动物微生物学及免疫学血清学反应学习教案.ppt

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1、一、凝集反应一、凝集反应 1、直接凝集反应： 细菌、红细胞等颗粒性Ag与相应Ig混合以后，在电解质参与下，经过( jnggu)一定时间Ag颗粒相互凝集形成肉眼可见凝集块。参与凝集反应的Ag称凝集原，Ig称凝集素。平板法和试管法第1页/共22页第一页，共23页。2、间接(jin ji)凝集反应 先将可溶性Ag或Ig吸附于一种与免疫无关的有一定大小的颗粒载体(zit)表面制成固相Ag或Ig，再与相应的待检Ig或Ag结合产生的反应。 分为两类： 间接血球凝集反应（HA） 间接血球凝集抑制反（HI）第2页/共22页第二页，共23页。 间接(jin ji)血球凝集反应（HA） 阳性 间接血球凝集抑制(y

2、zh)反（HI） 阳性 阴性 第3页/共22页第三页，共23页。二、沉淀(chndin)反应 胶体状态的可溶性Ag（如细菌和寄生虫的浸出液、组织(zzh)浸出液、培养滤液、动物血清等）与相应Ig混合后，经一定时间，形成肉眼可见的沉淀物。 临床上常用于诊断炭疽、梅素、鼠疫、猪丹毒、气肿疽等传染病。 沉淀反应分为以下三种：第4页/共22页第四页，共23页。实验(shyn)管： 4mm小管 已知Ig 层叠未知Ag 交界面白色沉淀环对照管： 4mm小管 已知Ig 层叠生理盐水 交界面无沉淀环1、环状沉淀(chndin)反应（Ascoli反应）第5页/共22页第五页，共23页。2 2、絮状沉淀、絮状沉淀

3、(chndin)(chndin)反应：反应： 将Ag和相应在试管内或凹玻片上混匀，经过一定时间性，出现肉可见絮状或颗粒状不溶性沉淀物为阳性(yngxng)。 如诊断梅毒的康氏反应，及用标准类毒素测定抗毒素血清效价的絮状试验等。第6页/共22页第六页，共23页。3、琼脂(qingzh)扩散试验 单相琼扩：将已知（1：10稀释），加入等量的1%琼脂（56）管（或平板）中，凝固后，于其上（打孔）加待检Ag（孔中），置37湿合感作，2-3h后可见白色沉淀带。 双相琼扩：1%琼脂凝胶制成平板后，在上面按设计(shj)图形打孔，在孔内分别加Ag和Ig，放密闭湿盒中，将使之双相扩散而形成沉淀带。第7页/共2

4、2页第七页，共23页。 单相琼扩 双相琼扩含已知Ig琼脂(qingzh) 被检血清（Ig）待检Ag 已知Ag第8页/共22页第八页，共23页。三、补体结合反应三、补体结合反应(fnyng)溶菌反应： 某些细菌（霍乱弧菌）与相应的抗体混合(hnh)以后，如有补体参加，则细菌发生溶解的反应，称溶菌反应。溶血反应： 红细胞与相应的抗体（溶血素）混合以后，如有补体以参加，则红细胞发生(fshng)溶解的反应，称溶血反应。第9页/共22页第九页，共23页。补体(bt)的特点1、补体是酶类物质，但均以无活性的前体形 式存在于血清中2、动物血清中尤其以豚鼠血清含量最高，故 多用豚鼠的新鲜(xn xin)血清

5、作为补体的来源3、补体性质不稳定，易失活，经56度30分 处理即灭活第10页/共22页第十页，共23页。4、补体本身没有特异性能与任何一组抗原抗体复合物相结合，一但结合后不再(b zi)游离。5、补体不与单独的抗原或单独的抗体相结合。第11页/共22页第十一页，共23页。补体结合反应(fnyng)的概念补体结合反应（简称(jinchng)补反CFT）： 是指在补体参加下，以绵羊红细胞（Ag）和抗绵羊溶血素（Ig）作为指示系统的抗原抗体反应。第12页/共22页第十二页，共23页。补体结合反应补体结合反应(fnyng)的原理的原理补反包括两个系统五种成分：一是被检系统（溶菌系）中的已知Ag、待检I

6、g及仅供一组Ag-Ig系统反应的定量(dngling)补体。二是指示系统（溶血系）中的红细胞和溶血素。第13页/共22页第十三页，共23页。 首先是溶菌系统的抗原与抗体复合物与补体相互混合后产生的反应(fnyng)。 其次为了测知溶菌系统中补体是否被利用，再加入溶血系（绵红细胞和抗绵溶血素）作为指示系统，以观察因补体游离所产生的溶血情况。 如果反应(fnyng)的结果是不溶血为诊断阳性，发生了溶血为诊断阴性。第14页/共22页第十四页，共23页。操作(cozu)与结果 操练时，分两步进行： 将待检系统的Ag、Ig与补体三种成加入试管内，于37度水浴作用30分钟，然后加入指示系统，于37水浴作用

7、30分钟，观察(gunch)结果。 结果观察(gunch)： 不溶血为诊断阳性，发生溶血为阴性第15页/共22页第十五页，共23页。四、中和实验(shyn) 病毒或毒素与相应Ig以一定比例(bl)混合后，经过一定时间，病毒丧失对易感动物的致病性，或消除毒素在试管内的溶血现象，谓之中和反应。 该试验既可在体外进行，也可在体内进行，可利用小动物、鸡胚、活细胞等作试验。操作如下：第16页/共22页第十六页，共23页。五、免疫荧光法 荧光素：如异硫氰酸荧光素（FITC）、丽丝胺罗丹明B（RB200）等受紫外线照射后可发荧光（FITC 为绿色，RB200为玫瑰红色）。 荧光Ig：将荧光素（染料）连接在提

8、纯(tchn)的Ig分子上，这种用荧光素标记的Ig。第17页/共22页第十七页，共23页。免疫荧光法反应(fnyng)原理荧光(ynggung)(ynggung)素与IgIg分子结合后，并不改变其与相应AgAg结合的特性，当用这种荧光(ynggung)Ig(ynggung)Ig对受检标本染色后，在荧光(ynggung)(ynggung)显微镜下观察，可见暗视野中闪烁荧光(ynggung)(ynggung)的细菌等，根据这种现象便能对标本中相应AgAg进行鉴定和定位。第18页/共22页第十八页，共23页。免疫荧光技术免疫荧光技术(jsh)示意图示意图 被检Ag + Ag + 荧光Ig Ig 荧光

9、复合物 被检Ag + Ag + 标准(biozhn)Ig + (biozhn)Ig + 荧光抗Ig Ig 荧光复合物 被检Ag+Ag+标准(biozhn)Ig+(biozhn)Ig+补体+ +荧光抗补体+ +补体 荧光复合物 第19页/共22页第十九页，共23页。六、免疫(miny)酶技术第20页/共22页第二十页，共23页。免疫酶技术(jsh)分类免疫酶组化 ：直接法 间接(jin ji)法酶联免疫吸附试验（ELISA ） ：检测Ag的双Ig夹心法检测Ig的间接(jin ji)法第21页/共22页第二十一页，共23页。感谢您的观看(gunkn)！第22页/共22页第二十二页，共23页。NoImage内容(nirng)总结一、凝集反应。参与凝集反应的Ag称凝集原，Ig称凝集素。平板法和试管法。1、环状沉淀反应（Ascoli反应）。如诊断梅毒(mid)的康氏反应，及用标准类毒素测定抗毒素血清效价的絮状试验等。2、动物血清中尤其以豚鼠血清含量最高，故。二是指示系统（溶血系）中的红细胞和溶血素。感谢您的观看第二十三页，共23页。