改良Lowry氏法测定蛋白质含量.ppt
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1、 基因时代，为生命科学提供源动力！,改良Lowry氏法测定蛋白质含量,The Lowry Method for Protein Quantitation, 基因时代，为生命科学提供源动力！,目的与要求：掌握改良Lowry氏法测定蛋白质含量的原理及方法；了解标准曲线在物质定量测定中的应用及绘图要点。, 基因时代，为生命科学提供源动力！,实验原理： 在碱性条件下蛋白质的肽键与Cu2+螯合，形成蛋白质-铜复合物。（双缩脲反应 Biuret Reaction） 蛋白质分子中带有酚基的酪氨酸极易使酚试剂中的磷钼酸-磷钨酸还原，生成钼蓝-钨蓝蓝色化合物，蓝色深浅与蛋白质含量成正比。利用蓝色深浅与蛋白质浓度
2、成正比的关系可绘制标准曲线，测定样品中蛋白质含量。（还原反应）, 基因时代，为生命科学提供源动力！,操作步骤, 基因时代，为生命科学提供源动力！,混匀后置于37度水浴10分钟。 冷却后各管加入试剂B 0.1mL，室温放置10分钟。 各管接着加入试剂C 3mL，立即混匀，置37度水浴10分钟。 冷却后，以0号管为空白，在分光光度计上以波长650nm比色读取光密度值。, 基因时代，为生命科学提供源动力！,结果与计算： 根据测定管光密度值查标准曲线，由标准曲线计算血清蛋白质含量，再按血清稀释倍数换算为g/L。, 基因时代，为生命科学提供源动力！,注意事项： 各管加酚试剂时必须快速，并立即摇匀，不应出现混浊。 移液管使用前要看清楚刻度和是否写着快、吹，如有则需要用洗耳球吹出剩余液体。 减量法可有效减少误差。 分光光度计使用前需预热，绝对调零和空白管调节透光度为100%。,
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