血脂检测方法及临床意义学习PPT教案.pptx
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1、血脂检测方法及临床意义血脂概述 血脂是血浆中的中性脂肪(甘油三酯和胆固醇)和类脂(磷脂、糖脂、固醇、类固醇)的总称,广泛存在于人体中。它们是生命细胞的基础代谢必需物质。一般说来,血脂中的主要成份是甘油三酯和胆固醇,其中甘油三酯参与人体内能量代谢,而胆固醇则主要用于合成细胞浆膜、类固醇激素和胆汁酸。2022-5-241血浆脂蛋白的分类 超速离心法 1、乳糜微粒(CM) 2、极低密度脂蛋白(VLDL) 3、中间密度脂蛋白(IDL) 4、低密度脂蛋白(LDL) 5、脂蛋白(a)LP(a) 6、高密度脂蛋白(HDL)2022-5-242血浆脂蛋白的分类 电泳法分为乳糜微粒,前脂蛋白,脂蛋白和脂蛋白 四
2、条脂蛋白区带2022-5-243血浆脂蛋白的组成与结构2022-5-244血浆脂蛋白的组成与结构 大致为球形颗粒,由两大部分组成,即疏水性的内核和亲水性的外壳。内核由不同量的CE和TG组成,表层由载脂蛋白、PL和FC组成,FC及PL的极性基团向外暴露在血浆中,载脂蛋白是兼性化合物,它的疏水部分掩蔽在脂蛋白中,而亲水部分突出于脂蛋白颗粒的表面。2022-5-245载脂蛋白 血浆脂蛋白中的蛋白质部分称为载脂蛋白,主要分A、B、C、D、E五类,主要在肝(部分在小肠)合成,载脂蛋白是构成血浆脂蛋白的重要组分。基本功能是运载脂类物质及稳定脂蛋白的结构,某些载脂蛋白还有激活脂蛋白代谢酶、识别受体等功能。主
3、要在肝(部分在小肠)合成,按ABC系统命名,各类又可细分几个亚类,以罗马数字表示。2022-5-246高脂蛋白血症WHO分型2022-5-247引起继发性高脂血症的病因 1 、糖尿病 常表现为IV型高脂蛋白血症。(胰岛素的缺乏,不仅促使肝脏生成VLDL增加,而且因LPL活性降低,导致VLDL清除减少,主要表现为血清TG、VLDL水平升高,TG严重升高者有发生急性胰腺炎的危险性。) 2、甲减 常表现为IIa或IIb型高脂蛋白血症患者血TC水平升高可同时血TG水平升高(LPL活力降低,IDL代谢障碍、LDL受体功能下降、血浆LDL清除减慢等) 3、肾脏疾病 肾病综合征时的高脂蛋白血症由脂蛋白降解障
4、碍和合成过多双重机制引起。2022-5-248高脂蛋白血症的因素 4、药物:降压药,利尿剂,受体阻滞剂可TG 和HDL 长期应用糖皮质激素治疗可使TG、TC升高 5、其他:肝胆系统疾病、胰腺炎、长期过量饮酒2022-5-249低脂蛋白血症表现 1、家族性低-脂蛋白血症 (肝脏LDL受体上调,伴胆汁酸过度合成,使血浆中VLDL在转化为LDL前已被肝脏分解代谢。) 2、-脂蛋白缺乏血症 (ApoB合成分泌缺陷,使含ApoB的脂蛋白如CM、VLDL、LDL合成代谢障碍,伴随脂肪吸收和代谢紊乱,血浆TC也非常低)2022-5-2410血脂检测方法及临床意义 总胆固醇(TC) 甘油三酯(TG) 高密度脂
5、蛋白胆固醇(HDL-C) 低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C) 载脂蛋白A1(ApoA1) 载脂蛋白B(ApoB)2022-5-2411 总胆固醇(TC)测定测定化学法酶法酶法 化学测定法化学测定法 化学测定法通常需化学测定法通常需抽提纯化抽提纯化。显色剂主要有两类:。显色剂主要有两类:醋酸醋酸- -醋酐醋酐- -硫酸硫酸高铁硫酸。高铁硫酸。 这些显色反应须用强酸试剂,干扰因素多,准确这些显色反应须用强酸试剂,干扰因素多,准确测定有赖于从标本中抽提、皂化、纯化过程,因而操测定有赖于从标本中抽提、皂化、纯化过程,因而操作较繁,不适于分析大批量标本,且不适于自动分析。作较繁,不适于分析大批量标本,且不
6、适于自动分析。 n特点:特点: 1 1Liberman-BurchardLiberman-Burchard反应反应 18851885年年LibermanLiberman发现胆固醇在硫酸、醋酐溶液中显色,发现胆固醇在硫酸、醋酐溶液中显色,18901890年年BurchardBurchard用此反应测定胆固醇称为用此反应测定胆固醇称为L-BL-B反应。反应。 1953 1953年年ZakZak提出用硫酸、醋酸和提出用硫酸、醋酸和Fe3+Fe3+等与胆固醇作用生等与胆固醇作用生成紫红色化合物来测定胆固醇,称为成紫红色化合物来测定胆固醇,称为ZakZak反应。反应。 2 2ZakZak反应反应 酶测定
7、法酶测定法n特点:特点: 常规测定中现已广泛应用酶法,酶法具有特异性好,精密常规测定中现已广泛应用酶法,酶法具有特异性好,精密度和灵敏度都能很好地满足临床实验室的要求,既可以手工操度和灵敏度都能很好地满足临床实验室的要求,既可以手工操作,也适合自动分析,但酶法测定中出现了不同程度的作,也适合自动分析,但酶法测定中出现了不同程度的基质效基质效应。应。 采用酶反应原理的干化学法颇为实用,其缺点是价格高,采用酶反应原理的干化学法颇为实用,其缺点是价格高,精密度差。胆固醇的酶测定法始于精密度差。胆固醇的酶测定法始于7070年代。由于操作简便,试年代。由于操作简便,试剂无腐蚀性,特别适用于自动生化分析,
8、剂无腐蚀性,特别适用于自动生化分析,目前已成为测定胆固目前已成为测定胆固醇的主要方法。醇的主要方法。 用胆固醇酯酶水解胆固醇酯生成脂肪酸和胆固醇,胆固醇被胆固醇氧化酶氧化生成4-胆淄烯酮和过氧化氢,然后在过氧化物酶催化下,H2O2与4-氨基安替比林及酚结合,生成红色醌亚胺。醌亚胺的最大吸收峰在500nm左右,吸光度与标本中的胆固醇含量成正比。反应方程式如下: 胆固醇酯+H2O 胆固醇+游离脂肪酸 胆固醇+O24-胆甾烯酮+H2O2 2H2O2+4-氨基安替比林+酚醌亚胺CHECHOPODn评价:评价:主要缺点是:主要缺点是:优点优点:本法灵敏度高、准确度高、精密度好,线性范围宽。:本法灵敏度高
9、、准确度高、精密度好,线性范围宽。某些胆固醇酯酶对胆固醇酯的水解不完全,不能用纯胆固醇结晶以有机某些胆固醇酯酶对胆固醇酯的水解不完全,不能用纯胆固醇结晶以有机溶剂配制的溶液作为溶剂配制的溶液作为TCTC分析的校准液,而应以准确定值的血清作为标准,分析的校准液,而应以准确定值的血清作为标准,此校准液(品)相当于三级标准。此校准液(品)相当于三级标准。 表面活性剂,如吐温表面活性剂,如吐温-40-40可以干扰胆固醇酯酶的作用,而聚乙烯醇可以干扰胆固醇酯酶的作用,而聚乙烯醇60006000可使结果提高可使结果提高1 12 2; 本法具有氧化酶反应途径的共同缺陷,易受到一些还原性物质如尿酸、本法具有氧
10、化酶反应途径的共同缺陷,易受到一些还原性物质如尿酸、胆红素、维生素胆红素、维生素C C和谷胱甘肽等的干扰。和谷胱甘肽等的干扰。 【参考值】【参考值】 血清总胆固醇合适范围:血清总胆固醇合适范围:5.22mmol/L (200mg/dl)5.22mmol/L (200mg/dl),边缘升高:边缘升高:5.235.235.69mmol/L(2015.69mmol/L(201219mg/dl)219mg/dl),升高:升高:5.72mmol/L (220mg/dl)5.72mmol/L (220mg/dl)。u影响影响TC水平的因素水平的因素 年龄与性别;年龄与性别;长期的高胆固醇、高饱和脂肪酸和高
11、热量饮食可使长期的高胆固醇、高饱和脂肪酸和高热量饮食可使TCTC增高;增高;遗传因素;遗传因素; 其它:如缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可能使其它:如缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可能使TCTC升高。升高。 TC TC除了作为高胆固醇血症的诊断指标之外,不能作为其它任何疾病的诊除了作为高胆固醇血症的诊断指标之外,不能作为其它任何疾病的诊断指标,对于动脉粥样硬化和冠心病而言,断指标,对于动脉粥样硬化和冠心病而言,TCTC是一个明确的危险因子,与冠是一个明确的危险因子,与冠心病的发病率呈正相关。心病的发病率呈正相关。【临床意义】【临床意义】u高高TCTC血症:血症:原发和继发 u低低TCTC血症:
12、血症:原发和继发 相关疾病 高TC血症有原发和继发两类,原发的如家族性高胆固醇血症,家族性apoB缺陷症,多源性高TC,混合性高脂蛋白血症等,继发的见于肾病综合征,甲减,糖尿病,妊娠等。 低TC血症原发和继发,原发如家族性无或低脂蛋白血症,继发如甲亢,营养不良,慢性消耗性疾病等。2022-5-2420 血清(浆)甘油三酯测定血清(浆)甘油三酯测定化学法化学法酶法酶法n基本操作:基本操作: 化学测定法化学测定法1 1、抽提抽提:关键是选用合适的抽提剂,既要使甘油三酯提取完全,又要消除磷关键是选用合适的抽提剂,既要使甘油三酯提取完全,又要消除磷脂、游离甘油和葡萄糖等干扰物质的影响。脂、游离甘油和葡
13、萄糖等干扰物质的影响。 2 2、皂化皂化:甘油三酯水解生成甘油,这一步大都采用甘油三酯水解生成甘油,这一步大都采用KOHKOH作皂化剂作皂化剂 3 3、氧化氧化:过碘酸在酸性溶液中将甘油氧化成甲醛和甲酸过碘酸在酸性溶液中将甘油氧化成甲醛和甲酸 4 4、显色显色:甲醛的定量主要有两种方法:甲醛的定量主要有两种方法:甲醛与变色酸(4,5-二羟-2,7-萘二磺酸)在硫酸溶液中加热生成紫色化合物 甲醛与乙酰丙酮在铵离子(NH4+)存在下生成黄色的二乙酰二氢二甲基吡啶 磷酸甘油氧化酶法原理 用脂蛋白酯酶(LPL)使血清中TG水解成脂肪酸和甘油,甘油激酶(GK)及三磷酸腺苷(ATP)将甘油磷酸化,以磷酸甘
14、油氧化酶(GPO)氧化3-磷酸甘油(G-3-P)产生H2O2,最后以Trinder反应显色,A500nm的值与TG浓度成正比。 TG+H2O甘油+脂肪酸 甘油+ATPG-3-P+ADP G-3-P+O2磷酸二羟丙酮+H2O2 H202+4-AAP+4-氯酚苯醌亚胺非那腙+H2O22022-5-2423n去除去除FGFG干扰可用下列方法:干扰可用下列方法:1 1、外空白法:同时用不含、外空白法:同时用不含LPLLPL的酶试剂测定的酶试剂测定FG FG 作空白。作空白。2 2、内空白法:又称两步法或双试剂法、内空白法:又称两步法或双试剂法将将LPLLPL和和4-AAP4-AAP组成试剂组成试剂2
15、2,其余部分为试剂,其余部分为试剂1 1。 乳酸脱氢酶法乳酸脱氢酶法 原理: TG + 3H2O LPL Glycerol + 3RCOOH Glycerol + ATP GK+Mg2+ G-3-P + ADP ADP + 磷酸烯醇式丙酮酸 丙酮酸激酶 丙酮酸 + ATP丙酮酸+NADH LDH NAD+ + 乳酸 由于反应消耗由于反应消耗NADHNADH,故可利用,故可利用NADHNADH在在340nm340nm吸光度降低来吸光度降低来测定甘油三脂的浓度测定甘油三脂的浓度。n评价: 本法结果准确,但灵敏度较低,试剂本法结果准确,但灵敏度较低,试剂也不太稳定。由于血清本身存在游离甘油也不太稳定
16、。由于血清本身存在游离甘油和丙酮酸等干扰物质,所以测定时除了要和丙酮酸等干扰物质,所以测定时除了要做试剂空白外,还要做标本空白做试剂空白外,还要做标本空白 甘油氧化酶法甘油氧化酶法 第一步:第一步: FG + OFG + O2 2 甘油氧化酶甘油氧化酶 甘油醛甘油醛+ H+ H2 2O O2 2 H H2 2O O2 2 + EMAE + EMAE PODPOD 无色物质无色物质消除游离甘油的影响,消除游离甘油的影响,3-5min3-5min后进行第二步反应:后进行第二步反应:TG + 3HTG + 3H2 2O O LPLLPL Glycerol + 3RCOOH Glycerol + 3R
17、COOHFG + OFG + O2 2 甘油氧化酶甘油氧化酶 甘油醛甘油醛+ H+ H2 2O O2 2H H2 2O O2 2 +4-AAP+ EMAE +4-AAP+ EMAE PODPOD 有色化合物有色化合物注:注:EMAEEMAE作用与酚相似,是还原剂,但灵敏度比酚高。作用与酚相似,是还原剂,但灵敏度比酚高。n原理原理:该法分两步完成。该法分两步完成。甘油三酯临床意义 原发性高TG血症多有遗传因素,包括家族性高TG血症与家族性型高脂蛋白血症等。继发性高TG血症见于糖尿病,糖原累积病,甲减,肾病综合征,妊娠,口服避孕药,酗酒等。富含TG的脂蛋白是冠心病的独立的危险因子,TG增加表明患者
18、存在代谢综合征,需进行治疗。甘油三酯降低很少见,甲亢,肾上腺皮质功能减退和肝功能严重损伤时可以见到甘油三酯降低。2022-5-2428甘油三酯的参考范围2022-5-2429 高密度脂蛋白测定高密度脂蛋白测定 常以测定常以测定HDL-CHDL-C含量代表含量代表HDLHDL水平。水平。 n参考方法参考方法: : 超速离心分离超速离心分离HDLHDL,然后用化学法(,然后用化学法(ALKBALKB法)或法)或酶法测定其胆固醇含量,此法需特殊设备,而且不易酶法测定其胆固醇含量,此法需特殊设备,而且不易常握。常握。 n常规方法常规方法: : 1磷钨酸-镁法 2HDL直接测定法 HDLHDL直接测定法
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