新型、快速、低成本SPE法检测黄曲霉毒素BBGGM1.doc

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1、【精品文档】如有侵权，请联系网站删除，仅供学习与交流新型、快速、低成本SPE法检测黄曲霉毒素BBGGM1.精品文档.新型、快速、低成本SPE法检测黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1目前检测黄曲霉毒素的方法通常为免疫亲和层析净化高效液相色谱法和酶联免疫吸附法（ELISA）这两种方法。酶联免疫吸附法（ELISA）操作简单，快速，但灵敏度低且会出现假阳性，需使用免疫亲和柱法进行精确定性、定量，而免疫亲和柱又存在使用繁琐、价格昂贵、储存条件苛刻、保存期短等缺点。针对上述问题，迪马科技最新开发出新型、快速、低成本的ProElutTM固相萃取方法。该方法可实现与免疫亲和柱法相当的高精度回收率结果，但使

2、用成本却大大降低。ProElutTM固相萃取法单个样品的检测成本为免疫亲和柱法的1/4，酶联免疫法的1/2，同时ProElutTM固相萃取法简单易操作、不需要专用的大型设备、对操作人员要求不高，特别适用于各种食品生产企业及检测机构，将大大降低黄曲霉毒素的检测成本。以下为使用ProElutTM固相萃取柱开发的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1 和黄曲霉毒素M1的检测方案，供您参考！乳制品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1的检测1 适用范围 适用于牛奶、奶粉等乳制品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1的检测。2 样品准备/提取2.1 牛奶、原料乳等液态奶制品(1) 称取2 g样品，加

3、入2 mL乙腈，涡旋混合1 min；(2) 再加入4 mL乙腈，涡旋混合1 min，4000rpm，离心5 min；(3) 取上清液4 mL，作为上样液待净化。2.2 奶粉等固体奶制品(1) 称取2 g样品，加入5mL水，涡旋混合2min，样品与水充分混匀；(2) 加入5 mL乙腈，涡旋混合1 min；(3) 再加入10 mL乙腈，涡旋混合1 min，4000rpm，离心5 min；(4) 取上清液5 mL，作为上样液待净化。3 SPE柱净化ProElutTM AFT 黄曲霉毒素检测专用柱1500 mg/12 mL（Cat.#65904）(1)活 化：10 mL乙腈，流出液弃去；(2)上 样：

4、将上样液加入柱中（流速控制每滴/两秒），接收流出液；(3)洗 脱：10 mL乙腈洗脱（流速控制每滴/两秒），收集流出液。合并步骤（2）、（3）流出液；(4)重新溶解：在40下用减压蒸馏将流出液浓缩至大约2 mL，向旋蒸瓶中加入5 mL无水乙醇，继续减压蒸馏完全干燥；(5)衍 生： 依次加入0.5 mL正己烷和0.5 mL三氟乙酸，旋好玻璃塞充分混匀衍生液，45静置10 min。然后挥干衍生液，用10%乙腈水溶液定容至0.5 mL。4 分析条件色谱柱：Diamonsil C18（2），250 mm4.6 mm，5m（Cat.#99603）流 速：1.0 mL/min 检测器：荧光检测器，Ex:3

5、65 nm；Em:435 nm柱 温：30进样量：20 L流动相：A：水； B：异丙醇+乙腈=3+2梯度设置时间/min0515202130A%908080609090B%1020204010105 添加回收结果5.1 牛奶中黄曲霉毒素添加回收结果分析物添加水平(g/kg)回收率/%RSD(n*=4)/%黄曲霉毒素B11.086.092.81黄曲霉毒素B21.083.942.04黄曲霉毒素G11.083.281.58黄曲霉毒素G21.092.153.71黄曲霉毒素M11.093.823.625.2 奶粉中黄曲霉毒素添加回收结果分析物添加水平(g/kg)回收率/%RSD(n*=4)/%黄曲霉毒素

6、B12.095.243.69黄曲霉毒素B22.075.772.65黄曲霉毒素G12.078.652.43黄曲霉毒素G22.085.081.79黄曲霉毒素M12.086.724.215.3黄曲霉毒素HPLC图0.02.55.07.510.012.515.017.520.0min010203040506070809012345mV1.AFT M12.AFT G13.AFT B14.AFT G25.AFT B25.4 牛奶中黄曲霉毒素检测HPLC图黑色：黄曲霉毒素标准溶液1.0 ng/mL色谱图；蓝色：牛奶中黄曲霉毒素加标1.0 ug/kg色谱图；粉色：牛奶未添加黄曲霉毒素色谱图。5.5 奶粉中黄曲

7、霉毒素检测HPLC图黑色：黄曲霉毒素标准溶液1.0 ng/mL色谱图；蓝色：奶粉未添加黄曲霉毒素色谱图。粉色：奶粉中黄曲霉毒素加标2.0 g/kg色谱图；注：ProElutTM SPE法检测黄曲霉毒素M1的详细解决方案请链接黄曲霉毒素检测相关产品信息(现货)：(参考GB 5413.37-2010乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的测定，GB/T 5009.23-2006 食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定 等标准)货号名称规格样品前处理65904黄曲霉毒素检测专用固相萃取柱ProElutTM AFT（可用于黄曲霉毒素总量及黄曲霉毒素M1的测定）1500mg/12mL, 20/pk82O-CO

8、IAC1005黄曲霉毒素M1免疫亲和柱3mL, 25/pk82O-COIAC1001黄曲霉毒素总量(B1、B2、G1、G2)免疫亲和柱1mL, 25/pk82O-COIAC1004黄曲霉毒素总量(B1、B2、G1、G2)免疫亲和柱3mL, 25/pk24435812管防交叉污染真空SPE萃取装置12位48031,3,6mL柱管通用连接器15/pk4806考克(控制流量)15/pk99011真空/正压两用泵，无油1/pk99013抽滤瓶套装(包括硅橡胶管2米,2L抽滤瓶及橡胶塞)1/pk37177针头式过滤器 Nylon13mm,0.22m 100/pk37180针头式过滤器 Nylon13mm

9、,0.45m 100/pk标准品51-46304-U-1EA黄曲霉毒素混标（B1,B2,G1,G2）5 1mL in MethanolAflatoxin B1, 1g/mLAflatoxin B2, 0.3g/mLAflatoxin G1, 1g/mLAflatoxin G2, 0.3g/mL51-46319-U-1EA黄曲霉毒素M16795-23-91mL, 10g/mL in acetonitrile 51-46323-U-1EA黄曲霉毒素B11162-65-81mL3g/mL in benzene:acetonitrile (98:2) 51-46324-U-1EA黄曲霉毒素B27220

10、-81-71mL 3g/mL in benzene:acetonitrile (98:2) 51-46325-U-1EA黄曲霉毒素G11165-39-51mL 3g/mL in benzene:acetonitrile (98:2) 51-46326-U-1EA黄曲霉毒素G27241-98-71mL 3g/mL in benzene:acetonitrile (98:2) 色谱柱及保护柱99603反相高效液相色谱柱Diamonsil C18(2)250 4.6mm, 5m6201EasyGuard C18 保护柱10 4.0mm 1/pk2个柱芯+1个柱套87003UPLC专用色谱柱Endeavorsil C18 1.8, 100 2.1mmHPLC溶剂缓冲盐离子对试剂50102甲醇 HPLC级4L50101乙腈 HPLC级4L50144甲酸 HPLC级50mL50122异丙醇 HPLC级4L50106丙酮 HPLC级4L50115正己烷 HPLC级4L50134三氟乙酸 HPLC级50mL通用色谱产品52401B瓶架/蓝色（现货）50孔52401A瓶架/白色（现货）50孔5323样品瓶（棕色/螺纹）2mL, 100/pk5325样品瓶盖/含垫（已经组装）100/pkH80465HPLC 进样针25L