生物技术概论.doc

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1、【精品文档】如有侵权，请联系网站删除，仅供学习与交流生物技术概论.精品文档.发酵工程：利用微生物生长速度快，生长条件简单以及代谢过程特殊等特点，在合适条件下，通过现代化工程技术手段，由微生物的某种特定功能产生出人类所需的产品称为发酵工程，也称微生物工程。2基因组文库：把某种生物基因组的全部遗传信息通过克隆载体贮存在一种受体菌克隆子群体之中，这个群体即为这种生物的基因文库。3星号活性：某些酶在非理想反应条件下，可能导致酶的识别序列发生特异性改变，即酶切序列与识别序列相似，但不完全相同，导致切割中出现非特异性DNA片段。（防止措施：应尽量用少的酶，避免甘油含量过高，控制PH值中性或高盐）4多克隆位

2、点：指人工构建的紧密排列在一起、具有单一多种限制酶识别序列的一段DNA序列。可方便用于外源DNA片段的插入。5分子杂交：使单链DNA或 RNA分子与具有互补碱基的另一DNA或RNA 片断结合成双链的技术。6植物组织培养：是在无菌和人为控制外因的条件下，培养、研究植物组织器官，甚至进而从中分化发育出整体植株的技术。7.单倍体：具有配子体染色体数的孢子体。8连续发酵：是指以一定的速度向发酵罐内添加新鲜培养基，同时以相同的速度流出培养液，从而使发酵罐内的液量维持恒定，微生物在稳定状态下生长。9酶分子修饰：是指通过对酶蛋白主链的剪接切割和侧链的化学修饰对酶分子进行改造。10蛋白质组学：基因组编码的所有

3、蛋白质，它是研究细胞内所有蛋白质及其动态变化规律的科学。是从更深一层次蛋白质组水平上揭示生命活动的本质及其规律。11蛋白质工程：是指在基因工程的基础上，结合蛋白质结晶学、计算机辅助设计和蛋白质化学等多学科的基础知识，通过对基因的人工定向改造等手段，从而达到对蛋白质进行修饰、改造、拼接以产生能满足人类需要的新型蛋白质的技术。12DNA连接酶：是指能催化双链DNA片段紧靠在一起的3-OH末端与5-P末端之间形成磷酸二酯键，使两末端连接的酶。13内含子：真核生物的编码区含有一个或几十个 长度各异的非编码间隔序列区。14质粒不亲和性：是指在没有选择压力的情况下，两种亲缘关系密切的不同质粒，不能够在同一

4、个寄主细胞系地稳定共存的现象。15穿梭质粒载体：穿梭质粒是指可以在多种宿主下复制。16细胞固定化：将细胞包埋在惰性支持物的内部或贴附在它的表面。17人工种子：即人为制造的种子，它是一种含有植物胚状体或芽、营养成分、激素以及其他成分的人工胶囊。18初级代谢产物：在菌体对数生长期所产生的菌体生长繁殖所必需的产物。（如氨基酸、核苷酸、蛋白质、核酸、糖类）19酶反应器：以酶为催化剂进行反应所需要的设备称为酶反应器。20反义技术：是通过碱基互补原理，干扰基因的解旋、复制、转录、mRNA的剪接加工乃至输出和翻译等各个环节，从而调节细胞的生长、分化等。21、终止子：在基因编码区下游有一段使转录终止的核苷酸序

5、列，称为终止子。22、次级代谢产物：在菌体生长静止期，某些菌体合成的一些具有特定功能且与菌体生长繁殖无明显关系的产物。（如：抗生素、生物碱、细菌毒素、植物生长因子）23、回文结构：双链DNA中含有的二个结构相同、方向相反的序列称为反向重复序列，也称为回文结构。（每条单链以任一方向阅读时都与另一条链的序列是一致的，例如5GGTACC3 3CCATGG5.）11基因工程诞生的三大理论基础：DNA为遗传物质、中心法则、双螺旋结构和半保留复制12、茎尖脱毒的原理及其依据：病毒在体内分布不均匀，分生组织病毒含量低，可采用小茎尖离体培养，完成脱毒。病毒DNA分子与细胞分裂蛋白质合成形成竞争，在迅速合成的植

6、物细胞中，正常合成的蛋白质占优势。13、基因工程的三大技术：DNA 的切割技术、DNA 的重组技术、DNA 基因表达载体的发现。14、限制性内切酶的酶切方法：单酶切法、双酶切法、部分酶切法。15、DNA重组类型：插入重组-单酶切位点。置换重组-至少有2个酶切位点16、组成型表达（在特殊的基因序列调控下，基因在任何组织都进行表达的形式）17、诱导型表达（表达载体的启动子采用诱导型启动子，只有在诱导剂存在的条件下才能表达目的产物）18、基因文库与CDNA文库的不同：基因组文库大于CDNA文库CDNA文库是通过mRNA反转录而来，在转录过程中部分基因不被转录CDNA无内含子19、基因克隆载体应具备的

7、条件：有合适的供外源基因插入的位点必须携带有自身的复制子有选择性标记的基因对环境是安全的。20、发酵工艺中控制的参数：温度、ph、溶氧度（直接参数），细胞生长速率、产物合成速率（间接参数）。21、单倍体在育种上的意义：可获得纯合材料，缩短育种周期可获得育种中间材料突变体选育与体细胞融合，提高应用价值获得异附加系和代换系遗传的工程受体理想材料，提高遗传的转化效率。22、花药培养的基本程序：外植体的选择-预处理-消毒-剥取花药-接种-诱导生长-分化23、原生质体的制备过程：取材和除菌、酶解、分离、洗涤、鉴定24、植物组织培养阶段及各阶段的目的：预备阶段，目的：a 选择合适的外植体b除菌c配制培养基

8、。诱导去分化阶段，目的：使细胞回到有丝分裂旺盛活动的状态继代增殖阶段，目的：a 防有害代谢物毒害b愈伤组织细胞数大大扩增，有利于下一阶段收获更多胚状体或小苗生根发芽阶段，目的：愈伤组织只有经过重新分化才能形成胚状体移栽成活阶段，目的：利于其生长25、炼苗的原因：生长于人工照明玻璃瓶中的小苗十分幼嫩，应在能保证适度的光、温、湿条件下的人工气候室中锻炼一段时间，能大大提高幼苗的成活率。1现代生物技术以20世纪70年代 基因工程技术的建立为标志。2常用的酶切方法有单酶切、双酶切和 部分酶切 等几种。3由RNA反转录合成的DNA称为 cDNA 。4. DNA重组类型有 插入重组 和 置换重组。5.通过

9、生物学、物理学和化学等方法使外源裸露DNA进入受体细胞，并在受体细胞内稳定维持和表达的过程称为 转化 。6组织培养中能被诱发产生无性增殖系的器官或组织切段称为 外植体 。7褐藻酸钠 是目前最好的人工种子包埋剂。8进行微生物深层培养的设备统称为 发酵罐。9微生物发酵过程中常用于控制发酵液pH的生理酸性物质是 (NH4)2SO4 。生理碱性物质是氨水。1基因表达载体的组成除了有目的基因外，还必须有启动子、标记基因和 终止子 2DNA的转录应包含转录启动子和 转录取。3在植物组织培养过程的移栽成活阶段，通过 炼苗 能大大提高幼苗的成活率。4固定化酶的活力下降到为初始活力一半所经历的时间称为 固定化酶

10、的半衰期（t1/2）。6发酵生产中， 发酵液的预处理 和 固液分离 是下游加工的第一步操作。7对于好氧微生物，发酵罐通常采用 和 来增加氧的溶解，以满足其代谢需要。8酶的固定化方法有 载体结合法 、交联法 和 包埋法 。单项选择题1能克服远缘杂交不亲和性技术是： （ D ）A. 组织培养 B. 单倍体育种 C. 动物胚胎移植 D. 细胞融合2识别基因序列不同，但酶切后产生的粘性末端相同的一类酶为： （ B ）A. 同工酶 B. 同尾酶 C. 同裂酶 D. 同位酶3除下列哪一项外，转基因工程的运载体必须具备的条件是： （ D ）A. 能在宿主细胞中复制并保存 B. 具有多个限制酶切点，以便与外源

11、基因连接C. 具有标记基因，便于进行筛选 D. 是环状形态的DNA分子4下列关于染色体和质粒的叙述，正确的是： （ C ）A. 染色体只存在于真核生物细胞中，质粒只存在于原核生物细胞中 B. 在基因工程中染色体和质粒均可以作为运载体 C. 染色体和质粒均与生物的遗传有关 D. 染色体和质粒的化学本质相同 5酶切反应中必须的阳离子是： （ ）A. Na2+ B. Ca2+ C. Mg2+ D. Zn2+ 6限制酶的星号活性是指在非正常条件下，限制酶： （ ）A. 识别和切割序列发生变化 B. 切割活性大大提高C. 识别和切割序列与原来完全不同 D. 可以任意切割DNA7在基因操作中所用的限制性核

12、酸内切酶是指 （ B ）A. I类限制酶 B. II类限制酶 C. III类限制酶 D. RNAase8美国农业部指导农民在种植转基因农作物时，要求农民在转基因农作物的行间种植一些普通的非转基因农作物，供害虫取食，这种做法的主要目的是： （ C ）A. 保护物种多样性 B. 保护害虫的天敌 C. 减缓害虫抗性基因频率增加的速率 D. 维持农田生态系统中的能量流动9下列那种微生物在微碱性的环境中生长良好： （ B ）A. 细菌（6.3-7.5） B. 放线菌（7-8） C. 酵母菌 （3-6） D. 霉菌（3-6）10下列反映发酵过程变化的参数那项属于间接参数： （ A ）A. 呼吸熵 B. 离

13、子浓度 C. PH D. 泡沫 正误判断题1鉴定外源基因受体细胞中是否转录的较可靠方法是Western blot法。 （ ）2通过生物学、物理学和化学等方法使外源裸露DNA进入受体细胞，并在受体细胞内稳定维持和表达的过程称为转染。 （ ）3同裂酶可以具有不同的酶切位点，也可以具有相同的酶切位点。 （ ）4迄今发现的质粒都是环状的。 （ ）5PCR引物一般由2030个核苷酸组成。 （ ）6花药培养再生植株都是单倍体。 （ ）7一个生物体的蛋白质组未必与基因组存在一一对应关系。 （ ）8DNA重组有插入重组和置换重组两种。 （ ）9琼脂是目前最好的人工种子包埋剂。 （ ）10微生物转化是利用微生物

14、细胞的一种或多种酶，把一种化合物转变成结构相关的更有经济价值的产物。 （ ）1几乎所有真核生物的染色体DNA都是线性DNA。 （ ）2PCR扩增全过程中需在每次高温变性后添加耐热性DNA聚合酶 （ ）3细胞培养中，细胞分化和次生代谢积累之间存在正相关。 （ ）4真核基因的重要表达调控元件有启动子、增强子、沉默子和修饰序列。 （ ）5微生物酶的发酵生产中，培养基中高浓度的无机盐有利于酶产量的提高。 （ ）6用乳糖基因插入失活法，筛选出白色噬菌斑为重组子。 （ ）7E.coliDNA连接酶既可用于双链DNA片段互补粘性末端之间的连接，也能催化双链DNA平末端之间的连接。 （ ）8一个生物体的蛋白质

15、组与基因组存在一一对应关系。 （ ）9基因组文库大于cDNA文库。 （ ）10酵母菌和霉菌都喜欢生长在偏碱性的环境中。 （ ）1采用下列那种酶能阻止线性的质粒DNA分子再环化： （B ）A.DNA连接酶 B. 碱性磷酸酯酶 C. DNA聚合酶 D. 限制性内切核酸酶2基因工程操作的三大基本元件是（I供体 II抗体III 载体 IV配体V受体）： （ A ）A. I+III+V B. I+III+IV C. II+III+IV D. II+ IV+V3大多数限制性内切核酸酶的适反应佳温度是： （ A ）A. 37 B. 30 C. 25 D. 164下列DNA片段中含有回文结构的是： （ ）A.

16、GAAACTGCTTTGAG B. GAAACTGCAGAAAG C.GAAACTGCAGTTTC D. GAAACTGGAAACTG5下列那种基因克隆载体对外源DNA的承载量最大： （ D ）A. 质粒 B. 粘粒 C. 噬菌体 D. 酵母人工染色体 6鉴定外源基因受体细胞中是否转录的较可靠方法是： （ C ）A. Southern blot法 B. PCR法C. Northern blot法 D. Western blot法7制备植物细胞原生质体最常用的方法是 （ B ）A. 超声波处理 B. 酶解 C. 研磨 D. 冷冻8下列不能作为植物组织培养的材料是： （ D ）A. 秋海棠的叶 B

17、. 马铃薯的块茎 C.成熟的花粉 D.木质部中的导管组织9. 植物组织培养的过程中，常用消毒剂处理外植A体，下列消毒剂中灭菌效果最好的是： （ ）A.升汞 B. 漂白粉 C. 过氧化氢 D. 酒精10从细胞全能性的角度看，下列叙述正确的是 （ C ）A. 分化程度高，具有较高的全能性 B. 分化程度低，具有较低的全能性 C. 分化程度低，具有较高的全能型 D. 分化程度高低与全能性无关 多项选择题1 微生物酶的发酵生产中，为提高酶产量可采取下列那些措施 （ ACD ）+表面活性剂A. 添加诱导物 B. 降低温度 C. 控制阻遏物浓度 D. 添加产酶促进剂 E. 加大通气量 2检测植物是否带病毒

18、的途径有以下哪几种： （ BCD ）A. 化学方法 B. 外形观察法 C. 电镜观察法 D. 免疫血清法 E. 物理学方法 3导致部分酶切的原因有那些： （ ABCDE ）A. DNA纯度低 B. 识别序列的甲基化 C. 酶用量不足 D. 反应时间不够 E. 温度不适宜4常用的有机氮源有那些： （ BD ）A. 氯化铵 B. 蛋白胨 C. 氨水 D. 酵母粉 E. 硫酸铵5制备人工种子时，可采用以下那些措施促进胚状体的同步生长： （ BCDE ）A. 高温法 B. 抑制剂法 C. 通气法 D. 分离法 E. 渗透压法1发酵过程中，需要对有关工艺参数进行测定，下列选项哪几种属于直接参数（ AD

19、）A. 温度 B. 细胞生长速率 C. 产物合成速率 D. 溶解氧 E.呼吸熵2植物原生质体鉴定包括以下那几种方法： （ ABE ）A. 渗透压变化法 B. 染色法 C. 低速离心法 D. 比重漂浮法 E. 胞质环流法3下列属于报告基因的是： （ BCD ）A. LacZ B. gus C. luc D. gfp E. bar4下列有关质粒分子生物学的述述正确的是： （ ABC ）A. 质粒是一种染色体外的稳定遗传因子 B. 质粒有复制起始位点，能进行自我复制 C.质粒并非其宿主细胞生长所必需 D. 质粒在宿主细胞内可无限制复制E. 质粒在细胞内的复制有紧密型和松弛型两种类型5植物脱毒的基本原

20、理，包括以下哪几种假说： （ ABCDE ）A. 能量竞争 B. 传导抑制 C. 激素抑制 D. 酶缺乏 E. 抑制因子1、基因工程：按照人们的愿望，进行严密的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，有目的地改造生物种性，使现有的物种在较短的时间内趋于完善，创造出符合我人们意愿的产品。2、DNA变性：当溶解在溶液中的双链DNA处于较高温度时，氢键断开而解链成单链DNA，此过程称为DNA变性。3、启动子：是RNA 聚合酶识别和结合的位点，其序列具有相对的保守性。4、同裂酶：有一些限制性内切核酸酶虽然来源不同，但是具有相同的识别序列，这样的限制性内切核酸酶称为同裂酶。5、同尾酶：有些限制性内切核酸酶

21、虽然识别的序列不同，但是酶切DNA分子产生的DNA片段具有相同的粘性末端，这样的限制性内切核酸酶称为同尾酶。6、基因克隆载体：能够承载外源基因，并将其带入受体细胞得以稳定维持的DNA分子。7、质粒：是一种寓于宿主细胞中染色体外的裸露DNA分子。一个质粒就是一个DNA分子。8、多克隆位点：是指人工构建的，紧密排列在一起，具有单一多种限制酶识别序列的一段DNA序列，可方便地用于外源DNA片段的插入。9、T-DNA：Ti质粒是一种双链环状DNA 分子，其大小约200kb，但是能进入植物细胞的只是一小部分，约25kb，称为T-DNA。19、原生质体：是指那些已去除全部细胞壁的细胞。细胞外仅由细胞膜包裹

22、，呈圆形，要在高渗溶液中才能维持细胞的相对稳定。10、人工染色体：只能在宿主细胞中稳定地复制，并准确地传递给子细胞的人工构建的染色体。分为线性人工染色体（含有端粒、着丝粒、复制起始区）和环形人工染色体（含有复制起始区）。具有能容纳1000kb以上的外源DNA片段的特点。可由于构建基因组文库、克隆和转移完整的高分子基因、基因功能鉴定、基因治疗等。11、基因组文库：把某种生物基因组的全部遗传信息通过克隆载体贮存在一个受体菌克隆子群体中，这个群体即为基因组文库。12、cDNA文库：某种生物基因组转录的全部mRNA经反转录产生的各种cDNA片段分别于克隆载体重组，贮存在一种受体菌克隆子群体中，这样的群

23、体称为cDNA文库。13、转化：通过生物学、物理学和化学的方法使外源裸露的DNA进入受体细胞，并在受体细胞内稳定维持和表达的过程称为转化。14、转染：如果以病毒（噬菌体）为克隆载体，那么此过程就称为转染。15、克隆子：通常将摄取外源DNA分子并在其中稳定维持的受体细胞称为客隆子。把采用转化方法获得的克隆子叫做转化子。16、分子杂交：来源不同的DNA或RNA，若他们的碱基组成有同源性，通过变性、复性就可形成一种双链的杂合分子，此过程叫做分子杂交。17、细胞工程：应用细胞生物学和分子生物学的方法，借助工程学的试验方法或技术，在细胞水平上研究改造生物遗传特性和生物学特性，以获得特定的细胞、细胞产品或

24、新生物体的有关理论和技术方法的科学。18、植物组织培养：是在无菌和人为控制外因（营养成分、光、温、湿）的条件下，培养和研究植物组织、器官，甚至进而从中分化、发育出整体植株的技术。20、单倍体：指细胞中仅含一组染色体的个体。21、花药培养：其外植体是植物雄性生殖器官的一部分，就培养方法和技术来讲，属器官培养。22、花粉培养：将处于一定发育阶段的花粉从花药中分离出来，再加以离体培养，有时花粉培养也称小孢子培养。23、发酵工程：是一门将微生物学、生物化学和化学工程学的基本原理有机地结合起来，利用微生物的生长和代谢活动来生产各种有用物质的工程技术。24、前体：是指被菌体直接用于产物合成而自身结构无显著

25、改变的物质。如合成青霉素G的苯乙酸、合成红霉素的丙酸等。25、种子扩大培养：将保存在砂土管、冷冻干燥管或冰箱中处于休眠状态的生产菌种接入试管斜面培养基上活化后，在经过茄子瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养，获得一定数量和质量的纯种，这个全过程称为种子扩大培养，这些纯种培养物称为种子。26、分批发酵：营养物和菌种一次加入进行培养，直到结束放罐，中间除了空气进入和尾气排出，与外部没有物料交换。27、连续发酵：是指以一定的速度向发酵罐内添加新鲜培养基，同时以相同的速度流出培养液，从而使发酵罐内的液量维持恒定，微生物在稳定状态下生长。28、补料分批发酵：是指在微生物分批发酵中，以某种方式向培养系统补加一定物

26、料的培养技术。通过向培养系统中补充物料，可以使培养液中的营养物浓度较长时间地保持在一定范围内，既保证微生物的生长需要，又不造成不利影响，从而达到提高产率的目的。29、酶工程：是利用酶、细胞器或细胞所具有的特异催化功能，或通过对酶进行修饰改造，并借助生物反应器和工艺过程来生产人类所需产品的一项技术。它包括酶的固定化技术、细胞的固定化技术、酶的修饰改造技术及酶反应器的设计等技术。30、杂交酶：是指利用基因工程将来自两种或两种以上的酶的不同结构片段构建成的新酶。31、相对酶活力：具有相同酶蛋白量的固定化酶与游离酶活力的比值。它与载体结构、颗粒大小、底物分子质量大小、酶的结合率有关。相对酶活力低于75

27、%的固定化酶一般没有实际应用价值。32、酶的活力回收率：固定化酶的总活力与用于固定化前的酶的总活力的比值。一把情况下活力回收率小于1；若大于1，可能是由于固定化细胞增殖或某些抑制因素排除的结果。33、固定化酶的半衰期：即固定化酶的活力下降到初始活力一半所经历的时间。它是衡量固定化酶操作稳定性的关键。34、生物传感器：是用生物活性物质做敏感元件，配以适当的换能器所构成的分析工具或分析系统。常见得有五大类：酶传感器、组织传感器、微生物传感器、免疫传感器、场效应晶体传感器。35、酶反应器：以酶为催化剂进行反应所需要的设备。36、蛋白质工程：是指在基因工程的基础上，结合蛋白质结晶学、计算机辅助设计和蛋

28、白质化学等多学科的基础知识，通过对基因的人工定向改造等手段，对蛋白质进行修饰、改造和拼接以产生能满足人类需要的新型蛋白质的技术。37、生物育种：是指以基因工程技术为核心，利用转基因、分子标记辅助育种、分子设计、细胞工程育种等现代生物技术，与常规育种技术相结合，培育高产、优质、多抗、高效的农业的育种措施。38、花粉培养（属细胞培养）、花药培养（属器官培养）一、基因工程研究的理论依据1、不同基因具有相同的物质基础。2、基因是可以切割的。3、基因是可以转移的。4、多肽与基因之间存在对应关系。5、遗传密码是通用的。6、基因可以通过复制把遗传信息传递给下一代。二、基因工程的主要操作步骤：基因工程操作流程

29、主要包括目的基因分离、多克隆载体重组、转入受体细胞、筛选和鉴定克隆子。三、生物体内DNA分子存在的主要形式：生物体内DNA分子有的以线性存在，有的以环状存在。几乎所有真核生物的染色体DNA都是线性DNA ,小部分原核生物的染色体DNA也是以线性存在的。而大部分原核生物的染色体DNA和全部线粒体DNA、叶绿体DNA以及细菌的质粒DNA全是环状DNA分子。环状DNA分子一般以共价超螺旋形式存在。四、获得目的DNA片段的主要途径1、限制性内切核酸酶酶切法。（限制性内切核酸酶有）2、PCR扩增法。3、DNA片段的化学合成。五、 PCR的基本原理PCR反应是模仿细胞内发生的DNA复制过程进行的，以DNA

30、互补链聚合反应为基础，通过靶DNA变性、引物与模板DNA一侧的互补序列复性杂交、耐热性DNA聚合酶催化引物延伸等过程的多次循环，产生待扩增的特异性DNA片段。九、常见质粒载体大肠杆菌质粒载体、蓝藻和大肠杆菌穿梭质粒载体、农杆菌Ti质粒载体、酵母菌2um质粒载体。十、分离目的基因的途径1、利用限制性内切核酸酶酶切法直接分离目的基因。2、利用PCR直接扩增目的基因。3、目的基因的化学合成。4、通过构建基因组文库或cDNA文库分离目的基因。六、寡核苷酸连杆：也称为衔接物或街头，是一种按预先设计，化学合成的寡核苷酸片段。一般由8-12个核苷酸组成，以中线为轴两侧互补对称，其上有一种或几种限制性内切核酸

31、酶的识别序列，使连接了寡核苷酸连杆的DNA片段经过这些限制性内切核酸酶酶切后，可以产生一定的粘性末端，便于与具有相同粘性末端的另一DNA片段连接。有的寡核苷酸连杆超过100个核苷酸，其上有多种限制性内切核酸酶识别序列，不仅可以作为连杆，而且被组装在克隆载体上成为多克隆位点，这样的连杆被称为多克隆位点寡核苷酸连杆。如果连杆的两端已具有一种或两种限制性内切核酸酶酶切产生的粘性末端，可直接使两DNA片段连接，也称为衔接头。七、基因克隆载体应具备的条件1、在克隆载体合适的位置必须含有允许外源DNA分子片段组入的克隆位点，并且这样的克隆位点尽可能地多，即要有克隆位点。2、克隆载体一般能携带外源DNA片段

32、（基因）进入受体细胞，或停留在细胞质中进行复制，即要有复制子。3、克隆载体必须含有供选择转化子的标记基因。既具有选择性标记基因。4、克隆载体必须是安全的。十一、受体细胞应具备的条件1、便于重组DNA分子的导入和筛选克隆子。2、重组DNA分子在受体细胞内能稳定维持。3、适于外源基因的高效表达。4、遗传性稳定。5、易于扩大培养或发酵生长。6、安全性高，不对外界环境造成生物污染。十二、重组DNA分子导入受体细胞的方法1、外源DNA转化的方法（化合物诱导转化法：用二价阳离子mg2+、Ca2+、Mn2+等处理某些受体细胞，可以使其成为感受态细胞，即处于能摄取外源DNA分子的生理状态的细胞；根癌农杆菌介导

33、的Ti质粒载体转化法等）2、病毒（噬菌体）颗粒转导法十四、鉴定重组子的方法1、根据重组DNA分子特征鉴定重组子。（包括根据重组DNA分子大小鉴定重组子、根据重组DNA分子限制性内切核酸酶酶切图谱鉴定重组子、根据PCR扩增片段鉴定重组子、采用DNA分子杂交法鉴定重组子、应用DNA芯片鉴定重组子）。其中杂交方法有southern印迹杂交、斑点印迹杂交、菌落（或噬菌斑）原位杂交等。用southern印迹杂交法不仅可以鉴定重组子中含有重组DNA分子，而且还可以知道待检测的DNA分子（DNA片段）的大小以及待检测的DNA片段在重组DNA分子中的位置。2、根据目的基因转录产物mRNA鉴定重组子。利用nor

34、thern杂交技术可以检测外源基因是否转露出mRNA。3、根据目的基因翻译产物蛋白质（酶）、多肽鉴定重组子。（包括蛋白质凝胶电泳法鉴定重组子、免疫检测法鉴定重组子、质谱分析法）。Western印迹法是将蛋白质电泳、印迹和免疫测定结合在一起的检测方法。转化子菌落中提取总蛋白质，通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分带，印迹转移到固相酶上，然后用针对目的蛋白的抗体（一抗）和能与其结合带有特定标记的二抗进行反应，并显色检测，若呈现阳性反应，表明被检测的转化子是重组子。十五、植物组织培养的阶段1、预备阶段（包括选择合适的外植体；除去病原菌及杂菌；配制适宜的培养基）。2、诱导去分化阶段。3、继代增值阶段。4、

35、生根发芽阶段。5、移栽成活阶段。十六、植物细胞培养的方法工业化植物细胞培养系统主要有两大类：悬浮细胞培养系统和固定化细胞培养系统。前者适于大量快速地增殖细胞，但往往不利于次生代谢物的积累；后者则相反，细胞生长缓慢，但次生代谢物含量相对较高。悬浮培养系统、固定化细胞培养系统（平床培养系统；立柱培养系统）。十七、原生质体融合时的“三高”高浓度的钙离子、高PH值、高聚乙二醇。十八、单倍体植株的特点及单倍体植株的获得1、特点：单倍体植株较二倍体植株叶小、株矮、生活力弱且高度不育，然而它们种质纯，不受显性等位基因的掩盖与遮蔽效应影响，人们易于从中挑选出具有可用性状的隐形突变体。而且，由单倍体诱导产生的二

36、倍体的所有基因是纯合的，即所谓的纯系，其后代不会产生分离，因而遗传性是稳定的，所以有十分显著的经济效应。2、单倍体植株的获得：孤雌繁殖途径、孤雄繁殖途径、无融合生殖。十九、人工种子的组成人工种子即为人为制造的种子，它是一种含有植物胚状体或芽、营养成分、激素以及其他成分的人工胶囊。它由人工种皮、人工胚乳、胚状体三部分组成。二十、植物脱病毒的原理及途径1、物理学方法（依据病毒对高温的敏感，寄主耐高温）。2、化学方法（通常病毒唑在培养基内浓度为5mg/L，脱毒率可达80%）。3、生物学方法（茎尖剥离培养，病毒在植物体内分布不均匀，越靠近茎顶端的区域病毒感染的程度越低，生长点及风分生组织几乎不含或含病

37、毒很少），这是植物脱病毒的主要方法。4、综合脱毒法。二十一、发酵类型微生物菌体发酵、微生物酶发酵、微生物代谢产物发酵、微生物的转化发酵、生物工程细胞的发酵。二十三、培养基的种类及组成1、种类：孢子培养基、种子培养基、发酵培养基。2、组成：碳源、氮源、无机盐和微量元素、生长因子、产物形成的诱导物、前体和促进剂。22、发酵工业中常用的微生物及其环境条件1、细菌（枯草芽孢杆菌、乳酸杆菌、醋酸杆菌、棒状杆菌、短杆菌），耐高温环境。2、放线菌（在含有有机质丰富的微碱性土壤中较多，大多腐生，少数寄生）。发酵工业中常用的放线菌主要来自以下几个属：链霉菌属、小单孢菌属、诺卡氏菌属等。3、酵母菌（主要分布在含糖

38、质较多的偏酸性环境中），大多数为腐生，发酵工业上常用的酵母菌有：酿酒酵母、假丝酵母、类酵母等。4、霉菌（喜欢偏酸性环境，大多数为好氧型，多腐生，少数寄生）。二十四、发酵的一般过程1、菌种制备（包括菌种的分离、纯化、选育、改造）；2、种子扩大培养（概念见名词解释）；3、发酵（在无菌条件下对微生物进行无菌培养，本阶段微生物合成大量产物，是整个发酵工程的中心环节）；4、下游处理（通过离心沉降的物理方法或层析的化学方法得到纯产品）。二十五、发酵方式1、分批发酵（优点：除了控制温度和PH及通气以外，不进行任何其他控制，操作简单；缺点：从细胞所处的环境来看，则有明显改变，发酵初期营养物过多，可能抑制微生物

39、的生长，而发酵的中后期又可能因为营养物质减少而降低培养效率，从细胞增殖来看，初期细胞浓度低，增长慢，后期细胞浓度高，但营养物浓度过低也生长不快，总的生产能力不是很高）。2、连续发酵（概念见名词解释）。3、补料分批发酵（两种类型：单一分批补料发酵和反复补料分批发酵）。二十八、发酵结束时确定放罐的指标确定放罐的指标有：产物的产量、过滤速度。氨基氮的含量、菌丝形态、值。发酵液的外观和粘度等。发酵终点的确定，需要综合考虑这些因素。26、发酵工艺的控制中所涉及的两类参数1、直接参数：可以直接采用特定的传感器检测的参数，包括反映物理和化学环境变化的参数，如温度、压力、搅拌功率、转速、泡沫、发酵液黏度、浊度、ph、离子浓度、溶解氧和基质浓度等。2、间接参数：不能用传感器来检测，包括细胞生长速率、产物合成速率和呼吸熵等。这些参数需要在一定直接参数的基础上，借助于电脑计算和特定的数学模型才能得到。二十七、增加溶解