高效液相色谱测定肉制食品中五种邻苯二甲酸酯(共4页).doc

《高效液相色谱测定肉制食品中五种邻苯二甲酸酯(共4页).doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《高效液相色谱测定肉制食品中五种邻苯二甲酸酯(共4页).doc（4页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、精选优质文档-倾情为你奉上高效液相色谱测定肉制食品中五种邻苯二甲酸酯资料来源：中国增塑剂网王美丽，陈海婷，张会娜，郭智勇，魏丹毅(宁波市新型功能材料及制备科学国家重点实验室培育基地，宁波大学材料科学与化学工程学院，宁波)摘要:建立了肉制食品中5种邻苯二甲酸酯类增塑剂(PAEs)含量的检测方法。样品用正己烷提取，C18柱分离，柱温35.0，乙腈-水为流动相梯度洗脱，流速1.0mL/min，紫外检测波长226nm。5种PAEs分离特异性好，在0.0210g/mL之间均具有较好的线性关系，检出限在4.413.8ng/mL之间，高、中、低3水平的回收率均在79.5%102.0%之间，相对标准偏差均在1

2、.1%14%之间。方法适用于肉制食品中邻苯二甲酸酯类的检测。关键词：邻苯二甲酸酯；高效液相色谱；肉制食品食品容器和包装材料增塑剂包括邻苯二甲酸酯类(PAEs)、己二酸酯类(AEs)等。增塑剂与塑料间并没有严密的化学结合键，故很容易进入环境。近年的研究表明：PAEs和AEs在体内长期累积，可致畸、致癌和致突变1,2。因此，增塑剂的分析检测受到重视，尤以PAEs为研究对象居多。目前，PAEs的检测技术主要采用薄层色谱法3、气相色谱法46、液相色谱法714、气-质联用法15,16,样品处理技术主要有液-液萃取3,8,14,15、固相萃取4,5,9,11,16以及固相微萃取6,7,12,15等,涉及的

3、基体主要为PVC塑料3,4,6,15、环境样品(如水、泥土)5,8,13,16、组织和血浆7,8,10,15、食品12,14等。食品因直接被摄入而危害更大，报道过的研究对象主要包括：水产品、牛奶、食用油等。肉制食品的脂肪含量高，PAEs在其中的溶出程度尤为严重，但至今未见相关检测方法报道。 本文以邻苯二甲酸二乙酯(DEP)、邻苯二甲酸正二丁酯(DBP)、邻苯二甲酸正二辛酯(DOP)、邻苯二甲酸丁基苄基酯(BBP)、邻苯二甲酸(2-乙基己基)酯(DEHP)等5种PAEs为研究对象,建立了高效液相色谱法测定肉制食品中PAEs的方法。方法重现性好，准确度高，可用于肉制食品中此类物质的测定，也可用于生

4、产企业的质量控制。1 实验部分1.1 仪器与试剂 戴安P680C高效液相色谱仪，包括：P680型四元梯度泵，TCC-100型柱温箱，ASI-100型自动进样器，UVD170U型紫外检测器，Chromeleon色谱工作站；AB104-N型电子天平；XHF-D型高速分散器；SK-1型涡旋混匀器；DS180A型超声波清洗机；Heraeus Primo R高速冷冻离心机；D10-12型氮气吹扫仪；Heal Force PW超纯水系统。DEP、DBP、DEHP、DOP标准品(Sigma-Aldrich)，BBP标准品(TCI)，乙腈(HPLC级)、正己烷(Fisher)，水为超纯水。1.2 色谱条件 色

5、谱柱：Phenomenex Luna C18柱(250 mm4.6mmi.d.，5m)；预柱：Phenomenex C18柱(4mm3mm，5m)；紫外检测波长；226nm；柱温:35.0；进样体积20L；流动相：乙腈-水；流速：1.0mL/min；梯度洗脱，步骤如下表1所示。1.3 标准溶液配制分别称取DEP、BBP、DBP、DEHP、DOP标准品各00500g，分别用乙腈定容于50mL容量瓶中，配成1mg/mL的5种PAEs的储备液。准确移取5种PAEs的储备液各100.0L，置于同一10mL容量瓶中，用V(乙腈)V(水)=7525的混合溶液定容,配成10.0g/mL的混合标准应用溶液。再

6、用水逐级稀释，配成2.0、1.0、0.20、0.10、0.020、0.010g/mL的混合标准应用溶液。1.4 样品处理 准确称取已切碎的火腿肠0.5g于试管中，加入正己烷2mL，匀浆，涡旋振摇3min，超声提取15min，在-10下10000r/min离心10min，取清液；同法再萃取1次，合并2次清液，45下氮气流吹干，用乙腈0.5mL溶解残渣，经0.45m微孔滤膜过滤后，进样。以生产日期不超过15天，距离表面1cm以上的内层肉制品作为空白。2 结果与讨论2.1 色谱条件的选择 PAEs在205、226和272nm处有3个特征吸收峰，吸收强度依次增大，但272nm处杂峰干扰较多，综合考虑吸

7、收强度及干扰因素，选择226nm作为检测波长。 以纯乙腈作为流动相时，BBP和DBP、DEHP和DOP两两未能达到完全分离，增加流动相中水的含量，5种PAEs能完全分离，但DEHP和DOP的出峰时间增长，当以V(乙腈)V(水)=7525的流动相等度洗脱时，DOP的出峰时间超过了50min，故考虑采用梯度洗脱。在如表1所示条件下5种PAEs完全分离，出峰时间控制在22min之内。2.2 样品处理条件的选择 肉制食品所含成分复杂，目前主要采用有机溶剂液相萃取。尝试采用乙腈、乙醇、乙酸乙酯、正己烷等溶剂，正己烷效果最好。因肉制食品含有大量油脂，在萃取PAEs过程中油脂易被正己烷同时提取，对样品测试产

8、生干扰。考虑DEP、BBP、DBP、DEHP、DOP的凝固点分别为： -40、-35、-35、-55、-25，而大部分油脂尤其是肉制食品中的主要油脂动物脂肪，在-8以上即发生凝固，故在-10下高速冷冻离心，可除去大部分油脂，减少干扰14。2.3 特异性 图1给出了一系列具有代表性的色谱图。图1(a)是空白肉制食品的色谱图，可见尽管有生物杂质的特征峰，但均不在5种PAEs出峰时间段，,对分析物不产生干扰；图1(b)为5种PAEs的标准谱图，浓度均为10.0g/mL。DEP、BBP、DBP、DEHP、DOP的保留时间分别是4.6050.005、7.9680.005、8.7300.007、20.16

9、60.012和21.0780.007min；图1(c)为加标模拟样的色谱图，在图中5种PAEs的特征峰能够轻易准确地识别；图1(d)为一个出厂3个月的实际肉制食品的色谱图，其中检出有DOP，含量为23.2ng/g。2.4 回归方程及检出限 取1.4所述的标准系列溶液，在选定的色谱条件下，依次进样，记录色谱图，每个浓度重复进样3次。分别以每种物质的平均峰面积(y，mAUmin)对质量浓度(，g/mL)作图，得回归方程及检测限如表2所示。线性相关系数在0.99991.0000之间，表明5种PAEs在0.0110g/mL范围内线性良好。在该条件下，基线噪声为001mAU，以3倍信噪比(S/N)计算检

10、出限，结果如表2。2.5 回收率与精密度 取05g火腿肠3份，各加入10、1、0.1g/mL的混合标准溶液0.1mL，即得添加量分别为1、0.1、0.01g的加标模拟样，按照1.5进行样品处理，每个加标模拟样重复测定5次，计算回收率和精密度，结果如表3所示，5种PAEs的高、中、低3水平的回收率均在79.5%102.0%之间，相对标准偏差均在1.1%14%之间，表明该方法具有较好的回收率与精密度。其中DOP的回收率稍微偏低，原因可能是其凝固点相对较高，在冷冻离心过程中损失相对较大。2.6 样品分析 选取同一厂家、同一批次的肉制食品火腿肠，采用本方法分析，测定5种PAEs含量，以生产日期不超过15天,距离表面1cm以上的内层肉制品作为空白,结果如图1(a)。另测定距生产日期恰3个月时的样品，结果如图1(d)，检出其中有DOP，含量是23.2ng/g，该含量为将样品整体粉碎而得，实际上，初步实验结果表明，紧贴塑料的表层肉制食品中PAEs含量远高于内层，具体迁移规律正在深入研究中。 专心-专注-专业