REACH法规第四卷译稿-2.doc

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1、【精品文档】如有侵权，请联系网站删除，仅供学习与交流REACH法规第四卷译稿-2.精品文档.B部分:确定毒性及其他健康效应的化学方法引言：B部分B部份测定方法术语的一般定义(i) 急性中毒是被测物在给予一定的剂量在一定的时间内 (通常14 天)发生有害作用。(ii) 明显毒性是用来描述给予测定物一定剂量后发生明显的作用的通用术语。这对危险评估应该是充分的，而且剂量的增加可使被测物的征兆更加明显，还可能导致死亡率的上升。(iii) 剂量是测定物质的数量。剂量被表示成重量(克或毫克) 或如测定动物样品的每单位重量测定物质的重量(例如，每公斤身体重量毫克), 或直接用浓度的大小来表示(每公斤食物的百

2、万分之一或毫克)。(iv) 识别剂量是不会引起与化合物相关的动物死亡( 包括人类的死亡)的水平最高的固定的剂量的四分之一。 (v) 药量是一个一般的术语包含剂量，其频率和持续时间。(vi) LD50(半数致死量) 是指统计上获得的，预计引起动物半数死亡的单一剂量。 LD50 值表达为每单位重量测定动物所含的测定物质的重量术语 (毫克/千克).(vii) LC50(半数致死浓度) 是指能引起一群受试对象50%个体死亡所需的浓度。 LC50 表示成每一标准的体积空气中测定物质的重量 (毫克/千克).(viii) NOAEL 是用最大试用剂量或最高暴露标准而没有观察到不利作用的缩写。(ix) 重复的

3、剂量/亚慢性的毒性是指每天对动物使用一定剂量的药品或在一段时间内对动物使用一定剂量的药品所产生的有害作用。(x) 最大耐药力剂量 (MTD) 是指某实验总体的一组受试动物中不引起动物死亡的最大药物剂量。(xi) 皮肤刺激是在使用测定物质以后皮肤产生激烈的变化 。(xii) 眼睛刺激是在使用测定物质以后眼睛表面产生的变化。(xiii) 皮肤过敏 (过敏性皮炎) 是皮肤对被测化学物质的反应。(xiv) 皮肤腐蚀是皮肤在使用测定物质之后 3 分钟到 4个小时后不能再生性还原损害的皮肤组织(xv) 毒物动力学是对测定物质吸收，分布，新陈代谢和排泄的研究。(xvi) 吸收是被测定的物质进入身体的过程 。

4、(xvii) 排泄是被测定的物质和/或它的新陈代谢产物从身体被排出的过程。(xviii) 分布是被测定的物质和/或它在身体里面的新陈代谢产物扩散。（xvv）代谢是被测定的物质由酶或非酶反应在身体中产生化学结构和物理性质的变化过程。B.1.急性-重复剂量 / 亚慢性及慢性毒性使用多种多样的毒性测定方法(方法 B.1-B.5) 跟随单一剂量,对物质的急性毒性对器官或全身毒性作用进行评估，可以对毒性进行大概的指示。对于物质的毒性，虽然在吸入研究中没有提及极限测定，但是可以考虑极限测定方式或完整的 LD50测试,因为现今还不太可能对单一吸入接触极限下定义。我们应该考虑使用尽可能少的动物，并且把动物的痛

5、苦减少到最小的程度, 比如固定剂量的方法 (方法 B.1两步法) 和急性毒性级别法(方法 B.1 三步法). 第二项研究可能弥补第一项研究得出的结论。 在这种情况下，可能会用一个标准的测定方法或一种对更少的动物采取测定的方法。重复剂量毒性测定 (方法 B.7 ， B.8 和 B.9) 包括从重复的实验中评估毒性作用。为了获得尽可能多的实验数据，强调对动物样品细心的临床观察。 这些测定帮助识别毒性的目标器官和毒性剂量。另外，在长期的科研中需要进行进一步的深入研究 (方法 B.26- B.30 和B.33)。B.2诱变（性）生殖毒性诱变性指的是细胞或生物的遗传基因的材料结构或数量上可遗传的突变的归

6、纳方法。这些变化“突变”可能发生于单一基因或基因片段，一组基因或者整个的染色体。 染色体变异可能是结构的或数量的变化。物质的致突变作用,在基本集信息中，通过细菌的基因（点）突变（方法B.13/14）和哺乳动物样品的结构染色体细胞失常(方法B.10)的体外分析进行评估。在体内程序中也是如此,例如，微核测定 (方法 B.12) 或骨髓细胞分裂中期分析,.(方法 B.11) 不管用任何办法, 体外方法是无任何禁忌的首选。附加的对诱变性深远的或现今对致癌性的研究调查是批量生产或 管理，进行一个危险评估的需要,这些可用于许多方面: 确定在基础模型中获得的结果;在基础模型中没有涉及到的终点测试，在活体研究

7、中开始或扩充，开始和扩充在体内的研究。为了这些目的，方法 B.15 到 B.25 既包括体内和体外真核细胞系统又包括广泛的生物学终端测试。 这些测定提供比细菌模型更复杂的关于点突变的信息和其它终点测试的信息。作为基本原则, 考虑进一步研究诱变性的实验步骤 ,应该提供有关诱导有机体突变的物质和/或物质的致癌潜在性的附加信息。在实际研究中一种合适的详细的例证须依据诸多因素, 包括物质的化学和物理特性, 开始的细菌和细胞学的化验，物质新陈代谢的简述,其他的毒性研究结果和已知的物质的用途。选择固定的测定时间表对于应当考虑到可能的各种因素是不恰当的。一些测定方案总的原则是93/67/EEC制定的, 但是

8、一些用于危险评估的详细的测试方法可以在技术指导文件上查阅，它们是不固定的并且可以根据具体的环境进行调整。进一步的调查的方法列在下面, 以其遗传基因的终点测试为标准:调查基因(点)突变的研究(a)使用真核微生物(啤酒酵母)进行正向和反向突变的研究 (方法 B.15)(b)体外研究哺乳动物细胞的正向突变,(方法 B.17)(c) 黑腹果蝇的伴性-隐性致死测定,(方法 B.20)(d)体内体细胞突变测定 , 小鼠现场测定,(方法 B.24)染色体异常研究(a)哺乳动物体内细胞遗传研究; 如果这些研究没有被包含在初始评估中，体内骨髓细胞的分裂中期分析应该被考虑进去 (方法 B.11). 除此之外, 应

9、该探索体内生殖细胞的细胞遗传性 (方法 B.23)(b) 哺乳动物体外细胞增生研究，如果这没有被包含在最初的评估中,(方法 B.10)(c)啮齿类动物显性致死因子的研究,(方法 B.22)(d)小鼠遗传性变异测定,(方法 B.25)遗传性作用 对DNA 影响遗传毒性, 确认为在遗传基因的材料上的有害作用未必与诱变性有关, 因为其没有对 DNA 的伤害直接的证据。 以下使用真核微生物或哺乳动物细胞的方法可适当地用于此项调查:(a)啤酒酵母的有丝分裂的重组,(方法 B.16)(b) DNA 损坏和修复- S期外DNA合成 - 哺乳动物细胞 -体外。(方法 B.18)(c) 哺乳动物样品细胞中姐妹染

10、色体交换 -体外,(方法 B.19)调查致癌潜在性的替代方法哺乳动物细胞的变化分析对于测量物质在细胞培养时对它的形态和行为的诱导是有用的，这和体内恶性肿瘤细胞的迁移有关(方法 B.21)。 许多的不同细胞类型和标准可能在测试时被用到。哺乳动物遗传效应的危险评估许多基因（点）突变方法可以用来测量哺乳动物样品的遗传效应,例如小鼠特性现场测定, 为了测量第一代生殖细胞突变，( 不包含在这一个附属物中), 或为染色体变异,例如小鼠可遗传突变的测定,.(方法 B.25) 当估计一物质对人遗传基因的危害的时候 , 可以用这种方法。 然而,这些复杂性的测定及这些测定需要非常大量的动物,特别是实验需特殊场所，

11、故在实施这些研究时需要充分的论证。B.3致癌物质化学药品依据作用机制分，可以描述为神经毒性或非神经毒性致癌物质。现在关于神经毒性物质的致癌潜在性信息可能是从诱变性/神经毒性研究获得。从重复的剂量实验，亚慢性的或慢性的毒性测定,重复的剂量毒性测定中可获得附加的实验数据。方法 B.7 和比较长的重复剂量研究包括在在重复的剂量毒性测定中观察以评估生理的变化。例如某些组织的增生应该得到关注。这些研究和毒物动力学实验数据可能帮助识别化学药品致癌潜在性, 这些可能需要在致癌性测定 (方法 B.32) 或经常的慢性毒性/致癌性的综合性研究中获得。(方法 B.33)B.4生殖毒性生殖毒性可以用不同的方法检测。

12、例如男性和女性生殖功能的损害,确认为在生殖力方面的影响, 或归纳为后裔不可遗传的有害的作用，分泌乳汁期间的致畸性和作用也被确认为“发展的毒性“。对致畸性的研究,作为正在发展的毒性测定的部份,测定方法(方法 B.31)主要通过口饲途径。 另外，其他的途径依靠测定物质的物理性质以及人类接触途径。 在此种情况下，测定方法应该适合应用于 28 天的测定。第三代的生殖 (生殖力) 测定是需要的,二代的生殖的测定描述方法 (方法 B.35),可延伸至第三代。B.5. 神经毒性神经毒性可以以不同的方式来检测，例如中枢或周围神经系统方面的功能的变化和/或结构的生物化学变化。神经毒性的早期迹象可以从急性毒性测定

13、中获得。为了获得很多的实验数据，必须采用重复剂量毒性测定方法 B.7, 包括神经毒性作用的评估 , 仔细的观察动物样品的临床表现。 方法应该帮助识别有神经毒性化学药品，这可能需要对这一个方面进行比较深入的调查。 此外，必须着重考虑物质的潜在的引起特定的神经毒性作用，这些潜在的作用在其他的毒性研究中不能被发现。 例如, 某有机磷物质可延缓神经毒性作用并且可以在方法 B 37 和 B.38 中被评估。B.6免疫毒性免疫毒性可用多种方法检测，如免疫抑制剂法和/或超敏反应或应激自动免疫增强信号法。重复剂量毒性测定，B.7方法，包括免疫毒性因子的评估。该方法有助于识别潜在的免疫毒性化学物质，但有待于进一

14、步讨论。B.7 毒性动力学毒性动力学的研究有利于对毒性的阐述和评价。这些研究是为了通过测定阐明化学药品毒物的特性以及对未来毒性研究带来帮助.并不是在每一种情况下所有的参数都要被测定。只有在极少的情况下，整个系统的毒性影响参数（吸收，排泄，分布和新陈代谢）才都需要测定。对于某些特定的化合物来说，这一系列的因素的变化可以是有帮助作用的或者某一特定单独计量研究可以是很充分的。（方法B.36）关于化学结构和物理化学性质的信息可以通过指定路线的药剂使用方法和新陈代谢组织分布的可能性来提供关于吸收性质的说明。通过先前有关毒性和毒性扩散的研究，也可以得到的有关毒性控制因素的信息。C.测定物质的性质在任何毒性

15、研究开始前，我们必须了解实验物质的组成。它包括主要成分的不纯程度和包含稳定性在内的物理化学性质。实验物质的物理化学性质为实验方法的选择，每个特定研究的设计和实验物质的处理和储存提供了重要信息。在开始实验前，我们要设计出实验物质在药剂介质和生物材料中定性定量分析的方法。所有有关论证，物理化学性质、纯度和实验物质的行为的信息都应在实验结果报告中给出。D.动物样品的饲养在毒性实验中，对饲养环境条件进行严格的控制和合适的饲养动物样品的技术是必须的。(i)饲养环境在实验动物样品的笼子中，要提供适合该实验动物种类生存的环境条件。对于大鼠、小鼠和天竺鼠而言，合适的条件为笼子温度为223,相对湿度为30%70

16、%；对兔子而言，温度为203，相对湿度为30%70%。有些技术对温度的作用特别敏感，在这种情况下，有关合适的测定条件的细节会在实验方法的描绘中有所说明。在所有关于毒性作用的研究中，温度和湿度的信息都应被监控、记录并写在最终的实验研究结果报告中。光照条件应被人工控制为12小时白天，12小时黑夜。光照类型的细节应该记录并写在最终的研究实验结果报告中。除非在实验方法中有特别的说明，动物一般可以分别饲养或把少量的同性别的动物共同饲养；对于共同饲养来说每个笼子中的动物数量不应超过5只。在关于动物样品的实验结果报告中，在化学分析和任何结果观察阶段，把关养类型和每个笼子中关养动物样品的数目交代清楚是很重要的

17、。（ii）喂养条件食物应该满足被实验的动物样品的所有的营养需求。当实验物质在食物中给动物使用时，食物的营养价值可能因实验物质与食物成分的相互作用而降低了其营养价值。在得出实验结果时，这种相互作用的可能性应该被考虑。可以不断地提供饮用水来组成实验室的便利食品。在用这种方法是用实验物质时，食物的选择可能为确定某种实验物质的某种特定状态的需要而被影响。已经确认能够产生毒性影响的食物污染物不应该作为干扰因素。E.动物样品的保护当设计实验方法时，我们必须考虑如何减轻动物痛苦的问题。下面将给出一些例子，但并不全面。准确的说明或条件应该能在方法的全文中找到：- 对于急性口饲毒性实验，“固定剂量实验方法”和“

18、急性中毒分级方法”这两种方法应被考虑。“固定剂量实验方法”并不利用死亡作为终点，它使用的动物数量很少。“急性中毒分级方法”使用的动物样品的数量平均比B.1法少70%。这两种方法比传统的方法能造成较少的痛苦。- 使用的动物数量减少到科学上可以接受的最小的数目。对于方法B.1和B.3来说，每个计量等级只测定同种性别的5只动物；对于用天竺鼠（方法B.6）来做皮肤致敏的测定实验的最大化的方法，也只有10只动物被使用（只有5只作为阴性对照组）；当测定体内的突变性时用作阳性控制组所需的动物量也减少了。（方法B.11和方法B.12）- 在实验过程中应该把动物样品的疼痛和痛苦减到最小；对非常痛苦的动物应该采取

19、人道主义的方法宰杀；在定量实验中由于腐蚀或刺激导致显著疼痛的物质最好不要采用（方法B.1，方法B. 2和方法B.3）。- 不仅在急性中毒实验（方法B.1,B.2和B.3）,而且在体内的突变性实验中，用无联系的高剂量进行测定都应当通过极限实验的说明来避免。- 当能够提供充足的科学证据时，对刺激测定的方案现在允许非行动测定或减少到用单个动物个体的研究。这些科学证据可以基于物质的物理化学性质，即其它有效实验的结果，或是在体外实验中获得的良好结果上。例如, 一个皮试急性中毒测定在限制性剂量水平下进行，并且没有观察到皮肤敏感度现象，就不需要进行进一步测定了。在皮试过敏测定中确认有腐蚀性或导致严重皮肤敏感

20、度的物质（方法B4）不应进一步去做眼睛过敏的实验。（方法B5）F 其它测定方法欧盟的一个科学目标是研究出一种有效的替代技术。它能像现有的动物测定方法一样提供同水准的信息，却用很少的动物，引起较少的痛苦甚至完全不用动物。当这种技术变得可行时，就得考虑是否能用来划分物质的危险性及其其带来的影响以及用做潜在危险的标识。G 实验结果评价与分析当实验结果评价与分析时，必须考虑测定结果可以在何种程度上推广到人的情况。因此，在人身上的副作用，如果可能，就可作为测定结果的确证。用这些方法测定的结果可以用于分类、标识现有以及新的对人类的健康有作用的化学药剂。对应的附件中分类与标识标准也和这些测定方法中的测定原理根本上相似。这些结果也可以用在风险评估性的测定中。对于新的和现有的化学药剂，在相应的参考文献中应能找到合适的测定方案。H.文献注释这些方法绝大多数都是在为世界经济合作和发展组织项目框架下建立起来的“实验指导”下发展起来的。为了确保实验数据的尽可能的相互认可，使用这些方法时必须遵循“实验室良好行为规范”的原则。其它的信息可以在经济合作和发展组织指导方针的注释里面以及相关的文献中找到。