的发酵工艺,以便获得较高产量的目的基因表达产物。（4） 建立起一系列

20、相应的分别纯化、质量掌握、产品储存等技术。影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素外源基因的拷贝数：外源基因是克隆到载体上的,因此载体在宿主菌种的拷贝数就直接关系到外源基因的拷贝数。可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结外源基因的表达效率启动子的强弱核糖体接合位点的有效性SD序列和起始密码 ATG的间距密码子组成表达产物的稳固性：组建融合基因,产生融合蛋白。利用大肠杆菌的信号肽或某些真核多肽中自身的信号肽,把真核基因产物搬动到胞浆周质的间隙中。采纳位点特异性突变的方法,转变真核蛋白质中二硫键的位置,从而增加蛋白质的稳固性。采纳蛋白酶缺陷型大肠杆菌,有可能减弱表达产物的降解。细胞代谢负荷：工

21、程菌的培育条件：外源基因的高水平表达,不仅涉及宿主、载体和克隆基因三者之间的相互关系, 而且与其所处的环境条件息息相关,必需优化基因工程菌的培育条件,进一步提高基因表达水平。表达用的酵母菌应满意哪些条件？答：表达用的酵母宿主菌应具备菌体生长力强.菌体内蛋白酶要较弱 .菌株性能稳固 . 分泌才能强。基因工程宿主菌应满意那些要求？目前应用最广泛的宿主菌有哪些？（1）简洁获得较高浓度的细胞。（ 2）能利用廉价易得的原料。（ 3）不致病、不产生内毒素。（ 4）发热量低,需氧低,适当的发酵温度和细胞形状。（ 5）简洁进行代谢调控。（ 6）简洁进行 DNA重组技术操作。（ 7）产物的产量、产率高,产物简洁

22、提取。宿主菌可分两大类： 1）原核细胞：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、链霉菌。 2）真核细胞：酵母菌、丝状真菌、哺乳动物细胞。表达载体须具备哪些条件？常用载体有哪些？（1） 能够在宿主细胞中复制并稳固的储存。（2） 具多个限制酶切点,但每种切口最好只有1 个,以便与外源基因连接。（3） 具有某些标记基因,便于进行挑选。（4） 所产生的 mRNA必需有翻译的起始信号。（5） 具有很强的启动子。（6） 有很强的终止子。（7） 常用载体有： 1、细菌细胞的质粒。 2、噬菌体载体。第五节 基因工程菌生长代谢的特点一、菌体的生长与能量的关系碳源物质是组成培育基的主要成分。碳源物质为细胞供应能量,当菌体生长所需

23、能量大于菌体有氧代谢供应的能量时,菌体会产生乙酸,导致培育基的pH 值下降,从而影响菌体的生长。提高pH,可削减乙酸的抑制作用。分批培育中挑选不同的碳源,连续培育中掌握稀释速率等都能肯定范畴内掌握菌体可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结的生长,从而掌握乙酸的产生,削减它的抑制作用。加入甲硫氨酸和酵母提取物都能削减乙酸的产生。大肠杆菌中克隆 携带氧才能的 VHB蛋白的基因可提高菌体生长速率。 采纳磷酸乙酰化酶缺陷株作为宿主细胞,阻挡乙酸产生,可提高产量。二、菌体生长与前体供应的关系在基础培育基中加入氨基酸（小分子前体）能使菌体比生长率提高,蛋白合成增加。基因工程菌质粒的表达需与宿主细

24、胞竞争共同的前体和催化结构,致工程菌生长速率降低。质粒存在对菌体代谢的影响：中等拷贝质粒（56 拷贝）的工程菌中与前体合成有关的酶增加, 这些酶的基因大多受终产物的反馈调剂。如：三羧酸循环关键酶、天冬氨酸转酰基酶等。高拷贝质粒的工程菌（ 240 拷贝）中,生长速率和菌体总蛋白合成均削减。这与工程菌大量前体被利用引起前体不足,从而产生“严紧反应”有关。“严紧反应” 是当氨酰 tRNA不足时, 核糖体在密码子上停留 , 并合成被称为魔点的 ppGpp的结果。第六节 基因工程菌的不稳固性质粒不稳固 基因工程菌在传代（ 25 代以上）过程中常显现的现象。分裂不稳固：指工程菌分裂时显现肯定比例不含质粒子

25、代菌的现象。结构不稳固：指外源基因从质粒上丢失或碱基重排、缺失所致工程菌 性能的转变常见分裂不稳固的两个因素：含质粒菌产生不含质粒子代菌的频率（质粒丢失率） 。这两种菌（含质粒菌和不含质粒菌）比生长速率差异的大小。二、提高质粒稳固性的方法 1.合适的宿主： 宿主菌 2.合适的载体 :质粒拷贝数 3.挑选压力： 抗生素 4.分阶段掌握培育：先使菌体生长至肯定密度。 再诱导外源基因的表达 5.掌握培育条件：温度、 pH 值、培育基组分、溶氧 6.固定化：卡拉胶第八节 重组工程菌的培育一、基因工程菌的培育方式： 1 分批培育。 2 补料分批培育。 3 连续培育。 4 透析培育。 5 固定化培育2.

26、补料分批培育 是将种子接入发酵反应器中进行培育,经过一段时间后间歇或连续的补加新奇培育基（溶氧掌握、流加补料） ,使菌体进一步生长的方法。良好的生长环境,延长对数生长期,获得高密度菌体。对发酵影响较大的几个因素有： 培育基的影响接种量的影响温度的影响溶解氧的影响诱导时机的影响诱导表达程序的影响7.pH 的影响接种量是指移入的种子液体积和培育液体积的比例。正确化的工艺是获得（七最） :最快周期、最高产量、最好质量、最低消耗、最大安全性、最周全的废物处理成效和最低失败率。第九节 高密度发酵高密度发酵：培育液中工程菌的菌体浓度在 50g DCW/L（细胞干重 /L）以上,最高 200g DCW/L可

27、编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结高密度发酵特点：菌体高密度,总表达量高。生物反应器体积小。单位体积生产才能高。生产周期短, 分别成本小基因工程菌的高密度发酵过程中,目前普遍采纳（）作为发酵培育基的碳源。影响高密度发酵的因素 1.培育基： C 源、N 源种类和含量。 C:N 含量比值。微量元素。无机盐（磷影响表达质粒的复制速率） 2.溶氧浓度：空气分别系统提高氧分压。透亮颤菌血红蛋白基因克隆到菌体中,提高氧传质才能。菌体与小球藻混合培育,藻细胞光合作用产氧供菌体呼吸。3.pH 值：大肠杆菌产酸、CO2必需加碱调剂 pH 值 4.温度：掌握菌体生长,温控诱导表达（诱导时机和连续时间,

28、对数生长期, 2min）5.代谢副产物： C源物质供应超过三羧酸循环或电子传递链才能,产生乙酸,抑制菌体生长和蛋白表达。实行流加补料法,或加入甘氨酸、甲硫氨酸抑制乙酸生成。二、实现高密度发酵的方法1.发酵条件的改进（ 1）培育基的挑选：（ 2）建立流加式培育方式。 （3）提高供氧才能 2.构建产乙酸才能低的工程化宿主菌（ 1）阻断乙酸生产的主要途径： （ 2）对碳代谢流进行分流： （ 3）限制进入糖酵解途径的碳代谢流。（4）引入血红蛋白基因。 3.构建蛋白水解酶活力低的工程化宿主菌基因工程菌的发酵与传统的微生物发酵有什么不同？简洁分析其温度对发酵的影响。第十节基因工程药物的分别纯化离子交换层析

29、：是依据流淌相中的组分别子与交换剂上的平稳离子进行可逆交换时结合力大小的差别而进行分别的一种层析方法。疏水层析：是利用蛋白质表面的疏水区域和固定相上疏水基团之间的相互作用力差异,对蛋白组分进行分别的层析方法。疏水层析的基本原理？ 蛋白质表面多由亲水基团组成, 也有一些疏水性较强的疏水区。在高盐浓度时,蛋白质表面疏水部位的水化层被破坏,暴露出疏水部位,疏水作用增强,与固定相上的疏水基团产生疏水性作用而被吸附。盐浓度降低时蛋白质疏水作用减弱,目的蛋白质被逐步洗脱下来。亲和层析的基本原理？ 通过将具有亲和力的两个分子中一个固定在不溶性基质（也称载体）上,利用分子间亲和力的特异性和可逆性,对另一个分子

30、进行分别纯化。（被固定在基质上的分子称为配体,配体与基质共价结合,构成亲和层析的固定相,称为亲和吸附剂。）凝胶过滤层析的优缺点？优点：设备简洁、操作便利、样品回收率高、试验重复性好、不转变样品生物学活性。缺点：辨论率较低,特别是相对分子质量相近的分子之间。补料分批培育：补料分批培育是将种子接入发酵反应器中进行培育,经过一段时间,间歇或连续的补加新奇培育基,使菌体进一步生长的培育方法。可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结促红细胞生长素（ EPO ）基因能在大肠杆菌中表达,但却不能用大肠杆菌的基因工程菌生产人的促红细胞生长素,这是由于大肠杆菌不能使人的促红细胞生长素糖基化凝胶过滤法是依

31、据分子大小来分别蛋白组分。基因工程菌的生长代谢与碳源RNA聚合酶产物的分子量有关在工程菌发酵过程中,甘油会对lac 启动子有阻遏作用亲和色谱方法是依据亲和性能来纯化基因工程药物超声波法不是化学破裂细胞的方法连续培育：连续培育是将种子接入发酵反应器中,搅拌培育至菌体浓度达到肯定程度后,开动进料和出料蠕动泵,以肯定稀释率进行不间断培育。分别纯化基因工程药物常用的色谱方法有那些？它们的原理是什么 ？分别纯化基因工程药物常用的色谱方法有：离子交换色谱,疏水色谱,亲和色谱和凝胶过滤色谱。 离子交换色谱,以离子交换剂为固定相,依据流淌相中的组分别子和交换剂上的平稳离子进行可拟交换时的结合力大小的差别而进行

32、分别的一种色谱方法。（1） 离子交换色谱IEC：是以离子交换剂为固定相,依据流淌相中的组分别子与交换剂上的平稳离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分别的一种层析方法。（2） 疏水层析 HIC：是利用蛋白质表面的疏水区与固定相上疏水性基团相互作用力的差异,对蛋白质组进行分别的层析方法。（3） 亲和层析 AC：是利用固定化配体与目的蛋白质之间的特别特异的生物亲和力进行吸附,这种结合既是特异的,又是可逆的,转变条件可以使这种结合解除。（4） 凝胶过滤层析：以多孔性凝胶填料为固定相,按分子大小对溶液中各组分进行分别的液相层析方法。建立基因工程药物分别纯化工艺时 , 应当考虑那些因素 ？可编辑资料 - - - 欢迎下载