食用菌栽培技术综合性实验.doc

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1、【精品文档】如有侵权，请联系网站删除，仅供学习与交流食用菌栽培技术综合性实验.精品文档.植物生产国家级实验教学示范中心食用菌栽培技术综合性实验实验项目一览表序号实验名称建议学时数每组人数必选/可选1原种、栽培种的培育2学时4人必选2菌种保藏及复壮2学时4人必选3平菇袋栽4学时4人必选实验一、原种、栽培种的培育一、 实验教学目的能制作适宜培养料，独立完成接种前的准备工作，用无菌操作法准确进行原种、栽培种的接种。并通过培养观察，分析自己的接种结果。二、实验基本原理母种、原种、栽培种都是具有统一血缘关系的祖孙三代，品性相同，只是越来越多，越来越健壮。菌种生产就是从母种开始，到栽培种为止。原种和栽培种

2、的培育方法基本相同，只是在接种时接的菌种级别不一样。两菌种培养基的配方可以相同，也可有所区别，由于栽培种经过了母种及原种两次的驯化，其培养基可比原种培养基更粗放些。三、所涉及的课程及知识点在该实验中，涉及到了农学类和生物学类专业教学计划中设置的部分专业基础课、专业课，如微生物学（菌丝降解纤维素等，）、仪器分析()， 四、仪器设备及实验材料1. 器具：菌种瓶、棉塞、打孔棒、菌种袋、接种耙、大镊子、酒精灯、火柴、酒精棉球、标签、高压灭菌锅、接种箱、消毒药品等。2材料：棉籽壳、麸皮、蔗糖、石灰粉、过磷酸钙、母种、原种等。五、实验内容与方法（一）实验内容1、培养料的配制2、菌种瓶及菌种袋的分装3、原种

3、的接种4、栽培种的接种（二）方法步骤两菌种的生产过程基本相同，主要区别在于接种时取接的菌种不一样。1.培养基的配制（1）配方与配制颗粒培养基（麦粒、玉米粒等）配方：粮食粒98.5%，石膏粉1%，碳酸钙0.5%。配制：将洗净的粮食粒洗净，用1%石灰水泡胀，文火煮沸1520min(熟而不烂，勿破皮)，捞出晾至无明水后拌入余料。原种多使用颗粒培养基。棉籽壳麦麸培养基配方：棉籽壳87%，麦麸10%，白糖1%，石灰1%，过磷酸钙1%。配制：将棉籽壳、麦麸、石灰混合为主料，余料溶解于少量水后浇入主料中。边加清水边翻拌至含水量达60%65%（紧握料的指缝中有水泌出而不下滴）。（2）分装原种培养基装入菌种瓶（

4、或其他大口瓶），装量约占瓶高的1/2（非颗粒培养基可装至瓶肩，用锥形棒打一料孔），瓶口擦净，堵棉塞后外包牛皮纸或双层报纸。栽培种培养基一般装入聚丙烯菌种袋，上端套颈圈后如同瓶口包扎法。两端开口的菌种袋可将两端扎活结。要求装地外紧内松，培养料需紧贴瓶壁或袋壁。松散的培养料会导致菌丝断裂及影响对养分、水分的吸收。2.培养基的灭菌原种与栽培种培养基的容器大、装量多，应增加灭菌压力及灭菌时间。高压蒸汽灭菌，一般在152kpa压力（1.5kg/cm2）、温度约128.1条件下，保持灭菌时间12h。若采用常压灭菌，需保持最高温度10h左右，再闷1天或1晚。3.接种灭菌后的原种及栽培种培养基及时运送至无菌环

5、境中，待料温降至约30，进行抢温接种。（1）接原种用接种耙取蚕豆大母种（连同培养基），放于瓶中培养料的孔口处（1支母种约接58瓶原种）。斜面尖端及原来的母种块勿接入。（2）接栽培种用大镊子、接种铲或接种匙取枣大原种，放于瓶或袋中料面上（若两端扎活结的菌种袋，每端都要接入原种）。1瓶原种约接60瓶或25袋栽培种。去弃表面老化菌丝及老种块。堵棉塞或用线绳扎袋口。贴标签，注明菌种名称和接种日期。4.培养接种后，将种瓶（袋）置于适温下培养。菌种瓶初放时，应直立于床架上，当菌丝吃料后，再将其横放。菌种袋根据气温可单层或多层叠放。隔45天转动或调换位置，以利于受温一致，并避免培养料水分的沉积。常检查：及时

6、去除出现杂色、粘液及菌种死亡的瓶或袋。逐渐降温：当菌丝长至料深的1/2时，降温23，以免料温升高，并有壮丝作用。注意菌龄：原种约3040天、栽培种约2030天菌丝长满，再继续培养710天是使用的最好菌龄。六、实验报告与实验汇报及时对实验数据进行整理和分析，按江西农业大学学报格式要求写作小论文。每组同学做好1份实验论文PPT，在全班进行交流汇报，老师进行点评。七、思考题1.记录实验结果，并对出现的异常现象进行原因分析？2.比较原种与栽培种生产过程的异同点3.颗粒为何要进行泡和煮？4.菌种的表面有一块残留的琼脂块，证明该菌种是哪级菌种？5.菌种表面有少许玉米粒或麦粒，证明该菌种是哪级菌种？6.一批

7、菌种在适宜条件下培养了十多天，发现有一瓶菌种块丝毫未萌动，请分析原因？实验二、菌种保藏及复壮一、实验教学目的学会利用自然基质保藏菌种。掌握淘汰衰退菌丝的复壮法，能用数据证明菌种复壮前后的区别。二、实验基本原理创造低温、干燥、缺氧、少营养等不利于菌种生长的一切条件，使其代谢降到休眠状态。菌种经长期人工培养及保藏，难免引起某些优良性状的减弱或丧失，必须及时进行菌种复壮。菌种的使用、保藏、复壮应密切结合。保藏，复壮都是为使用服务的，不会保藏、复壮菌种，就容易使好种退化或者绝种。三、所涉及的课程及知识点在该实验中，涉及到了农学类和生物学类专业教学计划中设置的部分专业基础课、专业课，如微生物学（真菌的保

8、藏和复壮等，）、仪器分析()， 四、仪器设备及实验材料1. 器具：试管、棉塞、装100ml水的三角瓶（有玻璃珠）、装90ml水的试剂瓶、高压锅、接种环、接种箱、精精灯、火柴、干燥器、注射器或吸管等。2. 材料：麦粒、麦麸、母种、三角瓶装的培养基等。五、实验内容与方法（一）实验内容1、复壮（1）制备菌丝悬浮液（2）制平板（3）培养（4）转管2、保藏（1）制备自然基质（2）高压灭菌（3）接种（4）培养（5）保藏（二）方法步骤1.菌种保藏（1）麸皮保藏法将麸皮和自来水按1:1比例拌匀，装入试管，装量约占试管高度的1/3，洗净管壁，堵棉塞，扎捆后进行高压灭菌（152kpa、30min），经无菌检查后接

9、入绿豆粒大的母种。在适温下培养至菌丝长满麸皮。将菌种管置干燥器中放置一个月，换胶塞置冰箱中或低于20干燥条件下保存（12年）。（2）麦粒保藏法保藏菌种的麦粒含水量宜低，大约在25。将籽粒饱满的麦粒洗净，浸泡约5h，加水煮沸15min，使麦粒熟而不破，捞出沥干表面明水，装入试管，装量约占试管高度的2/5。高压蒸汽灭菌（152kpa、1h）。经无菌检查合格后接入菌种，在适温下培养至菌丝长满麦粒。将菌种管置干燥器中放置一个月，换胶塞置冰箱中或低于20干燥条件下保存（12年）。2.菌种复壮（1）制备菌丝悬浮液将待复壮菌种的菌丝体刮下，置入100ml有玻璃珠的无菌水三角瓶中，充分摇荡，使菌丝分散。吸取1

10、0ml菌丝液注入盛有90ml无菌水的小瓶中，摇匀备用。（2）制混合平板将融化的PDA培养基倒入无菌培养皿中，凝固后滴入23滴菌丝液，用无菌涂棒涂抹，使菌丝均匀分散于平板上。（3）培养适温下培养，使菌丝萌发生长。挑取健壮尖端菌丝转管。 （4）检测通过菌丝形态特征的检查及出菇试验等项目测定，符合原菌种性状即可用于生产。六、实验报告与实验汇报及时对实验数据进行整理和分析，按江西农业大学学报格式要求写作小论文。每组同学做好1份实验论文PPT，在全班进行交流汇报，老师进行点评。七、思考题1.记录菌种在麦粒和麦麸基质上的生长情况，并对出现的问题进行分析。2.麦粒与麦麸在处理方法上有哪些不同？3.本实验采用

11、的菌种复壮法的原理是什么？4.试设计一个防治菌种衰退的菌种使用方案实验三、平菇袋栽一、实验教学目的能制作优质发酵料，快速正确的进行袋栽。正确处理发菌过程中的异常现象。二、实验基本原理平菇目前广泛采用的是发酵料塑料袋栽培法。聚乙烯塑料袋具有保温湿、防虫菌、易成功、便管理、可移动、空间利用率高等优点。三、所涉及的课程及知识点在该实验中，涉及到了农学类和生物学类专业教学计划中设置的部分专业基础课、专业课，如微生物学（大型真菌的栽培等，）、仪器分析()， 四、仪器设备及实验材料1. 器具：聚乙烯栽培袋、线绳、铁锨、水桶、大盆、脸盆、喷雾器、大镊子等。2. 材料：棉籽壳、石灰粉、过磷酸钙、栽培种、高锰酸

12、钾等。五、实验内容与方法（一）实验内容（一）制作发酵料（二）袋栽（三）排袋发菌利用课余时间进行观察和管理（二）方法步骤1、发酵料的制作（1）培养料配方籽壳96%，石灰2%，过磷酸钙1%，石膏1。（2）拌料提前一天将棉籽壳摊薄、撒石灰粉、洒水预湿。然后拌入石灰及石膏粉，过磷酸钙溶解少量水后拌入。最后加清水将培养料拌到含水量（挤出12滴水），调pH8.09.0 。（3）发酵建长形堆，纵横打料孔，顶部盖草被，四周围薄膜。料温升至65时保持一天翻堆，共翻23次堆。气温高时可在最后一次翻堆时喷0.1%多菌灵。发好的料呈咖啡色、有香味、pH7.07.5、含水量以指缝泌水而不下滴为宜。2.装袋用宽25285

13、0cm聚乙烯袋，事先扎3道微孔线（中间及距两端67cm处各一道线）一端扎活结，层播法装袋（微孔线处放菌种），上端再扎活结。两端用种量各占总用种量的2/5，中层1/5，多撒于四周。菌袋要装得外紧内松，光滑、饱满、充实。3.排袋发菌 根据气温决定菌袋放置的场所及袋层高度。管理要点是：防杂菌、害虫，料温2025，光线暗，空气新（1周后逐渐加强通风），空气湿度60%70。710天倒换一次菌袋位置。直至白色菌丝长满菌袋，吃透培养料。4.分化加大温差(810)、提高空气湿度（80%85%）、加强通气及光照条件。5.育菇现原基时解口或划口，保持光照及85%90空气湿度，随菇体的长大加强通气条件，直至菌盖边缘变薄时成丛扭收或割收。喷水时，勿强水喷、硬风吹；勿喷珊瑚期以前的菇；勿喷后闷湿。通风时，勿通对流风与干热风，有风天气开背风窗。六、实验报告与实验汇报及时对实验数据进行整理和分析，按江西农业大学学报格式要求写作小论文。每组同学做好1份实验论文PPT，在全班进行交流汇报，老师进行点评。七、思考题1.将自己装的菌袋进行管理，记录各期的生长情况，并对异常现象进行原因分析。 2.培养料在发酵中出现变黑、发粘、发臭现象，是哪些原因导致的？3.子实体生长期，若喷水过多及通风太强的易出现哪些问题？