体外受精和早期胚胎培养课件.ppt
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1、国产奶牛:年均产奶量3000公斤左右国际良种奶牛:年均产奶量10000公斤左右引进一头良种成年奶牛需要3万5万元 牛的生育率低,一头牛一胎只一个,一生只能生育四五次 牛的生育率虽然很低,但是牛的卵母细胞却相当的多,其卵巢中卵母细胞数目要比一生中排卵数多1000倍左右,公牛产生的精子数目就更多了伟大设想诞生了19821982年世界首例试管牛犊问世年世界首例试管牛犊问世 是指通过是指通过人工操作人工操作使使卵子卵子和和精子精子在在体外体外条件下成熟和受精,并通过培养发育成条件下成熟和受精,并通过培养发育成早期早期胚胎胚胎后,再经后,再经移植移植产生后代的技术。产生后代的技术。采集良种母牛的卵母细胞
2、采集良种母牛的卵母细胞卵母细胞的体外培养卵母细胞的体外培养采集良种公牛精子采集良种公牛精子精子体外获能精子体外获能体外受精体外受精良种牛体外受精胚胎良种牛体外受精胚胎胚胎移植胚胎移植受体牛受体牛良种犊牛良种犊牛成熟期牛成熟期牛屠宰加工厂屠宰加工厂市场市场采集卵巢中的采集卵巢中的卵母细胞卵母细胞“试管牛试管牛”工厂化生产的技术流程图工厂化生产的技术流程图借腹怀胎借腹怀胎 主要包括主要包括 、 和和 等几个主要步骤等几个主要步骤 。概念:采取雌性动概念:采取雌性动物的物的 和雄和雄性动物的性动物的 ,使其在使其在 中受精。中受精。卵细胞卵细胞精子精子试管试管卵细胞的采集卵细胞的采集精子的获取精子的
3、获取受精受精(书书P69) 对不同动物对不同动物, ,采集卵母细胞的方法不同。采集卵母细胞的方法不同。 实验动物如小鼠、兔,以及家畜猪、羊实验动物如小鼠、兔,以及家畜猪、羊等等卵细胞的采集卵细胞的采集: 最常用的方法是卵巢经过最常用的方法是卵巢经过 处理,处理,具体做法是给供体具体做法是给供体注射注射 ,使一头,使一头母畜一次排出比自然情况下多几倍到十几倍的母畜一次排出比自然情况下多几倍到十几倍的卵子,之后从卵子,之后从 中冲取卵子,直接与获能中冲取卵子,直接与获能的精子在体外受精。的精子在体外受精。超数排卵超数排卵促性腺激素促性腺激素输卵管输卵管书书P6970 大家畜或大型动物,如牛大家畜或
4、大型动物,如牛,卵细胞的采集卵细胞的采集: 从屠宰场已屠宰母畜的从屠宰场已屠宰母畜的 中采集卵母细胞中采集卵母细胞. .也可以借助也可以借助 、 或或 等工具确定卵泡位置,直接从活体动物等工具确定卵泡位置,直接从活体动物中吸取泡卵液(连同卵母细胞)取出,在体外中吸取泡卵液(连同卵母细胞)取出,在体外进行人工培养,使其成熟。进行人工培养,使其成熟。卵巢卵巢超声波超声波(B(B超超) )探测仪探测仪 内窥镜内窥镜腹腔镜腹腔镜牛卵巢牛卵巢B B超活采仪超活采仪活活体体采采集集的的牛牛卵卵母母细细胞胞 如何使雌性动物排出更多的卵子如何使雌性动物排出更多的卵子促性腺激素处理促性腺激素处理 对于大家畜或大
5、型动物如何采集卵子对于大家畜或大型动物如何采集卵子屠宰场、屠宰场、超声波探测仪、内窥镜或腹腔镜(活体)超声波探测仪、内窥镜或腹腔镜(活体) 采集的卵子是否马上可以受精采集的卵子是否马上可以受精初级初级( (次级)卵母细胞,体外培养至次级)卵母细胞,体外培养至MIIMII中期中期 收集精子的方收集精子的方法有:法有:假阴道法假阴道法手握法手握法电刺激法电刺激法书书P7071获能处理获能处理: : 培养法:培养法:啮齿动物、家兔和猪啮齿动物、家兔和猪将取自将取自附睾的精子附睾的精子,放入人工配制的,放入人工配制的获能获能液中培养液中培养一段时间。一段时间。化学法:化学法:牛、羊牛、羊将精子放在一定
6、浓度的肝素将精子放在一定浓度的肝素或钙离子载体或钙离子载体A23187A23187溶液中,溶液中,用化学药物诱导,使精子用化学药物诱导,使精子获能。获能。 在体外受精前,要对精子进行获能处理。通常采用的在体外受精前,要对精子进行获能处理。通常采用的体外获能方法有体外获能方法有 和和 两种。两种。对于对于 、 和和 的精子,一般采的精子,一般采用用培养法;培养法;对于对于 、 等家畜的精子常用等家畜的精子常用化学法。化学法。培养法培养法:精子在:精子在获能液获能液中获能。中获能。化学诱导法化学诱导法:精子一定浓度的:精子一定浓度的肝素肝素或或钙离子载体钙离子载体A23187A23187溶液溶液中
7、,用化学药物诱导获能。中,用化学药物诱导获能。培养法培养法化学诱导法化学诱导法啮齿动物啮齿动物家兔家兔猪猪牛牛羊羊 1 1、概念:是指哺乳动物的精子和卵、概念:是指哺乳动物的精子和卵子在子在体外人工控制的环境体外人工控制的环境中完成受精中完成受精过程的技术。过程的技术。2 2、基本原理:、基本原理:人工模拟体内环境人工模拟体内环境(包(包括营养、温度、括营养、温度、pHpH等),等),使卵母细胞成使卵母细胞成熟,同时使精子获能,熟,同时使精子获能,最终完成受精作最终完成受精作用,并有计划地保存胚胎或移植胚胎。用,并有计划地保存胚胎或移植胚胎。3.3.受精受精 在在获能溶液获能溶液或或专专用的受
8、精溶液用的受精溶液中完成受精过中完成受精过程程离心的目的是什么?离心的目的是什么?卵母细胞的培养的卵母细胞的培养的目的是什么?目的是什么?保存剩余的卵子和精子的方法是什么?保存剩余的卵子和精子的方法是什么?1、目的:精子与卵子在体外受精后,应将受、目的:精子与卵子在体外受精后,应将受精卵移入精卵移入 中继续培养,以便检查中继续培养,以便检查 和受精卵的和受精卵的 能力。能力。二、胚胎的早期培养二、胚胎的早期培养发育培养液发育培养液受精卵受精卵发育发育二、胚胎的早期培养二、胚胎的早期培养2、培养液成分:、培养液成分:盐类:盐类:无机盐和有机盐无机盐和有机盐营养物质:营养物质:氨基酸、核苷酸氨基酸
9、、核苷酸调节物质:调节物质:维生素、激素维生素、激素特有物质:特有物质:动物血清动物血清不同动物胚胎移植时间不同不同动物胚胎移植时间不同牛、羊:牛、羊:桑椹胚或囊胚阶段桑椹胚或囊胚阶段小鼠、家兔:小鼠、家兔:卵裂期或囊胚卵裂期或囊胚阶段阶段试管婴儿:试管婴儿:8 8个或个或1616个细胞个细胞阶段阶段 胚胎培养发育到适宜阶段时,可将其取出向受体移植或冷冻保存。试管动物试管动物利用精子、卵利用精子、卵子体外受精、胚胎培养、胚胎移植子体外受精、胚胎培养、胚胎移植获得的各种动物。获得的各种动物。试管婴儿试管婴儿利用精子、卵利用精子、卵子体外受精、胚胎培养、胚胎移植子体外受精、胚胎培养、胚胎移植获得的
10、人体后代。获得的人体后代。体外受精技术体外受精技术的应用:动物胚胎工厂的应用:动物胚胎工厂化生产,解决人类男性或女性不育化生产,解决人类男性或女性不育问题。问题。世界上第一个试管婴儿路易斯世界上第一个试管婴儿路易斯- -布朗布朗 胚胎移植胚胎移植采集卵母细胞采集卵母细胞体外培养体外培养采集精子采集精子体外获能体外获能体外受精体外受精早期胚胎培养早期胚胎培养受体牛受体牛小小结结(时期时期: ) 1 1)超数排卵)超数排卵(试剂)(试剂) 2 2)活体取卵)活体取卵(仪器)(仪器) 3 3)从屠宰的卵巢取卵)从屠宰的卵巢取卵方法方法(方法,试剂方法,试剂)(试剂)(试剂)(培养条件、目的阶段)(培
11、养条件、目的阶段)成熟的卵子成熟的卵子获能的精子获能的精子MIIMII中期中期方法方法有性生殖 无性生殖 核移植技术、胚胎移植遵循 不遵循体外受精体外受精胚胎移植胚胎移植 试管动物 克隆动物生殖方式技术手段遗传物质遗传规律比较试管动物和克隆动物比较试管动物和克隆动物来自2个个体 主要来自核供体 概念概念: : 将雌性动物的将雌性动物的早期胚胎早期胚胎, ,或者或者通过其通过其他方式得到的胚胎他方式得到的胚胎, ,移植到移植到同种的、生同种的、生理状态相同理状态相同的其他雌性动物的体内的其他雌性动物的体内, ,使使之发育为新个体的技术。之发育为新个体的技术。将经济价值较高、遗传性状优秀的母畜,经
12、过将经济价值较高、遗传性状优秀的母畜,经过激素处理。使其超数排卵后受精,然后将发育激素处理。使其超数排卵后受精,然后将发育的早期胚胎分别移植到同期发情的代孕母的子的早期胚胎分别移植到同期发情的代孕母的子宫内,通过代孕母妊娠产仔的技术宫内,通过代孕母妊娠产仔的技术胚胎的来源:胚胎的来源: 雌性动物的雌性动物的早期胚胎早期胚胎,或通过,或通过体体外受精外受精及及其他方式其他方式得到的胚胎。得到的胚胎。供体:供体:提供胚胎的个体。提供胚胎的个体。受体:受体:接受胚胎的个体。接受胚胎的个体。受体的条件:受体的条件:同种、生理状态相同。同种、生理状态相同。 转基因、核移植等胚胎体外培养技术动物细胞培养技
13、术什么技术什么技术什么技术什么技术什么技术什么技术核移植技术胚胎移植技术优良供体超数排卵发情配种收集胚胎受体母牛正常繁殖或两三个月后做另一次移植同期发情发情胚胎移植妊娠有价值的后裔什么方法?促性腺激素优良公牛怎样做到?注射相关激素 同步发情同步发情:又称同期发情,又称同期发情,利用某些激素制剂人为地控制并利用某些激素制剂人为地控制并调整一群母畜发情周期的进程,调整一群母畜发情周期的进程,使之在预定时间内使之在预定时间内集中发情集中发情。 优良供体超数排卵发情配种收集胚胎受体母牛正常繁殖或两三个月后做另一次移植同期发情发情胚胎移植妊娠有价值的后裔优良公牛用具有什么特点的牛作为供体牛?遗传性能和生
14、产性遗传性能和生产性能优秀的个体能优秀的个体用具有什么特点的牛作为受体牛?健康并能正常繁殖健康并能正常繁殖的个体的个体如何收集? 在配种或输精后第在配种或输精后第7 7天,天,用特制的冲卵装置,把用特制的冲卵装置,把供体母牛子宫内的胚胎供体母牛子宫内的胚胎冲洗出来。冲洗出来。冲卵冲卵是从是从输输卵管卵管或或子宫子宫角角取出取出早期早期胚胎胚胎优良供体超数排卵发情配种收集胚胎受体母牛正常繁殖或两三个月后做另一次移植同期发情发情胚胎移植妊娠有价值的后裔优良公牛如何移植?具体步骤?冲卵后,对胚胎进行质量检查。这时的胚胎应发育到桑椹胚或囊胚阶段。将收集的胚胎直接向受体移植或放入-196的液氮中保存液氮
15、罐6天收集的胚胎(未拣)方法一:手术法方法一:手术法具体做法:引出受体子宫和具体做法:引出受体子宫和卵巢,将胚胎注入卵巢,将胚胎注入子宫角子宫角,缝合创口。缝合创口。方法二:非手术法方法二:非手术法将装有胚胎的移植管送入受将装有胚胎的移植管送入受体母牛子宫的相应部位,注体母牛子宫的相应部位,注入胚胎。入胚胎。对受体母牛进行是否妊娠的检查对受体母牛进行是否妊娠的检查受体母牛产下胚胎移植的犊牛受体母牛产下胚胎移植的犊牛供体后代还是受体后代?受体移胚1)1)供体和受体供体和受体相同相同的生理环境;的生理环境;如何保证?供、受体生理状态要相同,为此必须做到A A、供、受体母畜的发情时间一致。哺乳动物发
16、情排卵后,不管是否妊娠,在一段时间内,同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的。B B、移入受体子宫胚胎的位置应该与其在供体内的位置相同或相似。移入胚胎一侧的受体子宫对应的卵巢必须有黄体存在。 在胚胎移植过程中,受体母畜必须处于与供体母畜同步发情的状态。为什么?这是这是胚胎移植成功与否的关键胚胎移植成功与否的关键。胚胎移植实质上是早期胚胎胚胎移植实质上是早期胚胎在相同生理环境条件下空间在相同生理环境条件下空间位置的转移。你认为这样的位置的转移。你认为这样的概括正确吗?概括正确吗? 正确。正确。1)1)供体和受体供体和受体相同相同的生理环境;的生理环境;2)2)早期胚胎处于早期胚胎处于游离状
17、态游离状态, ,为胚胎的为胚胎的收集提供了可能;收集提供了可能;什么部位?输卵管和子宫角输卵管和子宫角1)1)供体和受体供体和受体相同相同的生理环境;的生理环境;2)2)早期胚胎处于早期胚胎处于游离状态游离状态, ,为胚胎的为胚胎的收集提供了可能;收集提供了可能;3)3)受体对移入子宫的胚胎基本上受体对移入子宫的胚胎基本上不不发生免疫排斥发生免疫排斥;4)4)胚胎与受体胚胎与受体建立正常的联系建立正常的联系, ,但遗但遗传物质没有改变。传物质没有改变。为什么?指发生了什么生理过程?同物种动物之间进行胚胎移植易于成功。选择选择供体母牛供体母牛受体母牛受体母牛 处理处理超数排卵超数排卵供体公牛供体
18、公牛配种配种冲卵冲卵质量检查、培养质量检查、培养胚胎移植胚胎移植妊娠检查妊娠检查分娩(胚胎移植的犊牛)分娩(胚胎移植的犊牛)胚胎移植的基本程序胚胎移植的基本程序同期发情同期发情 同时发情 植入相应部位 同物种 试管动物试管动物 胚胎移植动物胚胎移植动物受精受精获取生殖获取生殖细胞细胞体外受精体外受精体内自然受精体内自然受精从供体获得从供体获得卵子和精子卵子和精子 获得受精卵获得受精卵或胚胎或胚胎1)1)加速育种工作和品种改良;加速育种工作和品种改良;2)2)大量节省购买种畜的费用;大量节省购买种畜的费用;3)3)一胎多产;一胎多产;4)4)保存品种资源和濒危物种;保存品种资源和濒危物种;5)5
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