生化实验总结.doc

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1、生化实验总结生化实验总结1.酶的活性中心：指在一级结构上可能相距甚远，甚至位于不同肽链上的少数几个氨基残基或这些残基上的基团通过肽链的盘绕折叠而在三维结构上相互靠近，形成一个能与底物结合并催化其形成产物的位于酶蛋白表面的特化的空间区域。对需要辅酶的酶来说，辅酶分子或其上的某一部分结构常是活性中心的组成部分。2.酶原：酶原是有催化活性的酶的前体。通过蛋白酶的有限水解，可以将无活性的酶原转变成有催化活性的酶。3.同工酶：指催化同一种化学反应，而其酶蛋白本身的分子结构组成及理化性质有所不同的一组酶。4.变构酶：一种一般具多个亚基，在结构上除具有酶的活性中心外，还具有可结合调节的别构中心的酶，活性中心

2、负责酶对底物的结合与催化，别构中心负责调节酶反应速度。5.竞争性抑制作用：竞争性抑制剂因具有与底物相似的结构所以与底物竞争酶的活性中心，与酶形成可逆的EI复合物，而使EI不能与S结合，从而降低酶反应速度的可逆抑制作用。这种抑制作用可通过增加底物浓度来解除。6.超二级结构：在球状蛋白质分子的一级结构的顺序上，相邻的二级结构常常在三维折叠中相互折叠，彼此作用，在局部区域形成的二级结构聚合体，就是超二级结构7.等电点：氨基酸所带静电荷为零，主要以两性离子存在时，在电场中，不向任何一级移动，此时溶液的PH叫做氨基酸的等电点8.酰胺平面：肽键主链的肽键C-N具有双键性质，因而不能自由转动，使连接在肽键上

3、的六个原子共处于一个平面上，这个平面称酰胺平面9.分子杂交：在退火条件下，不同来源的DNA互补区域形成双链，或DNA单链和RNA单链的互补形成DNA-RNA杂合双链的过程称分子杂交10.透析：小分子可以通过半透膜，大分子不能透过半透膜。这种分离物质的方法叫做透析。11.Tm：当核酸分子加热变性时，其在260nm处的紫外吸收会急剧增加，当紫外吸收变化达到最大变化的一半时所对应的温度称作解链温度，用Tm表示12.Southern印迹法：将电泳分离的DNA片段从凝胶转移到适当的膜（如硝酸纤维素膜或尼龙膜）上，再进行杂交操作13.Northern印迹法：将电泳分离后的变性RNA吸引到适当的膜上再进行分

4、子杂交的技术。1.磷酸戊糖途径：指机体某些组织以6-磷酸葡萄糖为起始物，在6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化下形成6-磷酸葡萄糖酸，进而代谢生成磷酸戊糖为中间代谢物的过程，又称为磷酸己糖旁路。2.三羧酸循环：又称柠檬酸循环、Krebs循环。即在线粒体中，糖、脂、氨基酸等有机物代谢的共同中间体乙酰辅酶A首先与草酰乙酸合成柠檬酸，再经过脱氢、脱羧等一系列的酶促反应，将乙酰辅酶A转变成CO2并生成NADH和FADH2的过程。它是生物体内糖、脂、氨基酸等有机物代谢的枢纽。3.呼吸链：代谢物上的氢原子被脱氢酶激活脱落后，经过一系列传递体，最后传递给被激活的氧分子，并与之结合生成水的全部体系。4.糖异生：糖异生：非

5、糖物质（区丙酮酸，如酸，甘油，生糖氨基酸等）转变为葡萄糖或糖原的过程。机体内只有肝，肾能通过糖异生补充血糖。5.氧化磷酸化：生物体通过生物氧化所产生的能量，除一部分用以维持体温外，大部分可以通过磷酸化作用转移至高能磷酸化合物ATP中，这种伴随放能的氧化作用而进行的磷酸化作用称为氧化磷酸化。1.结合酶由结合部位和催化部位两部分构成，两者结合成的复合物又称酶活性中心，在结合酶中决定反映特异性的是结合部位，决定反映种类和性质的是催化部位。2.竞争性抑制剂不改变酶促反应Vmax,非竞争性抑制剂不改变酶促反应Km3.若同一种酶有n个底物，就有n个Km值，其中Km值最小的底物，一般为该酶的最适底物。4.生

6、物胞素是生物素的辅酶，在有关催化过程中起传递和固定CO2的作用。5.磺胺类药物能抑制细菌生长，因为它是对氨基苯甲酸的结构类似物，能竞争性的抑制二氢叶酸酶的活性。6.EC3.1.1.11应为水解酶类7.如果一个酶对A、B、C三种底物的米氏常数分别为Kma、Kmb和Kmc，且KmaKmbKmc，则此酶的最适底物是C，与酶亲和力最小的底物是A。8.维生素B1构成的辅酶是TPP，如果缺乏，糖代谢发生障碍，丙酮酸和乳酸在神经组织中堆积，形成脚气病。9.B族维生素都包括：维生素B1，维生素B2，维生素B6，维生素B12，维生素PP，泛酸，生物素，叶酸。10.蛋白质分子中氮的平均含量为16%，故样品中蛋白质

7、含量常以所测含氮量乘以6.2511.实验室中常用的甲醛滴定是利用氨基酸的氨基与中性甲醛反映，然后用碱（NaOH）来滴定NH3+放出的H+12.在螺旋中C=O和N-H之间形成的氢键与螺旋轴基本平行，每圈螺旋包含3.6个氨基酸残基，高度为0.15nm,每个氨基酸残基使螺旋轴上升0.54nm，并沿轴旋转100度13.蛋白质变性时空间结构改变，而一级结构不变。变形后蛋白质的溶解度一般会降低，生物学功能丧失14.核酸和蛋白质对紫外线的最大吸收峰分别为260nm和280nm。15.虾壳的主要成分为几丁质，是天然多糖中唯一大量存在的带正电荷的氨基多糖，具有生物相溶性好，毒性低，以及被生物降解和可使用的功能1

8、6.直链淀粉遇碘呈蓝色，支链淀粉遇碘呈紫红色，糖原遇碘呈红紫色。17.RNA的三级结构为倒L型18.脯氨酸为环状亚氨基酸，遇茚三酮反应呈黄色。一、选择题1.转氨酶的辅酶是下列化合物中的哪一个？DA.尼克酸B.泛酸C.硫胺素D.磷酸吡哆醛E核黄素2.米氏方程，不符合S和Km关系的是EA当SKm时，反应速度与底物浓度无关，成零级反应B.当SA.产物反馈抑制B.产物阻遏抑制C.非竞二、单选题争性抑制D.竞争性抑制E.不可逆抑制18.有机磷农药所结合的胆碱酯酶上的基团是AA.-OHB.-COOHC.-SHD.-CH3D.-NH219.葡萄糖的连接方式为1-4糖苷键20.A型DNA和B型DNA产生差别的

9、原因是DA.A型DNA是双链，B型DNA是单链BA型DNA是右旋，B型DNA是左链C.A型DNA和B型DNA碱基组成不同D.两者的结晶状态不同21.下列有关温度对酶促反应速度的影响作用的叙述中，错误的是CA.温度对酶促反应速度的影响不仅包括升高温度使速度加快，也同时会使酶逐步变性B.在一定范围内，在最适温度时，酶促反应速度最快C.最适温度是酶的特征常数D.最适温度不是一个固定值，而与酶作用时间长短有关E.一般植物酶的最适温度比动物酶的最适温度稍高1.糖酵解过程中产生的NADH+H+必须依靠甘油-磷酸穿梭系统或苹果酸穿梭系统才能进入线粒体，分别转变成线粒体中的FADH2和NADH。2.糖原合成的

10、关键酶是糖原合酶，糖原分解的关键酶是糖原磷酸化酶。3.磷酸戊糖途径中的四碳化合物是赤藓糖-4-磷酸，七碳化合物是景天庚酮糖-7-磷酸。4.EMP途径中的己糖激酶、果糖磷酸激酶和丙酮酸激酶不在糖异生中起催化作用。5.乙醛酸循环不同于三羧酸循环的两个关键酶是异柠檬酸裂解酶和苹果酸合酶。6.糖酵解途径中最重要的关键酶是果糖磷酸激酶7.1mol葡萄糖的有氧氧化是生成2mol丙酮酸，再转变为2mol乙酰CoA进入三羧酸循环。8.植物细胞质中的NADH，经穿梭后的P/O（磷氧比）为2.5或1.5，若在细胞中加入2，4-二硝基苯酚其P/O值变为0。9.糖酵解途径唯一的脱氢反应是甘油醛-3-磷酸脱下氢由NAD

11、+递氢体接受。1.在三羧酸循环中，下列哪个反应不是可逆反应（D）A.柠檬酸异柠檬酸B.琥珀酸延胡索酸C.延胡索酸苹果酸D.草酰乙酸+乙酰CoA柠檬酸2.不能经糖异生合成葡萄糖的物质是（D）A.-磷酸甘油B.丙酮酸C.乳酸D.乙酰CoA3.以NADP做辅助因子的酶是（C）A.3-磷酸甘油醛脱氢酶B.果糖二磷酸酶C.6-磷酸-葡萄糖脱氢酶D.醛缩酶4.下列各中间产物中哪一个是磷酸戊糖途径所特有的（D）A.丙酮酸B.3-磷酸甘油醛C.6-磷酸果糖D.6-磷酸葡萄糖酸5.在肝脏中2mol乳酸转变成1mol葡萄糖，需消耗多少mol的高能化合物（E）A.2B.3C.4D.5E.66.下列哪种酶既在糖酵解中

12、发挥作用，又在糖异生作用中发挥作用？（A）A.3-磷酸甘油醛脱氢酶B.果糖-1，6-二磷酸酶C.丙酮酸激酶D.己糖激酶7.每摩尔葡萄糖有氧氧化生成30或32ATP摩尔数的关键步骤取决于（D）A.苹果酸氧化为草酰乙酸B.异柠檬酸氧化为-酮戊二酸C.丙酮酸氧化为乙酰CoAD.3-磷酸甘油醛氧化为1，3-二磷酸甘油酯8.三羧酸循环的第一步反应产物是（A）A.柠檬酸B.草酰乙酸C.乙酰CoAD.二氧化碳9.下列属于TCA循环中的调控酶的是（D）A.醛缩酶B.磷酸甘油酸激酶C.转醛酶D.异柠檬酸脱氢酶10.TCA循环与呼吸链相偶联产生高能键最多的步骤范围是（C）A.柠檬酸异柠檬酸B.异柠檬酸-酮戊二酸C

13、.-酮戊二酸琥珀酸D.琥珀酸苹果酸11.在HMP（PPP）途径中，催化5-磷酸核酮糖转变为5-磷酸木酮糖的酶是（D）A.转酮酶B.转醛酶C.异构酶D.表异构酶12.从乙酰CoA开始的TCA循环中，共有几种酶（躲酶复合体算一种）（C）A.6种B.7种C.8种D.9种13.丙酮酸脱氢酶复合体最终接受底物脱下的2H的辅助因子是（D）A.FADB.硫辛酸C.辅酶AD.NAD14.乳酸脱氢酶在骨骼肌中主要是生成（B）A.丙酮酸B.乳酸C.3-磷酸甘油醛D.3-磷酸甘油酸15.糖酵解过程中NADH+H+的去路（A）A.是丙酮酸还原为乳酸B.经-磷酸甘油穿梭系统进入线粒体氧化C.经苹果酸穿梭系统进入线粒体氧

14、化D.2-磷酸甘油酸还原为3-磷酸甘油醛16.人体不能水解的糖苷键是（A）A.-1，4-糖苷键B.-1，6-糖苷键C.-1，4糖苷键D.-1，-4糖苷键17.下列化合物不属于高能磷酸化合物的是（C）A.PEPB.ATPC.F6PD.1,3-二磷酸甘油酸18.醛缩酶属于六大酶类中的（B）A.氧化还原酶B.裂合酶C.转移酶D.合成酶19.淀粉合成主要用的糖核苷酸为（C）A.ADPGB.DPGC.UDPGD.TDPG20.生物素参与下列哪种酶所催化的反应（C）A.丙酮酸激酶B.丙酮酸脱羧酶C.丙酮酸羧化酶D.PEP羧激酶三、用结构式写出下列酶所催化的反应1.异柠檬酸裂解酶P244下2.苹果酸合成酶P

15、245上3.6-磷酸葡萄糖脱氢酶P246下倒数第二个四、计算题1.在真核生物肌细胞中，1分子1，6-二磷酸果糖彻底氧化为CO2和H2O净生成多少分子ATP和GTP？请简列反应过程。34或32（-酮戊二酸20；草酰乙酸12.5；苹果酸15）2.简要说明甘油彻底氧化成CO2和H2O的过程，并计算1摩尔甘油彻底氧化成CO2和H2O净生成多少摩尔的ATP？答：甘油+ATP-磷酸甘油+ADP；-磷酸甘油+NAD+NADHH+(穿梭)+磷酸二羟丙酮；磷酸二羟丙酮甘油醛-3-磷酸；甘油醛-3-磷酸+NAD+Pi甘油酸1,3-二磷酸+NADHH+(穿梭)；甘油酸1,3-二磷酸+ADP甘油酸-3-磷酸+ATP；

16、甘油酸-3-磷酸甘油酸-2-磷酸磷酸稀醇式丙酮酸；磷酸稀醇式丙酮酸+ADP丙酮酸+ATP；丙酮酸+NAD+乙酰辅酶A+NADHH+CO2；然后乙酰辅酶A进入三羧酸循环彻底氧化，经过4次脱氢反应生成3摩尔NADHH+、1摩尔FADH2、以及2摩尔CO2，并发生一次底物水平磷酸化，生成1摩尔GTP。依据生物氧化时每1摩尔NADHH+和1摩尔FADH2分别生成2.5摩尔、1.5，1摩尔甘油彻底氧化成CO2和H2O生成ATP摩尔数为18.5或16.5。3.鱼藤酮存在时，理论上1mol琥珀酰CoA将净生成多少ATP?写出简要过程。五、问答题1.为什么说三羧酸循环是糖、脂和蛋白质三大物质代谢的共同通路？丙

17、二酸对三羧酸循环有何影响？答：三羧酸循环是乙酰CoA最终氧化成二氧化碳和水的途径。糖代谢产生的碳骨架最终进入三羧酸循环氧化。脂肪分解产生的甘油可通过糖有氧氧化进入三羧酶循环氧化，脂肪酸经-氧化产生乙酰CoA进入三羧酸循环氧化。蛋白质分解产生的氨基酸经脱氨后碳骨架可进入糖有氧氧化进入三羧酸循环，同时，三羧酸循环的中间产物可作为氨基酸的碳骨架接受NH3后合成非必需的氨基酸。所以，三羧酸循环是三大物质共同通路。丙酮酸脱氢酶系2.丙酮酸有哪些代谢去路？答：丙酮酸是一个重要的中间代谢物，其去向随机体所处条件的不同而异，不仅能直接参与糖代谢，还可以间接参与脂类和蛋白质代谢等。具体代谢方向取决于各途径中关键

18、酶的活性，这些酶均受别构效应剂与激素的调节。丙酮酸脱羧酶在人体供氧充足的条件下，丙酮酸进入线粒体通过三羧酸循环彻底氧化成CO2：丙酮酸+NAD+CoASH丙酮酸羧化酶乙酰CoA+CO2+NADH+H+，生成的乙酰CoA经过三羧酸循环彻底氧化分解成CO2和水并产生ATP。乳酸脱丙酮酸转化成乳酸：人和动物激烈运动时，肌肉组织供氧不足，或是乳酸菌的无氧发酵，丙酮酸都会被还原为乳酸。丙酮酸+NADH+H+乳酸+NAD+丙酮酸转化为乙醇：无氧条件下，酵母等微生物及植物细胞的丙酮酸能继续转化为乙醇并释放出CO2。丙酮非氧化阶段通过异构酶、转酮酶和转醛酶等催化的分子重拍反应将六分子戊糖磷酸转化成五分子己糖磷

19、酸。NADPH主要是为生物合成反应提供必需的还原当量，缺乏时将影响多种生物分子的合成和转化反应，例如：酸脂肪酸、胆固醇等脂质的合成；GluCO2+乙醛；乙醛+NADH+H+乙醇+NAD+。如果有氧存在时，则会通过乙醛的氧化生成乙酸。丙酮酸进入糖异生途径：在肝中，丙酮酸进入线粒体通过糖异生途径转变为葡萄糖。丙酮酸+CO2+ATP草酰乙酸+ADP+Pi；草酰乙酸经由磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶催化生成磷酸烯醇式丙酮酸后再异生为糖，或与乙酰CoA缩合成柠檬酸以促进其进入三羧酸循环彻底氧化。亦可经由还原性氨基化生成丙氨酸等非必需氨基酸。丙酮酸进入线粒体并经由草酰乙酸生成柠檬酸后还可以返回胞液，经柠檬酸裂解酶

20、催化生成乙酰CoA，后者可作为脂肪、胆固醇等的合成原料。3.为什么说葡萄糖-6-磷酸是各个糖代谢途径的交叉点？葡萄糖经过激酶的催化转变成葡萄糖-6-磷酸，可进入糖酵解途径氧化，也可进入磷酸戊糖途径代谢，产生核糖-5-磷酸、赤鲜糖-4-磷酸等重要中间体和生物合成所需的还原性辅酶；在糖的合成方面，非糖物质经过一系列的转变生成葡萄糖-6-磷酸，葡萄糖-6-磷酸在葡萄糖-6-磷酸酶作用下可生成葡萄糖，葡萄糖-6-磷还可在磷酸葡萄糖变位酶作用下生成葡萄糖-1-磷酸，进而生成糖原。由于葡萄糖-6-磷酸是各糖代谢途径的共同中间体，由它沟通了糖代谢分解与合成代谢的众多途径，因此葡萄糖-6-磷酸是各糖代谢途径的

21、交叉点。4.体内NADPH来自哪些代谢？如果缺乏NADPH主要影响哪些生化过程？答：NADPH主要来自磷酸戊糖途径，总反应可分为两个阶段：氧化阶段由G-6-P开始，经由G-6-P脱氢酶和6-磷酸脱氢酶连续脱氢脱羧生成核酮糖-5-磷酸，期间产生两分子NADPH。及其他非必需氨基酸的合成；还原性谷胱甘肽及相关的含巯基蛋白或酶的合成；与P450单加氧酶系（辅酶是NADPH）相关的生物转化及羟化反应等。5.有氧氧化和磷酸戊糖途径中共有四个脱羧反应，试写出这四个反应，并指出这些反应的异同点。6.糖代谢的中间产物在其他代谢中有何应用？7.糖代谢与脂肪代谢通过哪些反应联系起来？答：糖酵解途径的中间产物磷酸二

22、羟丙酮可转变为-磷酸甘油，可作为脂肪合成中甘油的原料糖有氧氧化过程中的乙酰CoA是脂肪酸和酮体的合成原料脂肪酸分解产生的乙酰CoA最终进入三羧酸循环氧化酮体氧化产生的乙酰CoA最终进入三羧酸循环氧化甘油可以转变成磷酸二羟丙酮进入酵解和三羧酸循环彻底氧化分解供能。扩展阅读：生化实验心得生化实验心得刘欣怡2022001400572022级生物基地班我很喜欢做实验，并且乐于锻炼自己的动手能力。本学期的生化实验，虽然只从第二周上到第十五周，但是我收获了很多并且留下了深刻的印象。对于本次实验心得的撰写，我将分为以下3个部分来进行：本学期实验回顾、本学期实验总结以及对于生化实验课的支持和建议。一、本学期实

23、验回顾：本学期的生化实验课上，我们一共进行了11次实验，分别是Folin-酚试剂法测定血清蛋白质含量、酵母RNA的提取、醋酸纤维薄膜电泳、紫外吸收法测定RNA含量、聚酰胺薄膜层析、纤维素酶活力的测定（三硝基水杨酸法）、还原糖和总糖含量的测定（三硝基水杨酸法）、酶最适PH的测定、费林试剂热滴定糖、肌糖原酵解作用、微量凯氏定氮法。这些实验具有代表性，是典型的生化实验。在这些实验中，涵盖了以前无机实验和有机实验的基础实验操作，还有全新的实验操作以及实验仪器。在这学期的生化实验课上，我既复习并熟练了大一无机实验和有机实验的基本实验操作和仪器（比如移液管、滴定管、蒸馏等），又学习并掌握了许多新操作以及新

24、仪器的使用，比如紫外分光光度计、离心机、聚酰胺薄膜、热滴定、凯氏定氮仪器等。最重要的是，我学习并掌握了一些重要的实验方法和原理，比如Folin-酚试剂法、紫外吸收法、三硝基水杨酸法、费林试剂与糖的反应、微量凯氏定氮法等。掌握了这些实验原理以及方法，有利于我们在以后中灵活运用设计实验。总体来说，本学期生化实验教会了我测定蛋白质、糖、核酸的方法，电泳和层析分离物质、如何测定酶的相关特性、验证肌糖原酵解作用、如何提取RNA。二、本学期实验总结通过这学期的生化实验，我的实验技能的到了大大地提升，同时，实验中的细节、注意事项以及老师拓展的知识令我获益匪浅，也让我深深地认识到科学是非常严谨的，尤其是在做实

25、验的时候，要全神贯注，井井有条，否则很容易出差错，而这个小小的差错很有可能就使实验前功尽弃，既耽误时间又浪费试剂。回顾这一学期我的实验课程，每一次我都能完成实验任务。大多数都比较顺利，小组内两人也大多配合默契，但是有一些美中不足的地方。有的一些实验比较麻烦，实验步骤较为繁琐，我们在做实验时偶尔会产生不耐烦的思想，只想着抓紧结束，但是在这种时候往往更容易出差错。我有两次记忆很深，一次是在测定纤维素酶活力（三硝基水杨酸法）时，没能及时贴上空白标签，导致又重新制作空白，拜拜浪费了时间；另一次是在鉴定肌糖原酵解作用时，实验步骤较为繁琐，并且老师对黑板上的简易实验步骤进行了多个补充，其中一点是要在水浴后

26、取出大块肉再加下一步骤的试剂，结果我们当时产生了不耐烦情绪，就直接加了试剂而没有取出大肉块。对于这两次情况，虽然对最终的实验结果没有产生什么明显的影响，但是，它实实在在体现了自己的操作并不是很严谨，需要注意和努力。在本学期生化实验报告的撰写中，我重点注意老师强调的实验分析部分。上课认真听老师的实验讲解并认真记录有关的可能实验结果的分析。在课后撰写实验报告时对这些点重点分析和总结，有时甚至是查找相关资料然后再进行分析。通过这一些列的做法，我的实验分析能力得到了提升，我能在讨论实验结果或者实验操作时找到更好、更精确的切入点，能得出更好的结论。同时，本学期老师将我们分为两人一组来进行实验，两人之间的

27、磨合和合作是一种锻炼，对今后很有帮助。三、对于生化实验课的支持和建议我非常感谢老师在这一学期中的辛勤劳动。老师在课前为我们做好实验准备很不容易，配试剂等都很辛苦。谢谢老师您了。我觉得咱们的额生化实验课设计的挺好的。两人一组可以分工合作，加快实验效率，同时又避免了因为同组同学人数多而有的同学无事可做的现象。老师在课上讲解实验时，有关实验步骤、实验可能结果、实验注意事项的分析、讲解和拓展令我获益匪浅，有利于培养我的实验思维并且拓宽了知识视野。建议方面，我想和老师提的一点建议其实是有关实验器材方面的。对于老师所提到的有关节约试剂、减少材料浪费等事项我非常赞同，并且大多数时候器材和试剂都很全（这和大一的无机实验和有机实验相比条件进步了很多），只是希望咱们的一些其他实验仪器能更全面一点，举一个例子，可以使用的紫外分光光度计只有3台，有些过少，实验中要等待的时间较长，并且有的仪器还不是很准确，对于我们的实验造成了一定的困扰，希望老师能将实验室内有些问题的仪器同一修一修。总之，我很喜欢咱们的生化实验课，并且从中学到了很多知识、实验方法和应用，锻炼了实验操作，形成了实验要耐心、细心、恒心的观念。同时还培养了团队意识和合作观念。我获益匪浅。第 15 页 共 15 页