生化习题及答案.doc

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1、【精品文档】如有侵权，请联系网站删除，仅供学习与交流生化习题及答案.精品文档.第一章：蛋白质的结构与功能 一、名词解释 1.构象 2构型 3氨基酸的等电点 4二面角 5肽单位 6蛋白质一级结构 7蛋白质二级结构 8蛋白质三级结构 9蛋白质四级结构10超二级结构 11结构域 12蛋白质的等电点 13盐溶 14蛋白质的变性作用 15蛋白质的复性 16盐析 17蛋白质的变构效应 18沉降系数 19电泳 20. 偶极离子 二、填空题 1.肽链的N末端可以用（ ）法、（ ）法、（ ）法和（ ）法测定，而（ ）法和（ ）法则是测定C末端氨基酸最常用的方法。 2.已知蛋白质的超二级结构的基本组成方式有（ ）

2、、（ ）和（ ）。 3.确定蛋白质中二硫键的位置，一般先采用（ ），然后用（ ）技术分离水解后的混合肽段。 4.因为（ ），（ ）和（ ）等三种氨基酸残基的侧链基团在紫外区具有光吸收能力，所以在（ ）nm波长的紫外光吸收常被用来定性或定量检测蛋白质 5.带电氨基酸有（ ）氨基酸与（ ）氨基酸两类，其中前者包括（ ）、（ ）后者包括（ ）、（ ）、（ ）。 6.在蛋白质元素组成中，氮的含量相当恒定，平均为（ ）%。 7.当氨基酸溶液的pH=pI时，氨基酸以（ ）离子形成存在；当pHpI时，氨基酸以（ ）离子形式存在。 8.氨基酸具有两性解离特性，因此它既可被（ ）滴定，又可被（ ）滴定。丙氨酸的

3、PK-COOH=2.34，PK-NH3+=9.69，其pI=（ ），在pH=7时，在电场中向（ ）极方向移动。 9有两种蛋白质,一种经末端分析得知含两个N-末端，用SDS电泳显示两条带，说明此蛋白质含有（ ）个（ ）亚基；另一蛋白质用巯基乙醇处理后，SDS电泳显示一条带，则该蛋白质的结构特点是（ ）。 10.我国科学家于1965年首次用（ ）方法人工合成了（ ）蛋白质。 11.蛋白质中存在（ ）种氨基酸，除了（ ）氨基酸外，其余氨基酸的-碳原子上都有一个自由的（ ）基及一个自由的（ ）基。 12.-螺旋中相邻螺圈之间形成链内氢键，氢键取向几乎与（ ）平行。氢键是由每个氨基酸的（ ）与前面隔三个

4、氨基酸的（ ）形成的，它允许所有的（ ）都能参与氢键的形成。 13能形成二硫键的氨基酸是（ ），分子量最小的氨基酸是（ ）。 14稳定蛋白质胶体状态的因素是蛋白质分子上的（ ）及（ ）。 15蛋白质根据分子形状可分为（ ）和（ ）两种。 16. 用胰蛋白酶水解蛋白或多肽时，由（ ）和（ ）的羧基所形成的肽键最易被水解。 17丝氨酸、苏氨酸及酪氨酸的极性是由侧链基团的（ ）基提供的，天冬酰胺和氨酰胺的极性是由其（ ）引起的，而半胱氨酸的极性则是因为含（ ）的缘故。 18已知下列肽段： （1）-Ala-Phe-Tyr-Ala-Arg-Ser-Glu- （2）-Lys-Glu-Arg-Gln-His

5、-Ala-Ala- （3）-Gln-Cys-Leu-Ala-Ser-Cys-Ala- （4）-Gly-Leu-Ser-Pro-Ala-Phe-Val- 其中在pH=7条件下向负极移动快的多肽是（ ）；在280nm有最大吸收的是（ ）；可能形成二硫键桥的是（ ）；-螺旋中断的是（ ）。 19.Pauling等人提出的蛋白质-螺旋模型中，每圈螺旋包含（ ）个氨基酸残基，高度为（ ）。每个氨基酸残基沿轴上升（ ）并旋转100。 20血红蛋白与氧的结合过程呈现（ ）效应，这是通过血红蛋白的（ ）作用来实现的。 21.天然蛋白质分子中的-螺旋都属于（ ）手螺旋。 22.维持蛋白质一级结构的化学键有（ ）

6、和（ ）。维持二级结构主要靠（ ），维持三级结构的作用力除了以上几种外还需（ ）、（ ）和（ ）。 23.氨基酸顺序自动分析仪是根据（ ）反应原理设计的，多肽链的氨基末端与（ ）试剂反应生成（ ）然后在无水的酸中经环化裂解成（ ）。 24.蛋白质主链构象的结构单元包括（ ）、（ ）、（ ）、（ ）。 25.维系蛋白质四级结构的最主要作用力是（ ）。 26.常用的测定蛋白质分子量的方法有（ ）、（ ）和（ ）等。 27.GSH表示（ ），它由（ ）、（ ）和（ ）通过（ ）键连接而成，活性基团是（ ）。 28.（ ）花费10年时间，利用（ ）反应首先弄清、（ ）的一级结构。它由（ ）条多肽链组成

7、，各条多肽链分别包括（ ）和（ ）个氨基酸残基，链内和链间有（ ）个（ ） 键。 29.-螺旋和-折叠结构属于蛋白质的（ ）级结构，稳定其结构的作用力是（ ）。若某肽链的分子量为22000，（氨基酸的平均分子量为110），则全为-螺旋 时肽链的长度为（ ）nm，全为-折叠时肽链的长度（不考虑-折叠的双链）为（ ）nm。 30.盐析法是分离提纯蛋白质过程中常用的方法之一，常用的主要盐析试剂是（ ）、（ ）和（ ）。 三、选择题 1 胰蛋白酶的作用点是:（ ） A精氨酰-X B苯丙氨酰-X C.天冬氨酰-X D.X-精氨酸 （X代表氨基酸残基） 2. 胶原蛋白组成中出现的不寻常氨基酸是:（ ） A

8、.乙酰赖氨酸 B.羟基赖氨酸 C.甲基赖氨酸 D.D赖氨酸 3. 破坏螺旋结构的氨基酸残基之一是:（ ） A.亮氨酸 B.丙氨酸 C.脯氨酸 D.谷氨酸 4 茚三酮与脯氨酸反应时，在滤纸层析谱上呈现:（ ）色斑点 A.蓝紫 B.红 C.黄 D.绿 5 用Sepharose 4B柱层析来分离蛋白质，这是一种:（ ） A.离子交换柱层析 B.吸附柱层析 C.分子筛（凝胶过滤）柱层析 D.配柱层析 6. 有个天然肽的氨基酸顺序为：Pro-Ala-Phe-Arg-Ser，你要证实N端第二位Ala的存 在， 最好的试剂选择是:（ ） A.FDNB B.PITC C.无水肼 D.羧肽酶 7. 双缩脲反应主

9、要用来测定:（ ） A.DNA B.RNA C.胍基 D.肽 8在天然蛋白质组成中常见的一个氨基酸，它的侧链在pH7.2和pH13都带电荷，这个 氨基酸是:（ ） A.谷氨酸 B.组氨酸 C.酪氨酸 D.精氨酸 9牛胰岛素由A、B两条链组成，其中B链是:（ ） A.30肽 B.31肽 C.20肽 D.21肽 10胶原蛋白中最多的氨基酸残基是:（ ） A.脯氨酸 B.甘氨酸 C.丙氨酸 D.组氨酸 11在混合氨基酸中，酪氨酸可借下列哪一种试剂来检定：（ ） A.水合茚三酮反应 B.桑格反应 C.米伦反应 D.阪口反应 12. 与茚三酮反应不呈兰紫色的氨基酸是：（ ） A.Phe B.Pro C.

10、Glu D.Met 13下列有关蛋白质叙述哪项是正确的：（ ） A. 通常蛋白质的溶解度在等电点时最大 B大多数蛋白质在饱和硫酸铵中溶解度增大 C蛋白质分子的净电荷为零时的pH是它的等电点 D以上各项全不正确 14盐析法沉淀蛋白质的原理是：（ ） A. 降低蛋白质溶液的介电常数 B中和电荷，破坏水膜 C与蛋白质结合成不溶性蛋白 D调节蛋白质溶液pH到等电点 15凝胶过滤法分离蛋白质时，从层析柱上先被洗脱下来的蛋白质是：（ ） A分子量大的 B分子量小的 C.带电荷多的 D.带电荷少的 16SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳技术最常用的指示剂为：（ ） A.亚甲基兰 B.石蕊 C.碘乙醇 D.溴酚兰 17

11、蛋白质的基本组成单位是：（ ） A.肽键平面 B核苷酸 C肽 D.氨基酸 18含有两个羧基的氨基酸是：（ ） A.Lys B.Asn C.Gln D.Glu 19下列哪种氨基酸为环状亚氨基酸：（ ） A.Gly B.Pro C.Trp D.Try 20下列氨基酸中，哪种是天然氨基酸：（ ） .Orn（鸟氨酸） .Cit（瓜氨酸） .Pro(脯氨酸) .HyPro（羟脯氨酸） 21氨基酸在等电点时，应具有的特点是：（ ） .不具正电荷 .不具负电荷 .a+b .在电场中不泳动 22氨基酸不具有的化学反应是：（ ） .双缩脲反应 .茚三酮反应 .DNFB反应 .PITC反应 23蛋白质的一级结构指

12、的是：（ ） .蛋白质的-螺旋结构 .蛋白质分子的无规则卷曲 .蛋白质分子内氨基酸以肽键相连接 .蛋白质分子内氨基酸的排列顺序 24维持蛋白质二级结构的主要化学键是：（ ） .氢键 .二硫键 .疏水键 .离子键 25在一个肽平面中含有的原子数为：（ ） .3 .4 .5 .6 26关于蛋白质中-折叠的叙述，下列哪项是正确的：（ ） .-折叠中氢键与肽链的长轴平行 .氢键只在不同肽链之间形成 .-折叠中多肽链几乎完全伸展 .-折叠又称-转角 27可使二硫键氧化断裂的试剂是：（ ） .尿素 .巯基乙醇 .溴化氰 .过甲酸 28典型的-螺旋是：（ ） .2.610 .3.613 .4.015 .4.

13、416 29下列哪一种说法对蛋白质结构的描述是错误的：（ ） .都有一级结构 .都有二级结构 .都有三级结构 .都有四级结构 30具有四级结构的蛋白质特征是：（ ） .分子中必定含有辅基 .含有两条或两条以上的多肽链 .每条多肽链都具有独立的生物学活性 .依赖肽键维系蛋白质分子的稳定 31关于蛋白质亚基的下列描述，哪条是正确的：（ ） .一条多肽链卷曲成螺旋结构 .两条以上多肽链卷曲成二级结构 .两条以上多肽链与辅基结合成蛋白质 .每个亚基都有各自的三级结构 32.的亚基与O2结合后产生变构效应，从而：（ ） .促进其它亚基与CO2结合 .促进其它亚基与O2结合 .促进亚基与O2结合，抑制亚基

14、与O2结合 .抑制亚基与O2结合，促进亚基与O2结合 33血红蛋白的氧合曲线形状为：（ ） .双曲线 .抛物线 .S-形曲线 .直线 34下列哪条对蛋白质变性的描述是正确的：（ ） .蛋白质变性后溶解度增加 .蛋白质变性后不易被蛋白酶水解 .蛋白质变性后理化性质不变 .蛋白质变性后丧失原有的生物活性 35加入哪种试剂不会导致蛋白质的变性：（ ） .尿素 .盐酸胍 .SDS .硫酸铵 36下列哪一项因素不影响蛋白质-螺旋的形成：（ ） .碱性氨基酸相近排列 .酸性氨基酸相近排列 .脯氨酸的存在 .丙氨酸的存在 37在凝胶过滤（分离范围是5000400000）中，下列哪种蛋白质最先被洗脱下来：（

15、） .细胞色素C（13370） .肌球蛋白（400000） .过氧化氢酶（247500） .血清清蛋白（68500） 四、是非题 1.分子病都是遗传病。 2.一个蛋白质样品，在某一条件下用电泳检查，显示一条带，因此说明，该样品是纯的。 3.蛋白质的SDS聚丙烯酰氨凝胶电泳和圆盘电泳是两种完全不同的技术。 4.等电点不是蛋白质的特征参数。 5.在蛋白质和多肽分子中，连接氨基酸残基的共价键除肽键外，还有就是二硫键。 6.蛋白质在小于等电点的pH溶液中，向阳极移动，而在大于等电点的pH溶液中，将向阴极移动。 7.电泳和等电聚焦都是根据蛋白质的电荷不同，即酸碱性质不同的两种分离蛋白质混合物的方法。 8

16、.天然存在的氨基酸就是天然氨基酸。 9.用纸电泳法分离氨基酸主要是根据氨基酸的极性不同。 10.在天然氨基酸中只限于-NH2能与亚硝酸反应，定量放出氮气。 11.由于静电作用，在等电点时氨基酸溶解度最小。 12.氨基酸在水溶液中或在晶体状态时都以两性离子形式存在。 13.两性离子氨基酸在溶液中，其正负离子的解离度与溶液pH无关。 14.氨基酸的等电点可以由其分子上解离基团的解离常数来确定。 15.溶液的pH可以影响氨基酸的pI值。 16.天然蛋白质-螺旋为右手螺旋。 17.多肽链能否形成-螺旋及螺旋是否稳定与其氨基酸组成和排列顺序直接有关。 18.具有四级结构的蛋白质，当它的每个亚基单独存在时

17、仍能保持蛋白质原有的生物活性。 19.渗透压法、超离心法、凝胶过滤法及聚丙烯酰胺凝胶电泳法都是利用蛋白质的物理化学性质来测定蛋白质分子量的。 20.蛋白质的变性是蛋白质分子立体结构被破坏，因此常涉及肽键的断裂。 21.当某一蛋白质分子的酸性氨基酸残基数目等于其碱性氨基酸残基数目时，此蛋白质的等电点为7.0。 22.一般说来，蛋白质在水溶液中，非极性氨基酸残基倾向于埋在分子的内部而不是表面。 23.蛋白质中一个氨基酸残基的改变，必定引起蛋白质结构的显著变化。 24.在每一种蛋白质多肽链中，氨基酸残基排列顺序都是一定的，而不是随机的。 25.蛋白质变性后溶解度降低，主要是因为电荷被中和及水膜被去除

18、所引起的。 26.蛋白质变性后，其分子量变小。 27.蛋白质的氨基酸顺序（一级结构）在很大程度上决定它的三维构象。 28.蛋白质的亚基（或称亚单位）和肽链是同义词。 29.氨基酸的等电点是算出来的，同样蛋白质的等电点也可以算出来。 30.所有蛋白质都具有一级、二级、三级、四级结构。 31.蛋白质构象是蛋白质分子中的原子绕单键旋转而产生的蛋白质分子中的各原子的空间排布。因此，构象并不是一种可以分离的单一立体结构形式。 32.蛋白质中的稀有氨基酸在遗传上是特殊的，因为它们没有三联体密码，所有已知稀有氨基酸都是从其前体经化学修饰产生的。 33.当氨基酸处于等电点状态时，由于静电引力的作用，氨基酸的溶

19、解度最小，容易发生沉淀。 34.一氨基一羧基氨基酸pI为中性，因为-COOH和-NH2解离度相同。 35.蛋白质分子酰胺平面中除-C=O外，其余的单键都能自由旋转。 36.用强酸强碱变性后的蛋白质不沉淀。 五、问答题 1.简述血红蛋白的结构?其结构与功能有什么关系？血红蛋白和氧的结合受那些因素的影响？ 2.有一个肽段，经酸水解测定，由四个氨基酸组成。用胰蛋白酶水解成为二个片段，其中一个片段在280纳米（nm）有强的光吸收，并且Pauly反应和坂口反应都是阳性。另一个片段用CNBr作用释放出一个氨基酸与茚三酮反应呈黄色，试写出这个肽的氨基酸组成及排列顺序。 3.有人纯化了一个未知肽，其氨基酸组成

20、为：Asp1，Ser1，Gly1，Ala1，Met1，Phe1和lys2，又做了一系列分析，结果如下： FDNB与之反应再酸水解后得DNP-Ala 胰凝乳蛋白酶（CT）消化后，从产物中分出一个纯四肽，其组成为：Asp1，Gly1，Lys1，Met1，此四肽的FDNB反应降解产物为DNP-Gly 胰蛋白酶（T）消化八肽后又可得到组成分别为Lys1，Ala1，Ser1及Phe1，Lys1，Gly1的两个三肽及一个二肽。此二肽被CNBr处理后游离出自由天冬氨酸。 请列出八肽全顺序并简示你推知的过程。 4.某天然九肽其组成为：Gly2，Phe2，Tyr1，Met1，Asp1，Arg1和Pro1，经胰凝

21、乳蛋白酶（CT）水解后可分得一个五肽和一个四肽，四肽的组成为：Phe1，Tyr1，Gly1和Pro1。此九肽的CNBr处理产物再经阳离子交换树脂层析并洗脱得一个组成为Arg1，Phe1和Gly1的三肽，此九肽如经胰蛋白酶（T）水解可得Phe，如用FDNB反应后再水解测得DNP-Tyr。请写出这九肽的全顺序解析过程。 5.已知一个九肽的氨基酸顺序是：Ala-Pro-lys-Arg-Val-Tyr-Glu-Pro-Gly，在实验室只有氨基酸分析仪，而没有氨基酸顺序测定仪的情况下，如何使用（1）羧肽酶A或B；（2）氨肽酶；（3）2，4二硝基氟苯（FDNB）；（4）胰蛋白酶；（5）胰凝乳蛋白酶，来验证

22、上述肽段的氨基酸顺序。 6.比较肌红蛋白和血红蛋白的氧合曲线，并加以简单的说明。 7.大肠杆菌含有2000种以上的蛋白质，为了分离它所表达的一个外源基因的产物并保持它的活性，常有很大困难。但为了某种目的，请根据下列要求写出具体的方法。 利用溶解度差别进行分离。 利用蛋白质分子大小进行分离。 根据不同电荷进行分离。 以制备有该产物的抗体进行分离。 产物的浓缩。 纯度的鉴定。 8.蛋白质变性过程中，有那些现象出现？并举出三种能引起蛋白质变性的试剂。 9.举一个例子来说明蛋白质三级结构决定于它的氨基酸顺序？ 10用什么试剂可将胰岛素链间的二硫键打开与还原？如果要打开牛胰岛素核酸酶链内的二硫键，则在反

23、应体系中还必须加入什么试剂？蛋白质变性时，为防止生成的-SH基重新被氧化，可加入什么试剂来保护？ 11.要测定蛋白质的二硫键位置，需用什么方法？请简述之。 12.简述White和Anfinsen进行的牛胰核糖核酸酶（Rnase）变性和复性的经典实验。这个实验说明了什么问题？ 13.有一条多肽链-ro-he-ys-ys-yr-al-la-er-is-，如用胰蛋白酶水解可得几条肽段？用胰凝乳蛋白酶水解呢？ 14.简述胰岛素原的激活过程？ 15.一个五肽，经完全水解后得到等摩尔数的Ala、Cys、Lys、Ser、Phe，用苯异硫氰酸（异硫氰酸苯酯）处理后得到PTH-Ser，用胰蛋白酶水解得一个N-末

24、端为Cys的三肽和一个二肽，用胰凝乳蛋白酶水解此三肽得一个Ala及一个二肽，问： 胰蛋白酶水解后得到的三肽的氨基酸组成及顺序？ 胰蛋白酶水解后得到的二肽的氨基酸组成？ 此五肽的一级结构？ 16.试计算丙氨酸（PK-COOH=2.34，PK-NH3=9.69），谷氨酸（PK-COOH=2.19，PK-NH3=9.67，PKR-COOH=4.25）的等电点。 17.把Ser、Ile、Glu、Ala的混合物在含有正丁醇、水和乙酸的溶剂系统中进行单向纸层析，请写出层析的快慢顺序。 18.某蛋白质多肽链有一些区段为-螺旋构象，另一些区段为-折叠构象，该蛋白质分子量为240Kda，多肽外形总长为5.061

25、0-5cm，计算多肽链中-螺旋构象占分子长度的百分之多少？ 19.球状蛋白质在pH7的水溶液中折叠成一定空间构象。这时通常非极性氨基酸残基侧链位于分子内部形成疏水核，极性氨基酸残基位于分子表面形成亲水面。问： Val、Pro、Phe、Asp、Lys、Ile和His中哪些氨基酸侧链位于分子内部？哪些氨基酸侧链位于分子外部？ Ser、Thr、Asn和Gln虽然是极性氨基酸，但它们常常位于球状蛋白质的分子内部，为什么？ 20.多肽链片段是在疏水环境中还是在亲水环境中更利于-螺旋的形成？为什么？ 第一章：蛋白质的结构与功能参考答案 一、名词解释 1.构象：在分子中由于共价单键的旋转所表现出的原子或基团

26、的不同空间排布叫构象。构象的改变不涉及共价健的断裂和重新组成，也没有光学活性的变化，构象形式有无数种。 2.构型：在立体异构体中原子或取代基团的空间排列关系叫构型。构型不同的分子在立体化学形式上能够区分。构型有两种，即D-型和L-型。构型的改变要有共价键的断裂和重新组成，从而导致光学活性的变化。 3.氨基酸的等电点：当溶液在某一特定的pH时，氨基酸主要以两性离子形式存在，净电荷为零，在电场中不发生移动，此溶液的pH值称为该氨基酸的等电点。 4.二面角：在多肽链里，C碳原子刚好位于互相连接的两个肽平面的交线上。C碳原子上的C-N和C-C都是单键。可以绕键轴旋转，其中以CN旋转的角度称为，而以C-

27、C旋转的角度称为，这就是-碳原子上的一对二面角。它决定了由-碳原子连接的两个肽单位的相对位置。 5.肽单位：肽链主链上的重复结构，如C-CO-NH-C，称为肽单位或肽单元，每个肽单位实际上就是一个肽平面。 6.蛋白质一级结构：由氨基酸在多肽链中的数目、类型和顺序所描述的多肽链的基本结构。它排除了除氨基酸-碳原子的的构型以外的原子空间排列，同样的也排除了二硫键，所以不等于分子的共价结构。 7.蛋白质二级结构：指多肽链主链在一级结构的基础上进一步的盘旋或折叠，从而形成有规律的构象，如-螺旋、-折叠、-转角、无规卷曲等，这些结构又称为主链构象的结构单元。维系二级结构的力是氢键。二级结构不涉及氨基酸残

28、基的侧链构象。 8.蛋白质三级结构：指一条多肽链在二级结构（超二级结构及结构域）的基础上，进一步的盘绕、折叠，从而产生特定的空间结构或者说三级结构是指多肽链中所有原子的空间排布。维系三级结构的的力有疏水作用力、氢键、范德华力、盐键（静电作用力）。另外二硫键在某些蛋白质中也起非常重要的作用。 9.蛋白质四级结构：有许多蛋白质是由两个或两个以上的具有独立三级结构的亚基通过一些非共价键结合成为多聚体，这些亚基的结构是可以相同的，也可以是不同的。四级结构指亚基的种类、数目及各个亚基在寡聚蛋白中的空间排布和亚基之间的相互作用。维系四级结构的力有疏水作用力、氢键、范德华力、盐键（静电作用力）。 10.超二

29、级结构：在球状蛋白质分子的一级结构顺序上，相邻的二级结构常常在三维折叠中相互靠近，彼此作用，在局部区域形成规则的二级结构的聚合体，就是超二级结构。常见的超二级结构有（）()()等三种组合形式，另外还有（）和（c）结构也可见到。在此基础上，多肽链可折叠成球状的三级结构。（c）结构中的c代表无规卷曲。 11.结构域：在较大的蛋白质分子里，多肽链的三维折叠常常形成两个或多个松散连接的近似球状的三维实体，这些实体就称为结构域，例如免疫球蛋白就含有12个结构域，重链上有四个结构域，氢链上有两个结构域。结构域是大球蛋白分子三级结构的折叠单位。 12.蛋白质的等电点：当溶液在某个pH时，蛋白质分子所带正电荷

30、数与负电荷数恰好相等，即净电荷为零，在直流电场中，既不向阳极移动，也不向阴极移动，此时溶液的pH就是该蛋白质的等电点。 13.盐溶：在蛋白质水溶液中，加入少量的中性盐，如硫酸铵等，会增加蛋白质分子表面的电荷，增强蛋白质分子与水分子的作用，从而使蛋白质在水溶液中的溶解度增大，这种现象称为盐溶。 14.蛋白质的变性作用:天然蛋白质分子受到某些物理、化学因素，如热、声、光、压、有机溶剂、酸、碱、脲、胍等的影响，生物活性丧失，溶解度下降，物理化学常数发生变化。这种过程称为蛋白质的变性作用，蛋白质变性作用的实质，就是蛋白质分子中次级键的破坏，而引起的天然构象被破坏，使有序的结构变成无序的分子形式。蛋白质

31、的变性作用只是三维构象的改变，而不涉及一级结构的改变。 15.蛋白质的复性:变性蛋白质在一定的条件下可以重建其天然构象，恢复其生物活性，这种现象称为蛋白质的复性。 16.盐析:高浓度的中性盐类，如硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等，可以脱去蛋白质分子的水膜，同时，中和蛋白质分子的电荷，从而使蛋白质从溶液中沉淀下来，这种现象称为盐析。 17.蛋白质的变构效应:在寡聚蛋白分子中，一个亚基，由于与配体的结合，而发生的构象变化，引起相邻其它亚基与配体结合的能力亦发生改变。这种效应称为蛋白质的变构效应。 18.沉降系数:一种蛋白质分子在单位离心力场里的沉降速度为恒定值，被称为沉降常数或沉降系数，常用S表示。 19

32、.电泳:在直流电场中，带正电荷的蛋白质分子向阴极移动，带负电荷的蛋白质分子向阳极移动，这种移动现象，称为电泳。 20.偶极离子:在同一个氨基酸分子上含有等量的正负两种电荷，由于正负电荷相互中和而呈电中性，这种形式称为偶极离子。 二、填空题 1. 2，4二硝基氟苯/FDNB、丹磺酰氯/DNS-Cl、异硫氰酸苯酯/PITC、氨肽酶、肼解、羧肽酶 2. 、 3.蛋白水解酶酶解、对角线电泳 4.色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、280 5.酸性、碱性、Asp、Glu、Arg、Lys、His 6. 16% 7.两性、负电 8.酸、碱、6.02、阳 9.二、不相同、均一亚基或一条肽链 10.化学合成、牛胰岛素 1

33、1.20、甘氨酸、氨基、羧基 12. 中心轴、N-H、C=O、肽平面上的H与O 13. Cys、Gly 14. 电荷、水化膜 15. 球状、纤维状 16.Lys、Arg 17.羟基、羧基、巯基 18.、 19.3.6、0.54nm、0.15nm 20协同、变构 21右 22肽键、二硫键、氢键、疏水作用力、离子键、范德华力 23Edman、PITC、PTC-aa、PTH-aa 24-螺旋、-折叠、-转角、无规则卷曲 25疏水作用力 26沉降速度法、凝胶过滤法、电泳法 27谷光甘肽、谷aa、半胱氨酸、甘氨酸、肽、巯基 28Sanger、Sanger、胰岛素、二、30、21、三、二硫 29二、氢键、

34、30、72 30（NH4）2SO4、NaCl、Na2SO4 三、选择题 1.A 2.B 3.C 4.C 5.C 6.B 7.D 8.A 9.A 10.B 11.C 12.B 13.C 14.B 15.A 16.D 17.D 18.D 19.B 20.C 21.D 22.A 23.D 24.A 25.D 26.C 27.D 28.B 29.D 30.B 31.D 32.B 33.C 34.D 35.D 36.D 37.B 四、是非题 1.错 2.错 3.对 4.对 5.对 6.错 7.对 8.错 9.错 10.对 11.对 12.对 13.错 14.对 15.错 16.对 17.对 18.错 1

35、9.对 20.错 21.错 22.对 23.错 24.对 25.错 26.错 27.对 28.错 29.对 30.错 31.对 32.对 33.对 34.错 35.错 36.错 五、问答题 1. 血红蛋白含有2个亚基和2个亚基，每个亚基均有一个血红素。每个血红素都可以和一个氧分子结合。但是4个亚基和氧分子的结合能力有所不同。每一个亚基和氧分子结合后，这个亚基发生构象改变，使得其他亚基和氧分子结合更容易，呈现亚基间的协同效应。除了亚基间的协同效应可影响亚基和氧的结合，氢离子和二氧化碳可以促进和血红蛋白结合的氧分子的释放，即所谓波尔效应。2，3-二羟基甘油磷酸和亚基结合后也可以抑制血红蛋白和氧的结

36、合。 2. 此肽段的序列为：酪氨酰-精氨酰-甲硫氨酰-脯氨酸。确定脯氨酸残基存在的依据是与茚三酮反映呈黄色。 3. 由结果可得知此肽的N端是Ala；由结果可知C端四肽的序列是Gly-Lys-Met-Asp；由结果可知N端的三肽序列为Ala-Ser-Lys，中间的肽段序列为Phe-Gly-Lys，二肽被CNBr处理后游离出自由天冬氨酸，这提示了这二肽的序列为Met-Asp，而且没有碱性残基，因此是整个肽链的C端二肽。完整的八肽序列为：Ala-Ser-Lys-Phe-Gly-Lys-Met-Asp。 T CT T Ala-Ser-Lys-Phe-Gly-Lys-Met-Asp DNP-Ala DN

37、P-Gly 4.该九肽序列为：Tyr-Pro-Gly-Phe-Asp-Met-Gly-Arg-Phe CT CNBr T Tyr-Pro-Gly-Phe-Asp-Met-Gly-Arg-Phe DNP-Tyr 通常Pro的存在有可能影响蛋白水解酶对附近肽键的作用，因此，更可能的序列是Pro-Gly而不是Gly-Pro。 5. 用两种羧肽酶和氨肽酶作用此九肽，都不能释放出氨基酸，证明了第2位和第八位的残基均为脯氨酸；用FDNB可以测得该肽的N末端为Ala，用胰蛋白酶作用可得到Ala，Pro，Lys组成的三肽，这表明了第三位的残基为Lys；同时得到一段五肽和游离的Arg，这提示了Arg是第四位的残

38、基。用胰凝乳蛋白酶作用后，可得到一段六肽和一段三肽，同时也确认了第六位残基是带芳香性侧链的Tyr。由六肽的氨基酸组成测得，确定其中含有Val，很自然的可认定这残基应是第五位的残基。用FDNB证明了酶解后所得三肽的N末端，即九肽的第七位残基，是Glu后，九肽的C末端也肯定是Gly。 6. 肌红蛋白和血红蛋白的氧合曲线的差别是：前者是双曲线形式，后者是S型曲线。原因是肌红蛋白是单个亚基的氧结合蛋白，不存在协同效应；而血红蛋白是含有4个亚基的氧结合蛋白，彼此间存在着协同效应。可参阅主要参考书（1）上册184-188页。 7. 首先要有一种或几种检测或鉴定外源基因表达产物的方法，然后，在每一次分离纯化

39、后检测表达产物存在哪一个级分中。用硫酸铵或酒精分级沉淀，可根据蛋白质的溶解度的差别进行分离。SDS-PAGE、凝胶过滤、超离心，以及超滤可对分子量不同的蛋白质进行分离。对带电行为不同的蛋白质可以用离子交换层析、等电聚焦、圆盘电泳、毛细管电泳等方法进行分离；但是在使用这一类型的方法时选择溶液的pH值至关重要，因为蛋白质的带电行为和溶液的pH值密切相关。如果具备表达产物的抗体，则可以使用亲和层析或免疫沉淀的方法简洁的分离所需的表达产物。使用吸附量较大的离子交换层析和亲和层析，以及对饱和硫酸铵或聚乙二醇反透析，还有冷冻干燥等方法都可以达到浓缩样品的目的，然而这些方法使用时，都存在着拖延或除去小分子化

40、合物的问题。相比而言，选用合适截流分子量的超滤膜，进行超过滤，往往能同时达到浓缩样品和去盐（包括小分子）的目的。在上述的（2）和（3）这两大类用于分离纯化产物的过程，实际上也有样品纯度鉴定的作用。此外，末端分析、质谱和反相的HPLC层析也都是有效的样品纯度鉴定的方法。但是应注意，样品的纯度是一个相对的概念。 8蛋白质的变性过程，通常总是伴随着有序的结构的破坏和生物活性的丧失。有序结构的破坏包括了亚基间的解离、二级和三级结构的改变，多数情况是肽链的松散，原来包埋在内部的残基（主要是疏水性残基）的暴露。活性丧失，除了和配体的结合能力丧失，还有抗原性的改变。 极端的pH、尿素和盐酸胍等破坏氢键的试剂

41、和不同类型的去垢剂都是能引起蛋白质变性的试剂 。 9蛋白质的一级结构决定蛋白质的高级结构这一原则目前基本上仍是正确的。但是是有条件的。例如同样一条肽链，在存在变性剂的条件下是松散的。现在所说的蛋白质的三级结构取决于它的氨基酸序列是指在生理条件下，蛋白质的一级结构和其三级结构之间的特定的对应关系。典型的例子是牛胰核糖核酸酶的二硫键被还原，肽链松散后，经适当的条件，致使肽链中的二硫键的正确配对，此时肽链仍能呈现具有生物活性的天然构象。当前有相当多的蛋白质工程的例子可以说明，肽链中某些残基的突变可以引起突变蛋白的构象改变。 10最常用的打开二硫键的方法是使用巯基试剂，例如巯基乙醇，可使参与二硫键的2个半胱氨酸还原为带有游离巯基的半胱氨酸。为了使还原反应能顺利进行，通常加入一些变性剂，如高浓度的尿素等。加入过量的还原剂可以防止还原所得的巯基被重新氧化。如果不准备使肽链重氧化，而是进一步进行结构化学结构的研究，可以将巯基转化为其他的修饰形式，例如和羧甲基化等烷化剂反应。除了已介绍的还原羧甲基化，还有过甲酸氧化法和亚硫酸还原法。 11测定蛋