各种培养基的制作方法__2.docx

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1、各种培养基的制作方法_各种培养基的制作方法各种培养基的制作方法配方一萨氏Sabourauds培养基蛋白胨10克琼脂20克麦芽糖40克水1000毫升先把蛋白胨、琼脂加水后，加热，不断搅拌，待琼脂溶解后，参加40克麦芽糖或葡萄糖，搅拌，使它溶解，然后分装，灭菌，备用。1.营养肉汤培养基牛肉膏0.3克蛋白胨1.0克NaCI0.5克水100毫升pH7.0?7.2在烧杯中加水，称取牛肉膏、蛋白胨和NaCI，加热溶化后，调节pH值至7.0?7.2。分装，加棉塞，高压蒸汽灭菌即成。常用于培养细菌。2.营养琼脂培养基在营养肉汤培养基中增加20克琼脂即成。常用于培养细菌。3.肉汁蛋白胨液体培养基牛肉500克蛋白

2、胨10克NaCl5克pH7.1?7.2取新鲜牛肉500克，去净脂肪、筋腱后，绞碎或剁碎，加水1000毫升浸泡，15C下放置12小时或50C下放置半小时。用纱布将肉汁过滤，补足失水。向肉汁中参加蛋白胨和食盐。将肉汁加热，放入苏打碳酸钠至红色，调整pH值。分装，高压蒸汽灭菌。将上述已灭菌的培养基用棉花滤去凝集的蛋白质，制成液体培养基，如需制成固体培养基，可在每100毫升液体中参加2克琼脂，加热溶化后，分装，再次进行高压蒸汽灭菌。常用于培养细菌。4.高氏一号培养基淀粉琼脂培养基可溶性淀粉2克KsHPO0.05克各种培养基的制作方法各种培养基的制作方法MgSQ7f00.05克KNO0.1克NaCI0.

3、05克FeSQ0.001克琼脂2克水100毫升pH7.2?7.4在烧杯中加水95毫升，加热至沸腾，取可溶性溶粉2克，用5毫升水调成糊状，倒入沸水中和匀。再称取其它药品，陆续参加烧杯内待一种药品溶解后，再参加第二种药品待全部药品溶解后，停止加热，补足失水，调pH值至7.2?7.4。分装后，高压蒸汽灭菌。本培养基常用于培养放线菌。5.马铃薯蔗糖培养基马铃薯200克蔗糖10克琼脂20克水1000毫升自然pH称取200克马铃薯片，加水1000毫升，煮沸半小时，用纱布过滤，补足失水。在上述滤汁中参加10克蔗糖、20克琼脂，加热使琼脂熔化。分装后，高压蒸汽灭菌。常用于培养酵母菌。6.麦芽汁培养基将从啤酒厂

4、买来加有啤酒花的麦芽汁，装入锥形瓶中，加塞高压蒸汽灭菌。常用于培养酵母菌。7.察氏培养基NaNQ2克&HPQ1克KCl0.5克MgSQ0.5克各种培养基的制作方法各种培养基的制作方法FeSQ0.01克蔗糖30克琼脂15?20克水1000毫升自然pH分装，加棉塞，高压蒸汽灭菌。常用于培养霉菌。8.豆芽汁葡萄糖或蔗糖培养基黄豆芽100克葡萄糖50克琼脂15克水1000毫升称取新鲜黄豆芽100克，放入烧杯中，加1000毫升水，煮沸30分钟，用纱布过滤，补足失水。再加葡萄糖或蔗糖50克，琼脂15克，加热至融化，补足失水。分装，加棉塞，高压蒸汽灭菌。常用于培养霉菌。9.伊红美蓝培养基E、MB培养基乳糖1

5、0克蛋白胨5克NaCI5克&HPQ2克2%尹红水溶液20毫升0.35%美蓝水溶液20毫升琼脂20克水1000毫升pH7.21.配制溶液向容器内参加所需水量的一部分，根据培养基的配方，称取各种原料，依次参加使其溶解，最后补足所需水分。对蛋白胨、肉膏等物质，需加热溶解，加热经过所蒸发的水分，应在全部原料溶解后加水补足。配制固体培养基时，先将上述已配好的液体培养基煮沸，再将称好的琼脂参加，继续加各种培养基的制作方法各种培养基的制作方法热至完全融化。并不断搅拌，以免琼脂糊底烧焦。2.调节pH值用pH试纸或pH电位计、氢离子浓度比色计测试培养基的pH值，如不符合需要，可用10%HCI或10%NaQ进行调

6、节，直到调节到配方要求的pH值为止。3.过滤用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。用纱布过滤时，最好折叠成六层，用滤纸过滤时，可将滤纸折叠成瓦棱形，铺在漏斗上过滤。4.分装已过滤的培养基应进行分装。假如要制作斜面培养基，须将培养基分装于试管中。假如要制作平板培养基或液体、半固体培养基，则须将培养基分装于锥形瓶内。分装时，一手捏松弹簧夹，使培养基流出，另一只手握住几支试管或锥形瓶，依次接取培养基。分装时，注意不要使培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染。装入试管的培养基量，视试管和锥形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培养基时，每只15X150毫米的试管，约装3?4毫升(1/4?1/

7、3试管高度)，如制作深层培养基，每只20X220毫米的试管约装12?15毫升。每只锥形瓶装入的培养基，一般以其容积的一半为宜。5.加棉塞分装完毕后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气，避免污染。棉塞应采用普通新鲜、枯燥的棉花制作，不要用脱脂棉，以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。制作棉塞时，要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度，揪取手掌心大小一块，铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中，用右手食指插入棉花中部，同时左手食指与姆指稍稍紧握，就会构成1个长棒形的棉塞。棉塞作成后，应迅速塞入管口或瓶口中，棉塞应紧贴内壁不留缝隙，以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松，塞好后，以手提棉塞、管

8、、瓶不下落为适宜。棉塞的2/3应在管内或瓶内，上端露出少许棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札，准备灭菌。6.制作斜面培养基和平板培养基培养基灭菌后，如制作斜面培养基和平板培养基，须趁培养基未凝固时进行。(1)制作斜面培养基。在实验台上放1支长0.5?1米左右的木条，厚度为1厘米左右。将试管头部枕在木条上，使管内培养基自然倾斜，凝固后即成斜面培养基。各种培养基的制作方法各种培养基的制作方法 (2)制作平板培养基。将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下棉塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培养皿盖，右手迅速将培养基倒入培养皿中，每皿约倒入10毫升，以铺满皿底为度。铺放培养基后放置15分钟左右，待培养基凝固后，再5个培养皿一叠，倒置过来，平放在恒温箱里，24小时后检查，如培养基末长杂菌，即可用来培养微生物。改进的Fries氏液体培养液：蔗糖30g、酒石酸铵5g、NH4NO30.5g、KH2PO41g、MgS04?7H2O0.5g、CaCI20.1g、酵母浸汁0.5g、蒸馏水1000mL