十字花科根肿病接种技术及发病条件研究_柴阿丽.doc

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1、 十字花科根肿病接种技术及发病条件研究 柴阿丽 ， 朱发娣 ， 王惟萍 ， 石延霞 ， 谢学文 ， 李宝聚 ( 中国农业科学院 蔬菜花卉研究所 ， 北京 100081) 摘 要 : 为了明确接种方 法 、 环境和基质条件等对十字花科根肿 病发病的影响 。 研究比较了不同接种方 法 、 肿根 保 存形 式 、 光源及光周 期 、 基质类型及基 质 pH 值等对大白菜根肿病发病程度的影 响 ， 以建立一 套简 便 、 稳定的大白菜根 肿病接种技术及品种抗病性鉴定体 系 。 结果表 明 ， 大白菜 种子在培养皿 中催 芽 7 d 后 ， 采用浸 根接种 法 ， 不仅节省 菌 源 ， 而且操作简 单

2、， 发病稳 定 ; 自然光照 与稀土灯补光结 合 16 h 光周期条件 下 ， 大白 菜根肿病发生最严 重 ， 且发病 均 匀 ， 为十字花科蔬菜根肿病发生的最佳光照环 境 ; 草炭和蛭石基质有利 于根肿病的发 生 ， 砂土和壤土对根肿病发生有 抑制作 用 ; 根肿病 在 pH 值 5 0 和 pH 值 7 0 时均可发 病 ， 但酸性环 境有利于根肿病的发 生 ; 另 外 ， 肿根干燥保存不影 响病原菌活 力 ， 可作为实验室保存肿根的推荐使用方 法 。 关键词 : 根肿病 ; 芸薹根肿菌 ; 接种方法 ; 光 周期 ; 基质 ; 储存条件 中图分类 号 : S636 3 文献标识 码 :

3、A 文章编 号 : 1000 7091( 2015) 增 刊 0266 06 doi: 10 7668 / hbnxb 2015 S1 048 Inoculation Methods and Incidence Conditions of Clubroot of Cruciferous CHAI A-li， ZHU Fa-di， WANG Wei-ping， SHI Yan-xia， XIE Xue-wen， LI Bao-ju ( Institute of Vegetables and Flowers， Chinese Academy of Agricultural Sciences， Be

4、ijing 100081， China) Abstract: To know the effect of inoculation methods， substrate and matrix conditions on the incidence of clubroot disease A stable inoculation technique was developed to inoculate Chinese cabbage with Plasmodiophora brassicae， which could be adoptable in evaluation of resistance

5、 of cruciferous to clubroot The inoculation methods， clubroot storage methods， light sources， photoperiods， substrates and pH environment of culture system etc were stud- ied to compare the affection to disease incidence of clubroot The results showed that root soaking inoculation， with 7-day-old se

6、edlings cultured on Petri dish， caused more severe and stable symptoms， and was much simple and effi- cient Natural light supplemented by artificial light with a 16 h photoperiod was recognized as the best light source for inoculation Compared with soil and sand， peat and vermiculite were the optima

7、l matrixes for clubroot develop- ment Acid matrixes were favorable for severe attack of the disease， whereas neutral matrixes were less favorable In addition， the clubroot maintained high pathogenic vitality after air-dried at room temperature and preserved at dry environments， which demonstrated th

8、at clubroot drying storage could be recommended as a preservation method in laboratory Key words: Clubroot; Plasmodiophora brassicae; Inoculation methods; Photoperiod; Matrixes; Preservation conditions 根 肿 病 ( Clubroot disease ) 是由芸薹根肿 菌 ( Plasmodiophora brassicae Woron ) 侵 染引起的一 种 专性寄生 的世界性病 害 ， 素

9、有 “ 白菜癌 症 ” 之 称 ， 任 何十字花科的感 病品种都能被侵 染 ， 引起薄壁细 胞 的异常分裂增 大 ， 形 成瘤状肿 根 1 。 一方面降低 了 根系吸收和供给 水份及养分的能 力 ， 造成地上部 分 失水死亡 ; 另一方面使植物根系失去了外层的保护 作用 ， 易被其他杂菌入侵而引起腐烂 2 。 根肿菌休 眠孢子在无 感病寄主植物的土壤中存活可达 20 年 之久 ， 土壤一旦污染 ， 将不再适宜十字花科植物的栽 培 3 4 。 在我国根肿病常年危害面积 320 万 400 万 hm2 ， 占十字花科作物种植面积的 1 /3 以上 ， 大流 收稿日期 : 2015 09 30 基金

10、项 目 : 中国农业科学院科技创新工程项 目 ( CAAS-ASTIP-IVFCAAS) ; 农 业 部园艺作物遗传改良 重点开放实验室项 目 ; 大宗蔬菜产 业 技术体系建设专 项 ( CA S-25) 作者简介 : 柴阿丽 ( 1983 ) ， 女 ， 山西运城人 ， 助理研究员 ， 博士 ， 主要从事蔬菜病害诊断研究 。 通讯作者 : 李宝聚 ( 1967 ) ， 男 ， 黑龙江饶河人 ， 研究员 ， 博士 ， 主要从事蔬菜病 害综合防治研究 。 华 北 农 学 报 2 0 1 5 ， 3 0 ( 增 刊 ) : 2 6 6 -2 7 1 行年份发生与危害面积可达 900 万 hm2 ，

11、 平均产量 损失达 20% 30% ， 严重田块直接产量损失达 60% 以上 5 。 根肿菌属于专性寄生菌 ， 不能直接培养 ， 所以对 带菌植株活体的研究尤为重要 ， 而建立稳定的接种 方法是带菌植株活体研究的基础 6 。 国内外已报 道的接种技术包括插 入 法 7 、 拌 土 法 8 10 、 灌 根 法 11 12 、 浸根法 13 、 浸 芽法 14 、 蘸根法等 15 ， 但至 今尚未形成统一 、 稳定的十字花科蔬菜根肿病接种 方法 。 另外 ， 发病肿根的保存方式 、 休眠孢子的萌发 条件 、 接种环境 、 育苗基质 、 土壤含水量 、 土壤 pH 值 等对根肿病的发生都有影响 。

12、 因此 ， 本研究对几种 主要的人工接种方法 、 基质 、 环境等对根肿病发病的 影响进行研究 ， 旨在建立一套简便 、 稳定的十字花科 蔬菜根肿病接种技术及品种抗病性评价体系 。 1 材料和方法 1 1 试验材 料 供试菌源 : 供试菌源为大白菜发病肿根 ， 采自湖 北省长阳土家族自治县火烧坪乡黍子岭村 ， 20 保存备用 。 供试大白菜品种 : 选用大白菜感病品种中白 60 ( 北京中蔬园艺良种开发中心 ) 。 1 2 试验方 法 1 2 1 接种 体制 备 将冷冻肿根 从 20 取 出 ， 置 于 25 腐 烂 7 d， 促使其休眠孢子萌 发 。 加入 适 量无菌 水 ， 用组 织捣碎机

13、打碎肿 根 ， 八层纱布过 滤 ， 弃沉 淀 。 滤液装 入 50 mL 离心 管 ， 2 500 r / min 离 心 10 min， 弃上 清 ， 用无菌水悬浮沉 淀 ， 用血球 计数 板 将浓度调 节 ( 以 休 眠孢 子个数 计 ) 至 3 108 个 / mL， 4 保 存 ， 24 h 内使 用 。 1 2 2 接种方 法 对根肿病发病效果的影 响 拌 土 接种 法 : 将制备好的根肿菌休眠孢子悬浮 液 ， 拌入 无 菌育苗基质 中 ， 1 kg 基质中拌 入 500 mL 配置好的 菌 悬 液 ， 对照拌 入等量无菌 水 ， 混合均 匀 。 然 后 ， 装 于 育苗钵中播 种

14、。 浸根接种法 : 培养皿中铺双层滤纸 ， 白菜种子在 湿润的滤纸上培养 7 d。 然后 ， 将根系浸入配置好的 菌悬液中 ， 分别浸泡 15， 30， 45， 60 min。 然后 ， 播种 到无菌基质中 ， 充分浇水 ， 对照在无菌水中浸泡 。 蘸根接种法 : 白菜播种于无菌育苗基质中 ， 待长 至两叶一心时 ， 将幼苗拔出 ， 自来水洗去杂质 ， 将整 个根部浸入配置好的菌悬液中 30 min。 然后 ， 重新 种植于原育苗钵中 。 对照在无菌水中浸泡 30 min。 灌根接种法 : 白菜种植于无菌育苗基质中 ， 待长 至两叶一心时 ， 取 5 mL 配置好的菌悬液 ， 灌入大白 菜根际

15、周围 ， 对照灌入等量的无菌水 。 以上 4 种接种方法 ， 均采用草炭蛭石基质 ， 每处 理各 15 株苗 ， 重复 3 次 。 所有植株置于 20 左右 温室环境中 ， 16 h 光周期培养 ， 45 d 后调查发病情 况 。 接种后前 2 周使基质含水量 90% ， 之 后按需 浇水 。 1 2 3 肿根保 存形式对根肿病发病效果的影响 为明确肿根保存形式和保存时间对大白菜根肿病接 种效果的影 响 ， 选择了新鲜肿 根 、 20 保 存 6， 12， 24 个月的肿 根 、 干燥后 储 存 0， 3， 6 个月的肿根进行 接种试 验 。 新鲜肿根和冷冻肿根菌悬液的制备方法 参见 1 2

16、1。 干燥肿根菌悬液制备 : 采集的新鲜肿根室温自 然晾干后 ， 装入牛皮纸袋中 ， 置于干燥阴凉处保存 。 接种时 ， 将干燥肿根碾成粉末 ， 加入约 100 倍体积的 无菌水 ， 使病菌粉末充分悬浮 ， 75 m 筛网过滤 ， 弃沉 淀 ，用血球计数板调节菌悬液浓度至 3 108 个 / mL， 4 保存 ， 24 h 之内使用 。 采用浸根法接种 ， 白菜种子在湿润的滤纸上培 养 7 10 d， 根系在菌悬液中浸泡 30 min 后 ， 种植 。 每个处理接种 15 株苗 ， 3 次重复 。 对照灌入等量的 无菌水 。 接种后置于 20 左右温室环境中 ， 16 h 光 周期培养 ， 4

17、5 d 后调查发病情况 。 1 2 4 光源及 光周期对根肿病发病效果的影响 大白菜采用浸根 法接种 后 ， 分别置于不同的光源和 光周期环境 下 ， 人工 光源选用白炽 灯 ( 型 号 : TLD 36 W /895 光 强 : 200 mol / ( m2 s) ， PHILIPS) 和稀土 灯 ( 伞 形 80 W 植物生长 灯 ， 上海合鸣照明电器有 限 公 司 ) 2 种 。 光周期分别设 为 4， 8， 12， 16 h。 试 验 设 2 个对 照 ， 分别为 完 全自然光照和自然光照与稀土灯 补 光 ( 光周 期 16 h) 相结 合 。 每处 理 15 株 苗 ， 3 次 重

18、复 。 温 度 、 水 分等温室管理 同 上 ， 45 d 后调查发 病 情 况 。 1 2 5 基质 及 pH 值对根肿病发 病效果的影 响 我国十字花科蔬 菜根肿病发生严重的南 方 、 北方 及 高山地区田块土壤类型差异很 大 ， 因此选择了草 炭 、 蛭 石 、 砂 土 、 壤土 等常见基质类 型 ， 研究不同育苗基 质及 其 pH 值对大白菜发病程度的影 响 。 大白菜种子在湿润的滤纸上培养 7 d， 根系在 3 108 个 / mL 菌悬液中浸泡 30 min 后 ， 种植于 5 种 不同的基质中 ， 分别为 : 草炭 ， 购自北京京胜花圃 有限公司 ; 壤土 ， 取自中国农业科学院

19、蔬菜花卉 研究所实验农场 ; 草炭 蛭石 = 体积比 1 1; 草 炭 砂土 = 体积比 1 1; 砂土 壤土 = 体积比 1 1。 增 刊 柴阿丽 等 : 十字花科根肿病接种技术及发病条件研究 267 以 上基质混合均匀 后 ， 1 m3 基质中拌 入 4 kg 腐熟 鸡 粪 。 5 种育苗基质分 别 设 2 个酸碱梯 度 pH 值 5 和 7。 基 质 pH 值调节采 用 pH 值 为 3 0 的 H2 SO4 溶 液 ， 试验期 间 ， 各处理 分 别浇对 应 pH 值的 水 。 大 白 菜接种 后 ， 置 于 20 左右温室环境 中 ， 16 h 光周 期 培 养 ， 45 d 后调查

20、发病情 况 。 1 2 6 大白菜 根 肿病 调 查 大白菜根肿病调查及 分级标 准 4 : 0 级 ， 根 部无肿 大 ; 1 级 ， 肿根只附着 在 侧 根 上 ， 占全部根 系 1% 25% ; 2 级 ， 主根上 有肿 根 附 着 ， 侧根上肿根 占 25% 以 上 ; 3 级 ， 主根上 有肿 根 附 着 ， 肿根 占 根 系 50% 75% ; 4 级 ， 主根上有根 肿 附 着 ， 肿根占 根 系 75% 以 上 。 病情指 数 = ( ( 各 级 病 株 数 相对病 级 ) / ( 调查总株 数 最高病 级 ) ) 100。 2 结果与分析 2 1 不同接种方法对大白菜根肿病发

21、病的影响 4 种接 种方法在同一接种浓度 3 108 个 / mL 下 ， 平均病情指数与发病率有显著差异 。 其中 ， 灌根 接种法和蘸根接 种法发病程度最 高 ， 显著高于其 他 接种 方 法 ， 平均病情指数分别 为 96 11 和 96 67， 平 均发病率均 为 97 78% ， 二者之间差异不显 著 ( 表 1) 。 在浸根接种 法 中 ， 不同浸根时间直接影响植株 的发病程 度 ， 浸 根 时间延长能显著提高植株的病情 指数和发病 率 。 大白菜在湿润滤纸上催芽待根长约 1 1 5 cm 时 ， 在菌悬液中 浸 15， 30， 45， 60 min 后 播 种 ， 平均病情 指

22、数分 别 为 73 33， 86 67， 88 89， 93. 33， 平 均发病率分别 为 80 00% ， 91 11% ， 95 56% ， 95. 56% 。 其中 ， 浸根 30 min， 病情指数即可达到 86 以上 ， 发病率达到 91% 以上 ; 此后 ， 浸根时间延长 ， 发病率和病情指数增加不明显 ， 因此 ， 试验操作时可 选择浸根 30 min。 拌土接种法 发病程度最 低 ， 平均发病率和平均 病情指数分 别 为 80 00% 和 71 67。 拌土法与其 他 接种方法相 比 ， 在相同接菌压力 下 ， 平均发病率较其 他方 法 低 15 17 个百分 点 ， 而且接

23、种操作复 杂 ， 因 此 ， 人工接种或 进 行抗病性鉴定试验中不建议采用 此方 法 。 表 1 不同接种方法对大白菜根肿病发病的影响 Tab 1 Impact of different inoculation methods on the incidence of the disease 接种方法 Inoculation methods 处理方式 Processing method 平均发病率 /% Average disease incidence 平均病指 Average disease index 灌根 法 Pouring inoculation 两叶一心 期 ， 灌菌悬 液 5 mL

24、 97 78 0 04a 96 11 2 55a 蘸根 法 oot dipping inoculation 两叶一心 期 ， 菌悬液蘸 根 30 min 97 78 0 04a 96 67 4 41a 拌土 法 Soil inoculation 1 kg 基 质 ， 50 mL 菌悬 液 80 00 0 07b 71 67 6 01d 浸根 法 oot soaking inoculation 催 芽 7 d， 浸 根 15 min 80 00 0 07b 73 33 3 33d 催 芽 7 d， 浸 根 30 min 91 11 0 04ab 86 67 3 33c 催 芽 7 d， 浸 根

25、45 min 95 56 0 04a 88 89 1 92bc 催 芽 7 d， 浸 根 60 min 95 56 0 08a 93 33 5 77ab 对 照 Control 不接 种 0 00 0 00c 0 00 0 00e 注 : 表中数据为平均 数 标准 差 。 同列数据后不同字母表示 经 LSD 法检验 在 P 0 05 水平差异显著 。 表 2 3 同 。 Note: Data are mean SD Different letters in the same column indicate significant different at P 0 05 level by LSD

26、 test The same as Tab 2 3 2 2 肿根保存形式对大白菜根肿病发病的影响 选取新鲜肿 根 ， 20 保 存 6， 12， 24 个月的 冷 冻肿 根 ， 以及室温 干燥后储 存 0， 3， 6 个月的肿根 进 行接种试 验 ， 在相同的接种压力 下 ， 各处理大白菜根 肿病的病情指数差异不显 著 。 新鲜肿根的平均发病 率和平 均 病情指数较 高 ， 分 别 为 97 22% 和 92 59 ( 表 2) ; 20 冷冻储 存 和室温干 燥后储存的肿根 接种 后 ， 大白菜 根 肿病发平均发病率和平均病情指 数稍 低 ， 但差异不 显 著 。 其 中 ， 冷冻储 存 6

27、， 12， 24 个 月的肿根接种 后 ， 大白菜根肿病平均发病率和平均 病情指数无显著差 异 ， 说 明 20 储存时间长短对 根肿菌休眠孢子 活力无显著影 响 ， 可作为实验室保 存根肿菌 菌 源的方法之 一 。 另 外 ， 干燥储 存 0， 3， 6 个月的肿根接种后 ， 大白菜根肿病发病严重度也无 显著差异 ， 说明室温干燥后 ， 储存时间长短对根肿菌 休眠孢子活力无显著影响 ， 可作为实验室保存根肿 菌菌源的备选方法 。 2 3 光源和光周期对大白菜根肿病发病的影响 光源和光周期对大白菜根肿病发生程度有较大 影 响 。 温 室 自然光照结合稀土灯的处 理 ， 光 周 期 16 h，

28、大白菜根肿病发生最严 重 ， 病情指数 为 93 56， 高于只用自然光 或只用人工光源下的病情指 数 ， 说 明自然光照与稀 土灯补光相结 合 ， 利于大白菜根肿 病的发生和 肿 根的膨 大 。 光周 期 4 h 的处 理 ， 大 白 菜生长较 弱 ， 后期逐渐死 亡 ， 因此该处理根肿病发生 情况未调 查 。 268 华 北 农 学 报 30 卷 表 2 肿根保存形式对大白菜根肿病发病的影响 Tab 2 Impact of clubroot storage methods on the incidence of the disease 肿根保存形式 Clubroot storage met

29、hods 储存时间 / 月 Storage time 平均发病率 /% Average disease incidence 平均病指 Average disease index 新鲜肿 根 Fresh clubroot 0 97 22 4 81a 92 59 2 76a 冷 冻肿 根 Frozen clubroot 6 93 64 5 53a 91 74 5 33a 12 93 89 5 36a 92 12 4 90a 24 92 78 6 74a 88 42 5 43a 干燥肿 根 Air-dried clubroot 0 93 89 5 36a 91 94 5 42a 3 91 16 0

30、44a 90 12 3 47a 6 93 94 5 25a 90 44 2 94a 对 照 Control 0 00b 0 00 0 00b 相同光 源 ， 光周期越 长 ， 大白菜根肿病发病越严 重 。 光周 期 16， 12， 8 h 条 件 下 ， 采用相同接 种压 力 ， 光源为稀土灯的处理大白菜 根肿病病情指数分别为 89 39， 79 54， 71 74; 光源为白炽灯 的处理大白菜根 肿病病情指 数 分别 为 79 35， 70 91， 68 64。 采用 相 同光 源 ， 16 h 光 周 期条件下大白菜根肿 病发病情 况 显著高 于 12， 8 h 处 理 。 相同光周 期

31、， 光源为稀土灯的处理较白炽灯处 理大白 菜根肿病发病 重 。 其 中 ， 光 周 期 16 h 条 件 下 ， 稀土灯和白 炽 灯处理大白菜根肿病的病情指数 分别 为 89 39 和 79 35; 光周 期 12 h 条件 下 ， 稀土 灯 和 白炽灯 处理的病情指数分别 为 79 54 和 70 91。 光周期 8 h 条件下得到的结果相同 ， 即稀土灯处理 较白炽灯处理病情指数高 。 原因可能是稀土灯光源 环境下 ， 大白菜光合作用较强 ， 产生能量较多 ， 有利 于肿根的形成 。 另外 ， 调查发现光周期 12 h 的处理 ， 大白菜生长 状况不如光周期 8， 16 h 的处理 ( 表

32、 3) 。 原因可能是 : 光周期 8 h， 基本满足植株生长所需的光合作用量 ， 但 不能产生肿根膨大需要的足够能量 ， 所以 8 h 周期植 株生长良好 ; 光周期 12 h， 满足了产生肿根膨大需要 的足够能量 ， 所以根肿严重 ， 植株生长相对较弱 ; 光周 期 16 h 的处理 ， 光照时间的延长抵消了肿根膨大对 植株造成的不良影响 ， 白菜生长相对较好 ( 图 1) 。 A 白炽 灯 8 h 光周 期 ; B 白炽 灯 12 h 光周期 ; C 白炽 灯 16 h 光周期 ; D 稀土 灯 8 h 光周期 ; E 稀土 灯 12 h 光周期 ; F 稀土 灯 16 h 光周 期 ;

33、 G 自然光照 ; H 自然光 照 + 稀土灯补光 ( 16 h 光周期 ) ; I 未接种对照 。 A Incandescent lamp 8 h photoperiod; B Incandescent lamp 12 h photoperiod; C Incandescent lamp 16 h photoperiod; D are earth metal lamp 8 h photoperiod; E are earth metal lamp 12 h photoperiod; F are earth metal lamp 16 h photoperiod; G Natural ligh

34、t; H Natural light + are earth metal lamp ( 16 h photoperiod) ; I Uninfected control 图 1 不同光源和光周期对大白菜根肿病发病的影响 Fig 1 Effect of different light source and photoperiod on disease index 增 刊 柴阿丽 等 : 十字花科根肿病接种技术及发病条件研究 269 表 3 光源和光周期对大白菜根肿病发病的影响 Tab 3 Effect of different light source and photoperiod on di

35、sease index 光源 Light source 光周期 ( h) 及光照时间 Photoperiod Illumination time 平均病指 Average disease index 植株生长状况 Plant growth situation 稀土灯 are earth metal lamp 4( 8: 00 12: 00) 8( 8: 00 16: 00) 71 74 1 51c + 12( 8: 00 20: 00) 79 54 2 27b + 16( 8: 00 24: 00) 89 39 3 47a + 白炽灯 Incandescent lamp 4( 8: 00 12

36、: 00) 8( 8: 00 16: 00) 68 64 3 44c + 12( 8: 00 20: 00) 70 91 2 95c + 16( 8: 00 24: 00) 79 35 1 38b + 自然光 照 Natural light 10 h 73 21 2 54c + 自然光照 + 稀土灯补光 Natural light + are earth metal lamp 注 : 植株死亡 ; + 植株生长较弱 ; + 植株生长良好 。 16 h 93 56 3 76a + Note: Death plant; + Plant in poor health; + Plant grow we

37、ll 2 4 基质类型及 其 pH 值对大白菜根肿病发病的影响 不 同基质类型 及 pH 值条件大白菜根肿病发生 程 度差异显 著 ( 图 2) 。 草炭和蛭石基质 有利于大 白 菜根肿病的发 生 ， 砂土和壤土对大白菜根肿病发生 有 抑制作 用 。 根肿病 在 pH 值 5 0 和 7 0 时均可 发 病 ， pH 值 5 0 条件 下 ， 大白菜根肿病发病更为严 重 。 相 同 pH 值环境 下 ， 接 种芸薹根肿菌 后 ， 不同 基 质处理间大白菜根肿病的病情指数有显著差 异 。 其 中 ， 草 炭 + 蛭石处理和草炭处理根肿病发病最严 重 ， 显 著高于其他基质处 理 。 pH 值 5

38、 0 条件 下 ， 草 炭 + 蛭石和草炭基质 处 理 ， 大白菜根肿病的病情指数分 别 为 95 38 和 94 66; pH 值 7 0 条件 下 ， 病情指数 分 别 为 88 65 和 85 93， 2 种基质间差异 不显 著 。 其 次 为草 炭 + 砂土处 理 ， pH 值 5 0 和 7 0 条件下大白 菜 根肿病病情指数分别 为 63 89 和 54 47。 砂 土 + 壤 土基质和壤土基 质处 理 ， 根肿病发病的病情指数最 低 ， 均低 于 50， 说明与 砂 土 、 壤土相 比 ， 草 炭 、 蛭石 更 有利于根肿菌的 侵染和快速繁 殖 ， 原因可能是砂土 颗粒间孔隙 大

39、 ， 保水性 差 ， 而根肿病的发生需要有充 足 的 水 分 ; 而壤土质地 黏 重 ， 不利于肿根的膨 大 发 展 。 相同基质环境 ， 同样的接种 方法和接种压力下 ， 不同字母表示 经 LSD 法 检验 在 P 0 05 水平差异显著 。 Different letters indicate significant difference at P 0 05 level by LSD test 图 2 基质类型及其 pH 值对大白菜根肿病发病的影响 Fig 2 Effect of different substrate and pH environment on disease index

40、 3 讨论 根肿病是十字花科作物根部土传病害 ， 根肿菌 休眠孢子可以在土壤中存活多年 ， 随着农事操作携 带的病残体或病土进行传播 ， 且病原菌可在土壤中 存活多年 ， 造成根肿菌的防治十分困难 。 目前 ， 根肿 病的防治主要采用田园或农机具消毒的方法 16 17 ， 也有采用石灰 18 19 、 化学药剂 20 、 土壤消毒 、 生物 防治 21 22 等 ， 然而 ， 选育抗病品种仍然是最经济有 17 ， ， 、 稳定的十字花科 酸 性 pH 值 5 0 条件下的 处理根肿病病情指 数显 著 效的手段 因此 建立一套简便 高 于 pH 值 7 0 条件下的病情指 数 。 其 中 ， 草

41、炭 基 质 在 pH 值 5 0 和 7 0 条件 下 ， 大白菜根肿 病的 病 根肿病接种及品种抗性评价体系具有重要意义 。 十字 花科根肿病的发生程度受多种因素影响 。 17 、 温 度 23 情指数分 别 为 94 66 和 85 93; 草 炭 + 蛭石基质 在 病害严重度与土壤含水量 24 及土壤 pH pH 值 5 0 和 7 0 条件 下 ， 病情指数分别 为 95 38 和 88 65; 草 炭 + 砂土基质 在 pH 值 5 0 和 7 0 条件 下 ， 病情 指数分别 为 63. 89 和 54 74， 其他 基质也得 到 相同的结 果 ， 这 与 已报道根肿病发生严重地区

42、的土 壤呈酸性或微酸性相一 致 。 值 等因素密切相关 。 本研究十字花科蔬菜根肿 病的接种技术及适宜的发病条件 ， 分析不同的接种 方法 、 肿根保存形式 、 育苗基质 、 培养体系 、 环境 pH 值等条件对大白菜根肿病发病情况的影响 。 研究表 明 ， 灌根接种法待幼苗长至两叶一心时 ， 在寄主根系 270 华 北 农 学 报 30 卷 周围灌入根肿菌休眠孢子悬浮液 ， 操作方便 ， 而且节 约时间 ， 植株发病稳定 ， 发病率和病情指数都较高 ， 但缺点是使用的肿根量较大 ， 浪费接种源 。 蘸根接 种法是在两叶一心期 ， 将根系拔出用清水洗净后 ， 蘸 菌悬液接种 ， 虽然可以节省菌

43、源 ， 但操作较复杂 。 与 灌根法和蘸根法相比 ， 浸根接种法是催芽 7 d 后浸 根接种 ，不仅节省接种源 ， 而且操作简单 ， 发病稳定 。 因此 ， 进行十字花科蔬菜根肿病抗性鉴定 ， 笔者 推荐 采用浸根接种法 ， 特殊情况下也可根据需要选择灌 根或者蘸根接种法 。 新鲜肿 根 、 20 冷冻储存肿根和干燥保 存 肿 根在相同的接种 压力 下 ， 大白菜根肿病的平均发病 率和平均病 情 指数无显著性差 异 。 目 前 ， 国内外 保 存肿根普遍采 用 20 冷 冻保存 法 ， 需要较大的 冰 柜或冷库资 源 ， 消耗较多的能 量 ， 而采用室温自然晾 干后置于阴凉干 燥的之处保存的方

44、 法 ， 可以节省 大 量的空间和能 量 ， 因而应作为实验室保存肿根的推 荐 使 用 方 法 ， 干燥肿根也可以碾成粉末后 储 存 。 16 h光周期条件 下 ， 大白菜根 肿病发生最严 重 ， 且 发 病均 匀 ， 其 中 ， 温 室自然光照与稀土灯补光结 合 ， 效 果最 佳 ， 可作为 十 字花科蔬菜根肿病的最佳光照环 境 。 根肿病 在 pH 值 5 0 和 7 0 时均可发 病 ， pH 值 5 0 条件 下 ， 大白菜根肿 病发 病更为严 重 ， 说明酸 性 环境有利于根肿病的发 生 。 草炭和蛭石有利于大白 菜根肿病的发 生 ， 砂土和壤土对大白菜根肿病发生 有抑制作 用 。 总之 ， 试验结果表明 ， 采用草炭蛭石基质 ， 浸根 法接种 ， 光周期 16 h， pH 弱酸性 ， 最有利于十字花科 根肿病的发生 ， 根肿菌休眠孢子游动需要充足的水 分 ， 因此 ， 接种后前 2 周须保证基质水 分充足 ， 之后 按需浇水 。 另外 ， 为节省空间和能量 ， 接种源发病肿 根可以室温自然晾干后储存在