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1、与医学相关的论文的范文锦集与医学相关的论文的范文锦集诗琪9医学论文知道怎么写吗?下面是我为大家整理整合关于药学论文的范文,欢迎浏览,希望对你有帮助。谈百合固金汤、四逆汤含药血清对TLR2和TLR4比值的影响本项研究所用四逆汤为(伤寒论)之经方,百合固金汤典出明代(慎斋遗书)。此两方之立方均据张仲景之六经辩证。且推其早年之回阳救逆和滋阴养肺成效均与感染性疾病有不解之缘。此两方之药理又恰为中医养阴回阳治则之代表。故选此两方为对照,观察机体感染发生经过中,两者对固有免疫调节之异同,极有可能揭示养阴回阳两种治则对免疫细胞之实际作用。在基于经历的中医临床治则和基于实证的当代免疫药理之间牵起一线姻缘。To
2、ll样受体(Toll-likereceptor,TLR)是表达于巨噬细胞外表的一类形式识别受体(patternrecognitionreceptor,PRR),在固有免疫应答中发挥了重要的作用。研究发现TLR2与TLR4在炎症信号转导途径中并非起协同作用,研究发现TLR2的表达能抑制TLR4信号的过度激活。故揣测TLR2和TLR4可能是养阴回阳两种治则对免疫细胞,尤其对固有免疫细胞的功能产生调节的重要物质基础和药理作用靶标。TLR2和TLR4是识别结核分枝杆菌的主要形式识别受体,此文选取临床治疗结核感染的百合固金汤和对感染性休克起治疗作用的四逆汤为例,观察两方对RAW264.7细胞外表TLR2
3、和TLR4比值能否存在影响,作为深化讨论养阴回阳治则在抗感染作用研究中的引玉之砖。1材料与方法1.1动物、细胞及细菌体重(2.00.2)kg,健康雄性新西兰大白兔10只,由上海中医药大学动物实验中心提供。小鼠巨噬细胞RAW264.7,购自中国科学院上海细胞生物学研究所。结核分枝杆菌株H37Ra,引自上海复旦大学遗传学研究所。1.2主要试剂百合固金汤和四逆汤个饮片,均购自上海养和堂中药饮片;庆大霉素注射液,购自上海中医药大学附属曙光医院;DMEM高糖培养液、胎牛血清、胰酶,均购自Gibco公司;7H9、7H10培养基,均购自BDDifco公司;TRIzol试剂,购自Invitrogen公司;逆转
4、录试剂盒及2PCRMixture,购自TAKARA公司;PCR引物,由上海生工生物工程合成;FITC标记anti-mouseCD282(TLR2)荧光抗体与PE标记anti-mouseCD284(TLR4)荧光抗体及其同型对照,均购自于Biolegend公司;PCR-FluorescentProbing试剂盒,购自凯杰生物工程(深圳)。1.3细菌培养用含10%ADC的7H9培养液,在37恒温培养箱中培养,每周观察1次,一般培养12周可见瓶底有细菌颗粒生长,(1015)d达对数生长期。取对数生长期细菌用不含血清的DMEM培养液重悬,调整细胞密度为1107个/ml。1.4细胞培养小鼠巨噬细胞RAW
5、264.7按常规方法用含有10%胎牛血清的DMEM高糖培养液,在37,5%CO2培养箱中培养,调整细胞密度为1106个/ml,以每孔2ml铺于6孔板中,24h后用于后续实验。1.5含药血清的制备及细胞干涉各方按临床用药量乘以动物的体外表积系数求得相应给药量,经常规方法煎煮,浓缩至10倍剂量置4冰箱备用。10只新西兰大白兔随机分为空白对照组(control,4只)、百合固金汤组(BGD,3只)和四逆汤组(SND,3只)。各用药组按10ml/kg灌服相应药液,对照组灌服等量生理盐水。每日1次,连续4d。于最后一次灌胃1h后心脏采血(最后一次给药前禁食不禁水12h)分离血清,同组动物血清混匀,56灭
6、活30min后,经0.22m微孔滤膜过滤除菌,分装置-80冰箱备用。将RAW264.7细胞密度调整为1106个/ml,每组设3复孔,2ml/孔铺于6孔板常规培养24h后,各用药组参加含10%相应含药血清的DMEM培养液继续培养,对照组参加含10%空白兔血清培养液进行培养,24h后检测各组TLR2、TLR4的mRNA及蛋白表达量。1.6感染模型建立及药物干涉模型组用含10%空白兔血清的培养液重悬沉淀细胞,分别作用24h和48h后进行相关指标的检测。各含药血清组及对照组根据细胞细菌为110的比例参加用10%相应含药血清培养液重悬的细菌,密度为1107个/ml的MtbH37Ra,2ml/孔。1.7指
7、标测定TLR2与TLR4的mRNA表达以RT-QPCR的方法检测,以GAPDH作为内参,结果用2-Ct表示。TLR2与TLR4蛋白表达水平的检测,以FACS检测细胞外表TLR2与TLR4的表达百分比。细胞吞噬、杀菌能力测定,以QPCR检测巨噬细胞内结核分枝杆菌DNA含量:根据凯杰生物工程(深圳)的PCRFluorescentProbing试剂盒讲明做标准曲线后计算各样本中的结核分枝杆菌拷贝数。1.8统计学分析所有数据以xs表示,应用SPSS18.0软件进行统计学处理,多组间比拟采用单因素方差分析,二组间比拟采用t检验,P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1百合固金汤和四逆汤含药血清对TLR
8、2与TLR4mRNA表达的影响及其比值的改变表1结果显示,与对照组相比,百合组RAW264.7细胞TLR2mRNA的表达没有明显差异(P0.05),但TLR4mRNA水平较之上升明显(P0.05),TLR2/TLR4下调明显(P四逆组RAW264.7细胞TLR2及TLR4mRNA的表达都明显上升(P0.05),但TLR2/TLR4较之无明显差异。两用药组之间比拟TLR2、TLR4及TLR2/TLR4的差异均有统计学意义(P0.05)。2.2百合固金汤和四逆汤含药血清对TLR2与TLR4蛋白表达的影响及其比值的改变图1、表2结果表明,与对照组相比,两用药组RAW264.7细胞外表TLR2和TLR
9、4表达百分率均有上升,TLR2增加尤为明显(P0.05),两用药组之间相比可见百合组TLR2百分数较四逆组低(P0.05),但TLR4百分数较四逆组高(P0.05)。表中结果显示,与对照组相比,百合组TLR2/TLR4比值比空白组略低,但不明显(P0.05),而四逆组TLR2/TLR4比值明显高于空白组(P0.05),两用药组相比,四逆组TLR2/TLR4比值较百合组增长更明显(P0.05)。2.3百合固金汤和四逆汤含药血清对巨噬细胞吞噬杀菌能力的影响QPCR法检测巨噬细胞内结核杆菌DNA的表达水平,以细菌数量取lg10作统计处理,图2显示MtbH37Ra与RAW264.7细胞作用24h和48
10、hQPCR法检测到的细菌含量差异,24h结果显示三组之间无明显差异,而48h的结果显示百合组的细菌含量较其他两组明显减少(P0.05)。各用药组24h和48h的前后比拟发现百合组较之对照组和四逆组其杀菌能力明显提高(P0.05),提示百合固金汤抗痨作用可能与调节TLR2/TLR4比值相关。3讨论TLR是一种重要的PRR,能够识别多种病原相关分子形式(PAMP),TLR的研究已涉及到肿瘤,本身免疫性疾病,本身代谢性疾病及各种感染性疾病等多个领域。在目前发现的10种人类TLR中,TLR2与TLR4是其中研究得较为清楚的两种。TLR2可广泛识别多种病原相关分子形式,包括革兰阳性菌的磷壁酸和肽聚糖、分
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