现代分子生物学实验.doc

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1、【精品文档】如有侵权，请联系网站删除，仅供学习与交流现代分子生物学实验.精品文档.分子生物学实验一、课程纲要说明分子生物学实验是生物科学的一门主干实验课程。分子生物学技术作为现代生物技术中最为先进的实验手段之一，现在已经渗透到生命科学、医学及工农业生产等各个领域中，是一种非常重要的现代技术手段。通过此实验教学使学生了解分子生物学技术发展的现状、未来及应用，使学生掌握分子生物学技术的基本原理及相关的实验操作技术，从而使学生更进一步加深理解和巩固所学的分子生物学课程的理论知识。二、实验对象：生物科学专业本科学生三、实验学时数：18学时四、实验项目及内容：实验一 质粒DNA的提取及酶切一、实验目的通

2、过本实验学习和掌握碱裂解法提取质粒和酶切的方法。二、实验内容1、碱裂解法提取质粒DNA；2、酶切DNA。三、实验仪器及用品1、仪器： 恒温培养箱、恒温摇床、台式高速离心机、高压灭菌锅、指管（微量离心管）、指管（微量离心管）架、加样枪、移液器架子、超声波清洗仪、超净工作台、稳压稳流电泳仪、多用途紫外分析仪、微波炉、恒温磁力搅拌器2、用（药）品： 葡萄糖、三羟甲基氨基甲烷（Tris）、乙二胺四乙酸（EDTA）、NaOH、SDS、乙酸、钾、冰乙酸、氯仿、乙醇、胰RNA酶、氨卡青霉素、蔗糖、溴酚蓝、8-羟基喹啉、疏基乙醇、盐酸、含pUC19质粒、EcoRI吸头、小指管四、实验人数：每班分2次，每次分6

3、8组，每组34人。五、实验学时：3学时六、实验类型：设计 实验要求：选修实验二 琼脂糖凝胶电泳检测DNA一、实验目的：通过本实验学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术。二、实验内容：1制备琼脂糖凝胶2加样3电泳4染色5观察电泳结果、拍照三、实验仪器及用品1仪器：恒温培养箱、琼脂糖凝胶电泳系统、台式离心机、高压灭菌锅、紫外线透射仪、指管（微量离心管）、指管（微量离心管）架2用（药）品：蔗糖、三羟甲基、氨基甲烷（Tris）、乙二胺四乙酸（EDTA）、硼酸DNA marker、溴酚蓝、溴化乙、含pUC19质粒、吸头四、实验人数：每班分2次，每次分6-8组，每组34人。五、实验学时：3学时六、实验类

4、型：设计 实验要求：选修实验三 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化一、实验目的：通过本实验，掌握大肠杆菌感受态细胞的制备及转化的方法和技术。二、实验内容：1培养大肠杆菌 2制备大肠杆菌感受态细胞三、实验仪器及用品1仪器：超净工作台、低温离心机、恒温摇床、恒温箱、-70冰箱（超低温冰箱）、恒温水浴锅、50ml 离心管和离心机、吸头、试管、培养皿、锥形瓶、试管架、吸量管、量筒、滴管、吸耳球2.用（药）品： CaCI2、胰蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、氨卡青霉素、大肠杆菌DH5a、Puc19质粒四、实验人数：每班分2次，每次分68组，每组34人。五、实验学时：3学时六、实验类型：设计 实验要求：必修实验四

5、 哺乳动物基因组DNA的提取一、实验目的：通过本实验了解并掌握提取基因组DNA的原理和步骤，以及相对分子质量较大的DNA的琼脂糖凝胶电泳技术。二、实验内容：1制备哺乳动物肝脏匀浆2提取DNA三、实验仪器及用品1仪器：台式高速离心机、玻璃匀浆器、高压灭菌锅、微量指管、一次性灭菌过滤器、10ml注射器、水浴锅、加样枪、移液器架子、超净工作台、稳压稳流电泳仪、多用途紫外分析仪、微波炉、恒温磁力搅拌器、液氮罐2用（药）品：鼠肝脏、Tris、SDS、EDTA、蛋白脉K、RNA酶、DNA相对分子质量标准物、DNA/EcoRI+Hind相对分子质量标准物、HCI、NaCI、NaAc、平衡酚、氯仿、异戊醇、硼

6、酸、溴酚蓝、蔗糖四、实验人数：每班分2次，每次分68组，每组34人。五、实验学时：3学时六、实验类型：验证 实验要求：必修实验五 植物总RNA的提取一、实验目的：通过本实验学习从植物组织中提取RNA的方法。二、实验内容：1总RNA的提取2甲醛变性琼脂糖凝胶电泳分析总RNA三、实验仪器及用品1仪器：低温离心机、台式离心机、200以上烘箱、琼脂糖凝胶电泳系统、紫外线透射仪、高压灭菌锅、液氮罐、50ml 离心管、研钵、剪刀、橡胶手套2用（药）品：DEPC、异硫氰酸胍、乙酸钠、LiCI、酚、氯仿、乙醇、甲醛、吗啉代丙烷磺EDTA、琼脂糖四、实验人数：每班分2次，每次分68组，每组34人。五、实验学时：

7、3学时六、实验类型：验证 实验要求：必修实验六 植物基因组DNA的提取一、实验目的： 通过本实验学习从植物组织中提取DNA的方法。二、实验内容：从植物组织中提取DNA三、实验仪器及用品1仪器：高速离心机和离心管（50ml）、台式离心机、吸头、研钵、玻璃匀浆器、高压灭菌锅、微量指管、一次性灭菌过滤器、10ml注射器、水浴锅、移液器、超净工作台、稳压稳流电泳仪、多用途紫外分析仪、微波炉、恒温磁力搅拌器、液氮罐2用（药）品：Tris、EDTA、NaCI、异丙醇、琼脂糖、SDS、HCI、KCI、巯基乙醇、TE 四、实验人数：每班分2次，每次分68组，每组34人。五、实验学时：3学时六、实验类型：设计

8、实验要求：选修实验七 PCR基因扩增一、实验目的： 通过本实验学习PCR反应的基本原理与实验技术。二、实验内容：1 配制反应体系2 PCR扩增3 琼脂糖凝胶电泳分析PCR结果三、实验仪器及用品1仪器：PCR热循环仪、琼脂糖凝胶电泳系统、吸头、指管、移液器、超净工作台、紫外透射仪、凝胶成像系统2用（药）品：DNA摸板、dNTP、引物1引物2、Taq酶、琼脂糖、DNA相对分子质量标准物、MgCI2、明胶、石蜡油、KCI四、实验人数：每班分2次，每次分68组，每组34人。五、实验学时：3学时六、实验类型：设计 实验要求：必修实验八 DNA重组实验一、实验目的： 通过本实验学会重组DNA连接以及鉴定重

9、组子的方法。二、实验内容：1质粒DNA的制备2制备重组DNA3制备涂菌的琼脂板4 制备感受态细胞5 转化 6 重组子的鉴定三、实验仪器及用品1仪器：恒温摇床、恒温水浴锅、恒温培养箱、台式离心机、培养皿、接种针、玻璃涂棒、试管、酒精灯、镊子、牙签2用（药）品：胰蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、氨卡青霉素、氯化钙、二甲基甲酰胺、EcoRI酶、T4 DNA连接酶、DH5a、 DNA、pUC 19质粒四、实验人数：每班分2次，每次分68组，每组34人。五、实验学时：3学时六、实验类型：设计 实验要求：选修五参考文献：分子生物学实验，高等教育出版社，魏群，2003分子生物学理论和技术，顾晓松，潭湘林，北京科

10、学技术出版社，2002生物化学与分子生物学实验技术，厉朝龙，浙江大学出版社，1999六. 实验报告要求：1.要求写出实验目的2.要求写出实验原理3.要求写出实验步骤4.要求写出实验结果：实验结果是实验中最重要的部分。应将实验过程中所观察的现象真实、正确、详细地记述下来。实验中的每次观察都应随时作原始记录。5.要求对实验结果进行讨论和分析：要判断实验结果是否为预期的，如果出现非预期结果，应该再考虑和分析其可能原因。实验结论是从实验结果中归纳出一般的、概括性的判断，也就是这一实验所能验证的概念、原则或理论的简明总结。结论中一般不要罗列具体的结果。在实验中未能得到充分证据的理论分析不应写入结论。七

11、附表：分子生物学实验一览表序号实验项目实验类型实验要求学时每组人数实验仪器及用品1实验一 质粒DNA的提取及酶切综合必修34恒温培养箱、恒温摇床、台式离心机、高压灭菌锅、电泳仪、电泳槽、移液器2实验二 琼脂糖凝胶电泳检测DNA设计必修34琼脂糖凝胶电泳系统、台式离心机、紫外线透射仪、微波炉、移液器、超净台3实验三 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 综合必修34超净台、低温离心机、恒温摇床、超低温冰箱4实验四 哺乳动物基因组DNA的提取综合必修34台式高速离心机、玻璃匀浆器、一次性灭菌过滤器、高压灭菌锅、超净台、分光光度计、电泳系统、紫外线透射仪5实验五 植物总RNA的提取综合必修34低温离心机、台式离心机、烘箱、紫外线透射仪、高压灭菌锅、超净台、6实验六 植物基因组DNA的提取综合选修34离心管（50ml）、台式离心机、吸头、指管、Tris、高压灭菌锅、超净台、分光光度计、电泳系统、紫外线透射仪7实验七 PCR基因扩增设计必修33PCR热循环仪、DNA摸板、4中dNTP、引物、移液器、超净台、电泳系统、紫外线透射仪8实验八 DNA重组实验设计选修33摇床、水浴锅、培养箱、离心机、胰蛋白胨